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Progresses of mycobacteriophage-based Mycobacterium tuberculosis detection
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作者 ZICHEN LIU SIYAO GUO +3 位作者 MENGZHI JI KAILI SUN ZHONGFANG LI XIANGYU FAN 《BIOCELL》 SCIE 2020年第4期683-694,共12页
Tuberculosis(TB)remains a major cause of morbidity and mortality worldwide,particularly in developing countries.A rapid and efficient method for TB diagnosis is indispensable to check the trend of tuberculosis expansi... Tuberculosis(TB)remains a major cause of morbidity and mortality worldwide,particularly in developing countries.A rapid and efficient method for TB diagnosis is indispensable to check the trend of tuberculosis expansion.The emergence of drug-resistant bacteria has increased the challenge of rapid drug resistance tests.Due to its high specificity and sensitivity,bacteriophage-based diagnosis is intensively pursued.In this review,we mainly described mycobacteriophage-based diagnosis in TB detection,especially two prevalent approaches:fluorescent reporter phage and phage amplified biologically assay(PhaB).The rationale of reporter phage is that phage carrying fluorescent genes can infect host bacteria specifically.Phage amplified biological assay based on the principle that phages can infect the live Mycobacterium tuberculosis in the specimen under suitable conditions and produce plaques.Other phage-based diagnostic methods,such as a combination of the amplified biologically assay and nucleic acid amplification or lateral flow assays,are also actively explored.This review will help us improve the understanding of mycobacteriophages in TB detection and better promote the development of the rapid diagnosis of M.tuberculosis. 展开更多
关键词 MYCOBACTERIOphage TUBERCULOSIS DIAGNOSIS REPORTER phage phage amplified biologically ASSAY
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弯曲菌宽谱烈性噬菌体生物学特性、全基因组测序分析及初步应用
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作者 王娟 刘俊辉 +12 位作者 宋时萍 黄秀梅 李彦 刘娜 赵建梅 刘燕鑫 段笑笑 高玉斌 王琳 赵格 张喜悦 王君玮 曲志娜 《中国动物检疫》 CAS 2024年第11期111-117,128,共8页
为探索控制弯曲菌污染的新途径,以弯曲菌NCTC12662为宿主菌,从养殖场鸡粪便中分离纯化得到弯曲菌噬菌体,并对其进行电镜形态特征观察、生物学特性测定与基因组学分析,同时采用棋盘法,测试噬菌体与抗生素的联合应用效果。结果显示,从山... 为探索控制弯曲菌污染的新途径,以弯曲菌NCTC12662为宿主菌,从养殖场鸡粪便中分离纯化得到弯曲菌噬菌体,并对其进行电镜形态特征观察、生物学特性测定与基因组学分析,同时采用棋盘法,测试噬菌体与抗生素的联合应用效果。结果显示,从山东省胶东地区养鸡场粪便中分离到1株噬菌体P-61。透射电镜下显示该噬菌体颗粒具有1个直径约为102.6 nm的二十面体头部和1个长度约为112.9 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科;裂解谱为48.48%,裂解效价为5.5×10^(11)pfu/mL,感染复数为0.01;一步生长曲线显示潜伏期为20 min,裂解期约为130 min,裂解量为240 pfu/cell;最适宜生长温度为42℃,pH耐受性较强,在pH 5~9范围内效价较稳定。噬菌体基因组全长为130425 bp,G+C含量为26.13%,共有176个开放阅读框、3个tRNA,软件预测基因组中不含毒力基因和抗生素耐药基因。利用棋盘法测得,当噬菌体为10^(6) pfu/mL时,环丙沙星最低浓度降至1/8 MIC,联合用药组具有明显的联合杀菌效果。综上可知,得到的噬菌体P-61具有效价高、裂解谱宽及对环境适应能力强等生物学特性,且基因组信息清晰,能与抗生素联合应用发挥协同作用,具有消毒、净化等临床应用可能性。本研究为噬菌体制剂的开发利用提供了生物资源。 展开更多
关键词 弯曲菌 噬菌体 生物学特性 全基因组测序 联合杀菌
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沙门菌噬菌体YT90的分离鉴定及生物学特性分析
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作者 李刚 董雨豪 +2 位作者 黄昊 孙千惠 刘永杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期306-314,共9页
[目的]本文旨在分离针对肠炎沙门菌的烈性噬菌体并研究其生物学特性。[方法]从山东烟台某鸭场采集58份粪便样品,以鸭源肠炎沙门菌sdc-11为宿主分离噬菌体,并对噬菌体分离株进行形态学观察,对其温度和pH值稳定性、感染复数(MOI)、一步生... [目的]本文旨在分离针对肠炎沙门菌的烈性噬菌体并研究其生物学特性。[方法]从山东烟台某鸭场采集58份粪便样品,以鸭源肠炎沙门菌sdc-11为宿主分离噬菌体,并对噬菌体分离株进行形态学观察,对其温度和pH值稳定性、感染复数(MOI)、一步生长曲线进行测定和分析,测试其对71株不同血清型沙门菌的裂解谱,以及对沙门菌sdc-11生物被膜形成的抑制和对成熟生物被膜的清除作用,最后进行基因组测序分析。[结果]分离获得1株长尾噬菌体,命名为YT90。该噬菌体在30~60℃和pH值4~10的条件下,均表现出较好的增殖能力,最佳MOI值为10^(-5),潜伏期10 min,裂解期90 min,裂解量为每细胞278 PFU;可裂解66.7%(14/21)肠炎沙门菌、66.7%(28/42)鼠伤寒沙门菌和75.0%(3/4)鸡白痢沙门菌;在96孔细胞板上,YT90具有抑制沙门菌sdc-11生物被膜形成的潜力,并能有效清除成熟生物被膜;全基因组测序发现,YT90的基因组全长121240 bp,不含已知的毒力因子和耐药相关基因,不编码整合酶;基于末端酶大亚基构建的进化树分析表明,YT90与沙门菌噬菌体GRNsp50关系最近,属于根西病毒亚科(Guernseyvirinae)新泽西病毒属(Jerseyvirus)。[结论]从鸭场粪便样品中分离获得1株烈性噬菌体YT90,可裂解多种血清型沙门菌,耐受性强、潜伏期短、裂解量大,在防治沙门菌感染方面有较好的临床应用潜力。 展开更多
关键词 沙门菌 噬菌体 生物被膜 生物学特性
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1株李斯特菌噬菌体的分离、保存及生物学特性研究 被引量:1
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作者 刘凌云 毛盼 +5 位作者 陈晋妮 李玲玲 王艳 宋敬东 陈峥宏 叶长芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期435-441,共7页
目的从食品销售环境样本中分离李斯特菌噬菌体,并对分离获得的噬菌体进行电镜形态观察、宿主谱及生物学特征分析。方法采用双层琼脂平板法和点滴法,以分离的英诺克李斯特菌Lin08作为宿主菌,成功分离并鉴定出一株烈性噬菌体LMLPA5,使用... 目的从食品销售环境样本中分离李斯特菌噬菌体,并对分离获得的噬菌体进行电镜形态观察、宿主谱及生物学特征分析。方法采用双层琼脂平板法和点滴法,以分离的英诺克李斯特菌Lin08作为宿主菌,成功分离并鉴定出一株烈性噬菌体LMLPA5,使用透射电镜观察噬菌体形态,并测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线以及理化稳定性,同时探索噬菌体在4℃、-20℃及-80℃下的保存效果。结果分离获得的LMLPA5噬菌体属于肌尾噬菌体科,其形成的噬菌斑清晰透明,周围无晕环。该噬菌体为广谱的李斯特菌烈性噬菌体,能裂解多个李斯特菌种及单增李斯特菌多个血清型菌株。LMLPA5的最佳MOI为0.1,潜伏期为10 min,平均裂解量为95.2 PFU/cell。LMLPA5对高温较敏感,在70℃暴露1 h即完全失活,而在4℃~40℃作用32 h以上噬菌体仍能保持稳定。在pH为4~10 LMLPA5的活性不受影响,经紫外线照射60 min后噬菌体被完全灭活。LMLPA5对氯仿不敏感,为无囊膜型噬菌体。噬菌体在4℃及-80℃的保存效果较好,可稳定保存8个月以上。结论本研究获得的1株广谱李斯特菌肌尾噬菌体LMLPA5具有较强的裂解能力、抵抗力和稳定性,为进一步的应用提供了基础。 展开更多
关键词 李斯特菌噬菌体 裂性噬菌体 生物学特性
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一株具有多种毒力基因的粪肠球菌噬菌体的研究分析 被引量:1
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作者 常军帅 赵玉 +3 位作者 段付霜 屈勇刚 梁晏 李娜 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期182-188,共7页
以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,... 以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,头部呈对称多面体,直径约66 nm,将其命名为vB_Eco T_PSL22(简称PSL22);只裂解其宿主菌,核酸类型为dsDNA;最佳感染复数为0.1,裂解量约为52 PFU/cell;在p H4.0~12.0时活性稳定,能耐受60℃左右高温。对小鼠治愈率为33.33%(2/6),含有2个耐药基因(Acc和aac(3)-Ⅳ)和4种毒力基因(gelE、cylA、ace和efaA)。通过本次试验,可为临床型乳房炎奶牛乳房中噬菌体的多样性研究提供参考,也可为研究奶牛乳房中的微生态系统提供依据。 展开更多
关键词 粪肠球菌 噬菌体 生物学特性 耐药基因 毒力基因
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噬菌体Pu29特性分析及其在沙门氏菌磁分离富集中的应用
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作者 丁一峰 张宇 +3 位作者 刘茜 黄晨曦 邵彦春 王小红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第2期163-171,共9页
以1株鸡白痢沙门氏菌噬菌体Pu29为研究对象,全面分析其生物学及基因组特性,将其作为识别元件,建立基于噬菌体Pu29的沙门氏菌磁分离富集技术。该噬菌体属于轮状病毒属(Roufvirus),具有二十面体的头部和不可收缩的长尾部。Pu29具有较宽的... 以1株鸡白痢沙门氏菌噬菌体Pu29为研究对象,全面分析其生物学及基因组特性,将其作为识别元件,建立基于噬菌体Pu29的沙门氏菌磁分离富集技术。该噬菌体属于轮状病毒属(Roufvirus),具有二十面体的头部和不可收缩的长尾部。Pu29具有较宽的宿主谱,15min时对宿主细胞的吸附率为88.67%,潜伏期为30min,裂解期为180 min,裂解量为115.74 PFU/cell。同时Pu29具有较好的耐热性(30~60℃)和pH值耐受性(pH 4~11)。Pu29基因组由45715bp(GC含量46.08%)和81个开放阅读框组成,包括18个具有已知功能的阅读框,不携带编码毒性或抗性因子的基因。通过酰胺反应将噬菌体Pu29与羧基化的纳米磁珠偶联制备探针PhagePu29-MBs。使用25μg探针与沙门氏菌在37℃孵育20min时,对沙门氏菌的捕获效率最高可达到83.93%,最低捕获细菌浓度为45CFU/mL。采用透射电镜观察到PhagePu29-MBs能够特异性地捕获沙门氏菌。在加标样品中,PhagePu29-MBs分离富集沙门氏菌的捕获效率最高能达到92.92%。该方法分离富集沙门氏菌的时间大约为30min。因此,本研究基于噬菌体Pu29建立了一种快速、特异性强的沙门氏菌磁分离方法,可为基于噬菌体快速分离富集食源性病原菌奠定研究基础。 展开更多
关键词 沙门氏菌 噬菌体 生物学特性 磁分离技术 快速分离富集
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1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析
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作者 侯宫明珠 周海琴 +9 位作者 余星雨 李娜娜 李扬 屈勇刚 李彦芳 梁晏 严多 杨舒涵 邱正青 陈斯奇 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2047-2057,共11页
【目的】多重耐药病原菌的出现对公共卫生安全构成严重威胁,本试验拟对1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行生物学特性和基因组特征分析,为寻找可用于防治肺炎克雷伯菌感染的噬菌体制剂提供参考。【方法】以羊源多重耐药肺炎... 【目的】多重耐药病原菌的出现对公共卫生安全构成严重威胁,本试验拟对1株羊源多重耐药肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行生物学特性和基因组特征分析,为寻找可用于防治肺炎克雷伯菌感染的噬菌体制剂提供参考。【方法】以羊源多重耐药肺炎克雷伯菌分离株YH-2为宿主菌,采用双层琼脂平板法从粪污样品中分离纯化噬菌体,通过透射电镜观察其形态;测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、热稳定性、酸碱耐受性等生物学特性;基于全基因组测序对其基因组特点进行分析。【结果】试验成功分离到1株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体,命名为vB_KpnP_PYH-2(简称PYH-2),电镜观察发现PYH-2属于短尾噬菌体科,其噬菌斑中心透亮,周围有晕圈。随着培养时间的延长,晕圈会向四周扩散。噬菌体PYH-2不仅可以裂解1株羊源肺炎克雷伯菌,还能裂解5株奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌。噬菌体PYH-2的最佳MOI为0.001,潜伏期为15 min,爆发期为10 min,裂解量为63 PFU/cell;在40~50℃和pH 4.0~12.0的环境下均能保持稳定活性。噬菌PYH-2基因组全长45958 bp,GC含量为51.86%,不含耐药基因及毒力基因;全基因组中包含52个开发阅读框(ORFs),只有21个为已知功能基因,其中尾部相关蛋白有6个。【结论】本研究分离到1株潜伏期短、生物特性稳定、能高效杀菌的噬菌体,可作为裂解动物源肺炎克雷伯菌的噬菌体候选毒株,为噬菌体防治多重耐药性肺炎克雷伯菌感染奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 噬菌体 生物学特性 全基因组分析
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噬菌体防治食品中食源性致病菌的研究进展
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作者 王冰 李阳 +3 位作者 黄安琪 刘莉 李玉保 王雷 《食品研究与开发》 CAS 2024年第15期204-209,共6页
食源性致病菌是导致食品安全问题的重要来源,严重威胁人类身体健康与生命安全,随着全球范围内耐药性菌的出现,迫切需要新型的防治策略。噬菌体因其高效特异识别并裂解宿主菌的特性,成为可替代传统抑菌剂和抗生素的代替品之一。因此,该... 食源性致病菌是导致食品安全问题的重要来源,严重威胁人类身体健康与生命安全,随着全球范围内耐药性菌的出现,迫切需要新型的防治策略。噬菌体因其高效特异识别并裂解宿主菌的特性,成为可替代传统抑菌剂和抗生素的代替品之一。因此,该文概述噬菌体防治食源性细菌的优势,详细总结噬菌体在防控各类食品中大肠杆菌、沙门氏菌、单核增生李斯特菌等食源性致病菌的研究现状,并且对噬菌体在食品领域中的发展方向做出展望,为噬菌体在食品安全领域应用前景提供参考。 展开更多
关键词 噬菌体 食源性细菌 食品安全 生物防治 防治策略
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污水中肺炎克雷伯氏菌噬菌体的分离及其生物学特征、基因组分析
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作者 邵瑞瑞 周青帅 +5 位作者 崔古贞 廖健 程玉梅 官志忠 齐晓岚 洪伟 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期320-331,共12页
为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱... 为探究噬菌体作为治疗肺炎克雷伯菌感染的新型潜在疗法的可能性,本研究采用双层平板法将医院周边污水中3株肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体进行分离纯化,透射电镜观察噬菌体形态结构,并进一步分析噬菌体裂解谱、最佳感染复数、生长曲线和酸碱耐受性等生物学特征,同时通过测序技术获得噬菌体全基因组信息并注释分析.实验结果表明,KP-ZS3为肌尾科噬菌体,KP-ZS4为短尾科噬菌体,KP-ZS6为长尾科噬菌体,且KP-ZS4的感染潜伏期稍长,KP-ZS3耐酸碱能力较强,KP-ZS6的裂解能力为3株噬菌体中最强、裂解谱较宽.3株噬菌体的外壳蛋白组分大小均在33~55 kD之间.此外全基因组分析发现KP-ZS3、KP-ZS62株噬菌体的基因组大小均在100 kb以上,噬菌体KP-ZS4的基因组相对较小(40608 bp).共线性分析显示噬菌体KP-ZS3与phiEap-3、Kp15高度相似;KP-ZS6与0507KN21、vB_EcoM_KWBSE43-6高度相似.KP-ZS4与Tyrion、TL-2011b相似度相对较低,序列一致性为76.77%、76.89%.以上结果表明,这3株噬菌体具有独特的生物学特性和基因组特征,它们在肺炎克雷伯菌感染治疗方面展现出不同的潜力和优势,特别是KP-ZS6因其裂解能力强和广泛的裂解谱,以及KPZS3因其强耐酸碱性,可能成为未来抗菌治疗的备用资源,这些发现为开发新型抗菌策略和治疗肺炎克雷伯菌感染提供了新的信息基础. 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 噬菌体 生物学特征 基因组分析 耐药菌治疗
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产单核细胞李氏杆菌噬菌体的应用研究进展
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作者 崇倩 赵学慧 +2 位作者 曹青 薛惠文 苟惠天 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1819-1826,共8页
产单核细胞李氏杆菌是一种常见的食源性致病菌,其致死率高达30%。该菌能够在高盐度、高酸度和冷藏温度等极端条件下存活和增殖,对人畜健康构成了重大威胁。然而抗生素的滥用导致药物残留和多重耐药性等问题的出现,从而使得李氏杆菌病的... 产单核细胞李氏杆菌是一种常见的食源性致病菌,其致死率高达30%。该菌能够在高盐度、高酸度和冷藏温度等极端条件下存活和增殖,对人畜健康构成了重大威胁。然而抗生素的滥用导致药物残留和多重耐药性等问题的出现,从而使得李氏杆菌病的防治异常困难。噬菌体相关生物制剂的发展为解决以上问题提供了可行方案。本文综述了李氏杆菌噬菌体在食品保鲜、生物检测、基因工程等方面的应用,同时还探讨了噬菌体与宿主之间的互作机制,旨在为李氏杆菌噬菌体在食品污染防控中提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 李氏杆菌 噬菌体 食品污染 生物检测
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一株裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的噬菌体及其生物学特性与全基因组分析
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作者 张雪丽 于浩淼 +3 位作者 闫振贵 杨少华 张亮 杨宏军 《山东农业科学》 北大核心 2024年第3期132-138,共7页
本研究旨在分离能够高效裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体,为噬菌体生物制品的研制提供候选材料。以耐氨苄西林金黄色葡萄球菌为宿主菌,用双层平板法分离噬菌体,通过透射电子显微镜观察噬菌体形态,并对其进行生物学特性分析及全基因组测... 本研究旨在分离能够高效裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体,为噬菌体生物制品的研制提供候选材料。以耐氨苄西林金黄色葡萄球菌为宿主菌,用双层平板法分离噬菌体,通过透射电子显微镜观察噬菌体形态,并对其进行生物学特性分析及全基因组测序分析。结果分离得到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,效价达2.75×10^(10)PFU/mL,命名为SP688。该噬菌体具有长的不收缩尾巴,属长尾噬菌体科,对7株耐氨苄西林金葡菌均有裂解效果,最佳感染复数为1,可在10 h内抑制细菌生长,在温度-20~54℃范围和pH值3~11之间活性稳定,对紫外线敏感。全基因组分析显示,SP688基因组为环状DNA,全长45499 kb,GC含量为34.1%;预测到64个开放阅读框(ORFs),其中19个(29.69%)被预测功能。该噬菌体是一株新型裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的广谱噬菌体,可为噬菌体治疗提供材料。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 噬菌体 形态 生物学特性分析 全基因组分析
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耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abgy202162的分离、鉴定及治疗效果评价
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作者 田询 谭文才 +4 位作者 杨碧 刘翔 禹文峰 齐晓岚 江银辉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第10期1742-1751,共10页
目的从地下污水中分离出一株鲍曼不动杆菌噬菌体并对其进行研究,为噬菌体治疗鲍曼不动杆菌感染提供理论基础。方法以鲍曼不动杆菌GY-6为宿主菌,采用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其进行生物学特性检测、治疗效果评价及遗传信息分析。结... 目的从地下污水中分离出一株鲍曼不动杆菌噬菌体并对其进行研究,为噬菌体治疗鲍曼不动杆菌感染提供理论基础。方法以鲍曼不动杆菌GY-6为宿主菌,采用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其进行生物学特性检测、治疗效果评价及遗传信息分析。结果分离到鲍曼不动杆菌噬菌体Abgy202162。透射电镜(TEM)分析显示,Abgy202162的形态呈二十面体结构。生物学特性分析表明其最佳感染复数为1,潜伏期为5 min,暴发量大小约为每个细胞520 PFU。此外,Abgy202162在不同浓度的三氯甲烷以及不同pH水平和温度下保持稳定。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,其含有10种蛋白质,分子量为15~100 ku。Abgy202162的双链DNA基因组由40889 bp组成,G+C含量为38.85%,包含47个开放阅读框(ORFs),其中26个ORFs具有特异性功能,未发现毒力相关基因或抗生素耐药基因。系统发育分析显示,Abgy202162是自转录噬菌体科,拜耶林克噬菌体亚科,弗留纳病毒属的一个新的噬菌体。Abgy202162在大蜡螟幼虫体内模型中表现出了治疗鲍曼不动杆菌感染的能力。结论噬菌体Abgy202162对环境耐受性强、安全性高,提示其有望成为抗生素的代替治疗剂用于治疗鲍曼不动杆菌引起的感染。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 噬菌体 生物学特性 基因组分析 治疗效果评价 大蜡螟幼虫
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大肠埃希菌裂解性噬菌体vB_EcoP-R1的特性及其抗细菌生物膜活性分析
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作者 石志新 李泽轩 +4 位作者 张立涛 洪欣 刘径 赵哲 刘根焰 《临床检验杂志》 CAS 2024年第4期261-266,共6页
目的从医院污水中分离大肠埃希菌特异性噬菌体,分析其生物学特性,并检测其对细菌生物膜的裂解作用。方法通过双层琼脂平板法分离纯化噬菌体,透射电镜观察其形态,并测定其一步生长曲线、体外裂解曲线、温度及酸碱稳定性。全基因测序分析... 目的从医院污水中分离大肠埃希菌特异性噬菌体,分析其生物学特性,并检测其对细菌生物膜的裂解作用。方法通过双层琼脂平板法分离纯化噬菌体,透射电镜观察其形态,并测定其一步生长曲线、体外裂解曲线、温度及酸碱稳定性。全基因测序分析噬菌体基因组组成及特性,结晶紫染色法评估噬菌体对宿主菌生物膜的清除效果。结果从医院污水中新分离1株大肠埃希菌特异性噬菌体,命名为vB_EcoP-R1;透射电镜下显示形态与尾病毒目足病毒科噬菌体成员相似,在-20~50℃的温度范围内以及在pH值5.0~11.0酸碱条件下能稳定存活。vB_EcoP-R1基因组全长为40875 bp,GC含量为49.94%,不含毒力基因和耐药基因。vB_EcoP-R1能够裂解临床分离的大肠埃希菌,且显示高度种属特异性。噬菌体作用于宿主菌预成形生物膜4 h后,对生物膜的清除率达到80.16%。结论vB_EcoP-R1是1株新的大肠埃希菌特异性噬菌体,裂解性强且种属特异性高,可裂解宿主菌已形成的生物膜,有望用于大肠埃希菌感染的替代治疗。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 噬菌体 生物学特性 噬菌体治疗 生物膜
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肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定及vB_KpnS_Yuri1的生物学特性研究
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作者 孙续 中拉毛草 +1 位作者 杨峰 杨明俊 《中兽医医药杂志》 CAS 2024年第3期1-9,F0002,共10页
分离并鉴定肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体,分析所分离肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性。以肺炎克雷伯菌ATCC700603标准株作为宿主菌,从甘肃、宁夏、青海、四川等地多个养殖场污水中分离裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体;分析肺炎克雷伯菌噬菌体Yuri... 分离并鉴定肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体,分析所分离肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性。以肺炎克雷伯菌ATCC700603标准株作为宿主菌,从甘肃、宁夏、青海、四川等地多个养殖场污水中分离裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体;分析肺炎克雷伯菌噬菌体Yuri1的生物学特性,用透射电子显微镜观察其形态;通过酶切分析核酸类型;采用双层平板法测定最佳感染复数、一步生长曲线、温度和pH稳定性及紫外线敏感性;通过点滴试验测定裂解谱;采用平板计数法评价噬菌体体外抗菌活性;基于全基因组测序分析其安全性。结果显示,共分离裂解性噬菌体6株,其中KlebsiellaphagevB_KpnS_Yuri1属有尾目长尾噬菌体,核酸类型为双链DNA,最佳感染复数为0.0001;一步生长曲线显示,KlebsiellaphagevB_KpnS_Yuri1的潜伏期为15min,裂解期为15min;在-20℃~60℃或pH值为5.0~10.0时,KlebsiellaphagevB_KpnS_Yuri1仍具有较高的滴度,且呈现紫外线耐受;点滴试验表明,KlebsiellaphagevB_KpnS_Yuri1对68株奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌中的7株具有裂解活性,而对粪肠球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均无裂解活性;在LB肉汤培养基和牛奶介质中,噬菌体在2h内的杀菌率均达到99.99%;基于全基因组分析,KlebsiellaphagevB_KpnS_Yuri1基因组全长50116bp,共有77个开放阅读框,未发现与耐药、毒力及溶原相关基因。分离的肺炎克雷伯菌噬菌体KlebsiellaphagevB_KpnS_Yuri1最佳感染复数低、潜伏期短,最适温度和pH范围广且耐受紫外线,体外抗菌活性强,在基因水平上具有安全性,可为进一步研究噬菌体鸡尾酒疗法及裂解酶治疗肺炎克雷伯菌引发的奶牛乳腺炎提供理论依据和技术支撑。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 噬菌体 分离 鉴定 生物特性
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大肠杆菌烈性噬菌体vB_EcoM_JN03的分离、鉴定及其抑菌效果研究
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作者 李天娇 舒梅 +4 位作者 吴国平 钟婵 潘红 赵远洋 张玲 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期713-725,共13页
【目的】大肠杆菌O157:H7(E.coli O157:H7)是一种重要的食源性致病菌。抗生素的不当使用导致E.coli O157:H7多重耐药和泛耐药成为一个日益严重的问题,研究其天然杀菌剂——烈性噬菌体,对于防控多重耐药E.coli O157:H7污染具有理论意义... 【目的】大肠杆菌O157:H7(E.coli O157:H7)是一种重要的食源性致病菌。抗生素的不当使用导致E.coli O157:H7多重耐药和泛耐药成为一个日益严重的问题,研究其天然杀菌剂——烈性噬菌体,对于防控多重耐药E.coli O157:H7污染具有理论意义和实践应用价值。【方法】以多重耐药E.coli O157:H7为宿主菌,采用双层琼脂平板法,从污水中分离烈性噬菌体,对其生物学特性进行表征和全基因组序列分析,并评价该噬菌体应用于食品中对E.coli O157:H7的抑菌效果。【结果】成功分离纯化了一株可裂解E.coli O157:H7的噬菌体,命名为vB_EcoM_JN03(GenBank登录号:OR885871)。vB_EcoM_JN03属于有尾噬菌体目,肌尾病毒科;其最佳感染复数(MOI)为0.01,潜伏期为30 min,120 min后到达平稳期,裂解量80 PFU/cell;其在30~60℃和pH 4~12范围内效价稳定。vB_EcoM_JN03的基因组为双链DNA,全长158142 bp,G+C含量44.63%,编码206个开放阅读框(ORF),不含已知编码的毒力、抗生素耐药和溶源性基因。vB_EcoM_JN03在4℃下可显著抑制牛奶和牛肉样品中污染的E.coli O157:H7。【结论】经分离、鉴定的E.coli O157:H7烈性噬菌体vB_EcoM_JN03对宿主菌具有良好的抑制作用,有望作为一种天然杀菌剂防控E.coli O157:H7污染食品。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 烈性噬菌体 生物学特性 生物杀菌剂
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一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果
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作者 王晋宇 张凯川 +3 位作者 王芮杰 高铎 蒋祺丰 贾坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期727-738,共12页
旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分... 旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 生物学特性 基因组学 抗生素联合应用
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一株广谱沙门菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性
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作者 刘炜 马嘉怡 +4 位作者 耿浩宇 谢添 苗苏南 廖宗杰 耿士忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4061-4068,共8页
噬菌体能够特异性裂解靶向细菌,被认为是抗生素有效替代者。为了筛选到有效裂解沙门菌的噬菌体,为探索新的沙门菌防控方法提供理论依据和参考。本研究用丝裂霉素C诱导并分离纯化沙门菌噬菌体,通过噬菌斑与电子显微镜观察、宿主谱测定、... 噬菌体能够特异性裂解靶向细菌,被认为是抗生素有效替代者。为了筛选到有效裂解沙门菌的噬菌体,为探索新的沙门菌防控方法提供理论依据和参考。本研究用丝裂霉素C诱导并分离纯化沙门菌噬菌体,通过噬菌斑与电子显微镜观察、宿主谱测定、生物学特性测定以及对该噬菌体的全基因组进行测序分析评估该噬菌体。结果显示:成功诱导出1株广谱的长尾沙门菌噬菌体,命名为SP18-108,该噬菌体能够裂解至少14种不同血清型沙门菌;在30~40℃及pH 4~12条件下活性稳定;全基因组分析结果显示,该噬菌体全长为43250 bp,GC%含量为49.96%,已知功能编码序列(coding sequences,CDS)占比为52%。系统发育进化树分析表明,该噬菌体属于长尾病毒科(Siphoviridae)。本研究诱导过程中分离出1株不具有溶源基因的广谱沙门菌噬菌体,为进一步研究沙门菌抗菌剂提供了良好的材料。 展开更多
关键词 沙门菌 噬菌体 生物学特性 全基因组分析
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1株肺炎克雷伯菌噬菌体kp6的生物学特性及全基因组分析
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作者 荣睿璠 郭海悦 +8 位作者 胡鹏程 左君豪 张东超 郭志良 李颖 张宇欣 王心如 赵瑞利 刘鼎阔 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3990-4001,共12页
【目的】探究从污水样品中分离到的1株肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组特征,为临床肺炎克雷伯菌感染的防控和开发噬菌体相关新型替抗产品提供基础。【方法】以肺炎克雷伯菌TJAU-K11为宿主菌,采用双层平板法从污水样品中分离... 【目的】探究从污水样品中分离到的1株肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组特征,为临床肺炎克雷伯菌感染的防控和开发噬菌体相关新型替抗产品提供基础。【方法】以肺炎克雷伯菌TJAU-K11为宿主菌,采用双层平板法从污水样品中分离纯化获得肺炎克雷伯菌噬菌体。通过透射电镜观察噬菌体形态,测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线,评估噬菌体稳定性,探究其对肺炎克雷伯菌TJAU-K11的生物被膜形成的影响以及裂解效果,同时进行全基因组测序,了解噬菌体的生物学特性及全基因组特征。【结果】从污水样品中成功分离获得3株肺炎克雷伯菌噬菌体,分别命名为kp4、kp5和kp6,透射电镜观察结果显示,噬菌体kp6是具有正二十面体形态的短尾噬菌体。一步生长曲线结果显示,噬菌体kp6的潜伏期为20 min,爆发期为30 min。该噬菌体在―20~50℃、pH 4.0~10.0和紫外照射12 min内噬菌体效价保持稳定。单一噬菌体的体外抑菌试验结果显示,不同MOI噬菌体kp6组的D 600 nm值在7 h内始终<0.4;噬菌体鸡尾酒制剂的体外抑菌试验结果显示,MOI为1、100时,噬菌体kp6在12 h内的D 600 nm值<0.1。不同MOI噬菌体kp6组宿主菌生物被膜形成量均极显著低于阳性对照组(P<0.01),单一噬菌体kp6与噬菌体鸡尾酒制剂均能裂解宿主菌生物被膜。全基因组测序表明噬菌体kp6基因组为双链环状DNA,全长40971 bp,GC含量为53.13%,49个编码序列中有23个编码已知功能的蛋白,其中包括短尾噬菌体吸附和注入作用的尾纤蛋白gp12、裂解功能蛋白内溶酶等。【结论】本研究分离获得的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体kp6,其基因组中存在1个内溶酶,以其制备的噬菌体鸡尾酒制剂在12 h内能完全抑制宿主菌生长,试验结果为后续裂解酶和噬菌体制剂的开发奠定基础。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 噬菌体 生物学特性 全基因组
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霍氏肠杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究
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作者 阳亭亭 冯子娟 +1 位作者 黄轶 周虹宏 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期323-329,共7页
【目的】探究霍氏肠杆菌噬菌体的形态特征和生物学特性,预防和控制霍氏肠杆菌感染。【方法】本研究以霍氏肠杆菌为宿主菌,使用双层琼脂平板法从污水和淤泥中分离噬菌体并进行生物学特性研究。用透射电镜观察纯化后噬菌体的形态特征,测... 【目的】探究霍氏肠杆菌噬菌体的形态特征和生物学特性,预防和控制霍氏肠杆菌感染。【方法】本研究以霍氏肠杆菌为宿主菌,使用双层琼脂平板法从污水和淤泥中分离噬菌体并进行生物学特性研究。用透射电镜观察纯化后噬菌体的形态特征,测定噬菌体效价、温度稳定性、pH稳定性、最佳感染复数及一步生长曲线。【结果】成功分离鉴定出1株霍氏肠杆菌噬菌体,并命名为H2;该噬菌体在双层琼脂平板上形成大小均一、圆形透明的噬菌斑;透射电镜观察结果显示,噬菌体H2的头部呈二十面体对称,直径为85 nm±2 nm,具有一长尾且有尾丝,尾部长190 nm±2 nm,归属于尾噬菌体目、肌尾噬菌体科;噬菌体H2的温度稳定性和pH稳定性结果显示,在35~55℃、pH 5.0~9.0范围内效价基本保持稳定;最佳感染复数为0.0001;根据最佳感染复数绘制一步生长曲线,测得噬菌体H2的潜伏期约为20 min,爆发期约为50 min,平均裂解量约为68 PFU/cell。【结论】噬菌体H2具有裂解能力强、热稳定和酸碱稳定等优点,本研究为后续霍氏肠杆菌噬菌体制剂的研发提供了良好的研究材料。 展开更多
关键词 噬菌体 分离鉴定 霍氏肠杆菌 生物学特性
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1株棕熊源多重耐药大肠杆菌噬菌体生物学特性及比较基因组学研究
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作者 郭志良 朱秋艳 +10 位作者 王雪 曾君 季芳 郑迎春 左君豪 张乐怡 郭常春 王学静 徐莉莉 赵瑞利 王承民 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4510-4521,共12页
【目的】探究1株多重耐药大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性及基因组特征,为多重耐药菌株的科学防控提供参考。【方法】试验以棕熊源大肠杆菌M719-6WT为宿主菌,使用双层平板法从养殖场污水中分离纯化出噬菌体,通过透射电镜观察其形态,... 【目的】探究1株多重耐药大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性及基因组特征,为多重耐药菌株的科学防控提供参考。【方法】试验以棕熊源大肠杆菌M719-6WT为宿主菌,使用双层平板法从养殖场污水中分离纯化出噬菌体,通过透射电镜观察其形态,利用空斑法测定噬菌体宿主谱,并探究其生物学特性。基于噬菌体全基因组测序数据进行噬菌体生物信息学分析,采用体外、体内抑菌试验评估噬菌体抑菌效果。【结果】通过双层平板法分离并纯化得到1株大肠杆菌噬菌体,命名为pEC-M719-6WT.2,其噬菌斑边缘清晰且透亮。结合透射电镜观察和全基因组分析结果显示,噬菌体pEC-M719-6WT.2属于Tevenvirinae亚科肌尾状噬菌体。宿主谱测定结果表明,噬菌体pEC-M719-6WT.2可裂解11株大肠杆菌。该噬菌体最佳感染复数(MOI)为0.1,最适温度为25℃,最适pH为7.0,潜伏期<10 min,裂解周期为70 min,裂解量约为190 PFU/cell。基因组分析结果显示,噬菌体pEC-M719-6WT.2基因组大小为170.441 kb,未发现携带已知的耐药、溶原和毒力相关基因。受体结合试验结果显示,噬菌体pEC-M719-6WT.2可以结合宿主菌表面的脂多糖受体。体外抑菌试验结果显示,当MOI为100时,噬菌体pEC-M719-6WT.2与8μg/mL四环素联合应用,抑菌时间可延长至24 h;体内保护试验结果表明,2.8×10^(5) CFU/mL M719-6WT感染大蜡螟幼虫后,注射2×10^(7) PFU/mL噬菌体pEC-M719-6WT.2可在24和48 h内将大蜡螟幼虫存活率分别提高至100%和70%。【结论】本研究分离获得1株多重耐药大肠杆菌噬菌体,其具有良好的环境稳定性和抑菌活性,生物信息学特征明确,体内外抑菌效果较好,与抗生素联合使用可产生协同作用,具有治疗临床耐药大肠杆菌感染的潜在应用价值。 展开更多
关键词 噬菌体 大肠杆菌 多重耐药 生物学特性 比较基因组学
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