莱菔硫烷诱导Ⅱ相酶表达保护大鼠脊髓运动神经元

目的探讨Ⅱ相酶诱导剂莱菔硫烷(SF)对运动神经元的保护作用。方法应用SD乳鼠脊髓体外器官型培养模型,随机分成3组:对照组、THA组和SF联合THA组。用免疫组化法检测运动神经元数目,用Westernblot法检测Ⅱ相酶蛋白水平。结果THA干预后运动神经元数目较对照组明显减少(P<0.05,n=10～15),而应用SF预处理48h,再给予SF和THA联合处理3周后,运动神经元数目较THA组明显增加(P<0.05,n=10～15),同时Ⅱ相酶NQO-1和HO-1表达明显升高(P<0.05,n=3)。结论SF通过诱导Ⅱ相酶NQO-1和HO-1的表达,可以有效预防THA引起的运动神经元损伤。

Ⅱ相酶诱导剂CPDT抑制大鼠脊髓片内THA引起的运动神经元损伤

目的探讨Ⅱ相酶诱导剂CPDT(5,6-二氢环戊烯并1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮)对运动神经元的保护作用及机制。方法制作选择性运动神经元损伤的脊髓片培养模型。乳大鼠脊髓片分为正常对照组、模型组(100μmol/L苏-羟天冬氨酸;THA)和Ⅱ相酶诱导剂CPDT(5、15和30μmol/L)干预组。以神经元特异性抗体SM I-32组化染色,对脊髓腹角α运动神经元进行鉴定、计数,并测定不同时间点培养液中乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)含量。结果THA使脊髓片腹角α运动神经元数目明显减少(P<0.01),培养液中LDH、MDA含量明显升高。与模型组相比,CPDT提前干预(15和30μmol/L)可使α运动神经元数目明显增多(P<0.05),突起也较为丰富,培养液中LDH、MDA含量明显下降(P<0.05)。结论Ⅱ相酶诱导剂CPDT可能通过抑制脂质过氧化物或清除自由基来保护脊髓选择性运动神经元不受损伤。

硫丹对草鱼Ⅰ相、Ⅱ相酶活性及DNA损伤的影响

研究了硫丹对草鱼肝脏Ⅰ相酶氨基比林-N-脱甲基酶(APND)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)、Ⅱ相酶谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活性及DNA受损细胞彗星尾长(TL)和尾部DNA含量(%TDNA)的影响。试验共设置0.18、0.36和0.71μg.L-1 3个暴露浓度组和1个空白对照组,分别在试验24、72、120和168 h时取样测定各指标。结果表明,24 h时,0.36和0.71μg.L-1暴露组草鱼肝脏APND活性与对照组相比显著升高(P<0.05或P<0.01),72 h时受到显著抑制(P<0.01);120 h后各暴露组APND活性与对照组相比均表现为受到显著抑制(P<0.05或P<0.01)。ERND活性总体表现为受诱导。GST活性总体呈先受诱导后受抑制的变化趋势;0.36和0.71μg.L-1暴露组GST活性均在72 h时达到最高值,之后随暴露时间的延长缓慢降低,并在168 h时表现为受抑制;0.18μg.L-1暴露组在120 h时达到最大值,之后降低,168 h时GST活性与对照组水平相当。经硫丹暴露后,草鱼肝脏细胞DNA明显受损,TL与%TDNA均随硫丹浓度的升高或暴露时间的延长而增加,且相关显著。硫丹可影响草鱼肝脏Ⅰ相、Ⅱ相代谢酶活性,并对肝细胞DNA造成遗传损伤。

当归补血汤有效组分配伍对肝星状细胞氧化应激和Ⅱ相酶的影响

目的：研究当归的有效成分阿魏酸、黄芪有效成分黄芪甲苷及其配伍对大鼠肝星状细胞HSC-T6脂质过氧化物（LPO）含量、抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的影响。方法：阿魏酸、黄芪甲苷单独及联合处理HSC-T6细胞24 h,分光光度法检测HSC-T6细胞LPO含量和超氧化物歧化酶（（SOD）活性,Western Blot检测HSC-T6细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基（GCLc）、谷氨酰半胱氨酸合成酶调节亚基（GCLm）、血红素加氧酶1（HO-1）、SOD和磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK-3β）蛋白表达,实时定量PCR检测HSC-T6细胞GCLc、GCLm、HO-1和SOD1 mRNA表达。结果：黄芪甲苷显著抑制了HSC-T6细胞中LPO含量,增加了SOD活性,上调了GCLc和SOD的mRNA和蛋白表达,增加了GSK-3β的磷酸化水平（均P〈0.05）,而对GCLm表达无显著性影响（P〉0.05）。阿魏酸对这些指标均无显著性影响（均P〉0.05）。与黄芪甲苷处理组比较,联合配伍的作用效果无显著性提高（均P〉0.05）。结论：当归补血汤的有效组分黄芪甲苷通过上调Ⅱ相酶的表达抑制了肝星状细胞氧化应激。

有氧运动联合HWTX-Ⅰ调控Ⅱ相解毒酶对阻塞性黄疸致中枢神经系统损伤的影响

目的探讨有氧运动联合HWTX-I介导Keap1-Nrf2-ARE途径对II相解毒酶HO-1和NQO1的影响,以及在阻塞性黄疸小鼠中枢神经系统损伤中的保护作用。方法50只雄性KM小鼠随机分为5组,10只/组:空白组(GO),模型组(M),有氧运动组(T),HWTX-I组(H),有氧运动联合HWTX-I组(TH)。M组、T组、H组、TH组小鼠均采用手术线直角悬挂阻断胆总管72 h构建阻塞性黄疸模型。通过有氧运动及尾静脉注射HWTX-I(0.05μg/g)进行干预,采用一般行为学观察及Clark神经功能评分、ELISA酶联免疫、脑组织nissl染色、海马组织Western blot检测、mRNA检测及肝组织mRNA表达谱测序分析,探讨有氧运动及HWTX-I对阻塞性黄疸小鼠脑组织中枢神经损伤的改善效果。结果M组胆总管悬挂72 h后出现明显黄疸症状,皮肤局灶黄染面积增大,尿液变黄及粪便呈浅灰色,Clark神经功能评分显著升高(P<0.01);与M相比,T组、H组、TH组血清肝功能指标ALT、AST、TBIL和TBA含量水平下降(P<0.01),海马组织5-HT、BDNF含量上升,S100B、NSE含量下降(P<0.01),上述除肝功能指标外,有氧运动与HWTX-I间均存在协同效应。镜下显示,M组脑组织皮质神经细胞尼氏小体大量丢失,有明显空泡、深染,大量核固缩、核坏死。T组、H组针对上述症状明显改善,TH组干预效果最佳。相比M组,T组、H组、TH组脑组织中Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达及蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05),且有氧运动与HWTX-I间均存在协同效应。Illumina高通量测序筛选肝组织神经相关因子及关联分析显示,差异表达因子主要富集于神经活性配体-受体相互作用、GABA能突触、多巴胺能突触、突触小泡循环及轴突指导等神经调控通路,涉及组织细胞神经细胞信号转导、凋亡抑制、免疫反应、毒性等,有氧运动与HWTX-I可显著增加神经元损伤修复、增殖等相关信号通路的富集。且有氧运动与HWTX-I间均存在协同效应。结论7周有氧运动或HWTX-I尾静脉注射可通过Keap1-Nrf2-ARE途径上调II相解毒酶HO-1和NQO1的表达,增强机体阻塞性黄疸后脑组织中枢神经的保护作用,且有氧运动与HWTX-I联合应用效果最佳。

Ⅱ相酶诱导剂CPDT对大鼠肝脏及中枢神经系统NQO1诱导作用研究

目的:研究Ⅱ相酶诱导剂CPDT对大鼠肝脏及中枢神经系统脑与脊髓NQO1的诱导作用。方法:新鲜配制CPDT豆油溶液,以不同浓度125μmol/kg/day、250μmol/kg/day、500μmol/kg/day灌胃给药7天,另一500μmol/kg/day组连续给药14天后,取出肝脏、大脑皮层及脊髓组织,经WesternBlot技术检测NQO1表达情况。结果:CPDT500μmol/kg/day可明显诱导肝脏NQO1表达上调,而对大脑皮层和脊髓诱导作用不明显。延长给药时间至14天后,NQO1表达无显著增加。结论:血脑屏障的存在可能是CPDT不能诱导大脑皮层和脊髓NQO1表达增加的原因之一。

Ⅱ相代谢及其酶的研究进展

以结合反应为特征的Ⅱ相药物代谢是机体处置药物重要环节,主要包括葡萄糖醛酸化、乙酰化、甲基化、谷胱甘肽化、硫酸化等结合反应。不同基团对应的结合反应均由多个同类基因或超基因家族介导催化完成。Ⅱ相代谢反应都具有各自不同的反应特征与各自不同的功能意义。Ⅱ相药物代谢酶活性受联合用药影响会导致临床药物相互作用,其基因多态性一方面会影响内源性物质的代谢,可能导致某些疾病发生率升高,同时也会影响外源性物质的代谢,引起药物疗效的改变或毒性反应的发生。

Nrf2在急性亚砷酸钠暴露的小鼠胰岛β细胞中的表达

目的检测急性亚砷酸钠作用小鼠胰岛β细胞的Nrf2及其调控的II相解毒酶的表达情况。方法4μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)作用于MIN6细胞2、6、12、18、24h;利用Western blotting检测亚砷酸钠暴露不同时间点细胞核、细胞质和细胞总的Nrf2蛋白表达;应用Real-time PCR检测不同时间点Nrf2及其调控的II相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(Nqo1)和血红素氧化酶1(Hmox-1)mRNA表达。结果亚砷酸钠暴露2h,Nrf2蛋白表达增多并达到高峰,之后随时间的延长Nrf2蛋白表达逐渐降低。Nrf2核蛋白表达的时间效应性与细胞总的Nrf2表达完全一致。但不同时间点的亚砷酸钠暴露对Nrf2的mRNA表达未出现显著影响。Nqo1和Hmox-1表达亦存在时间效应性,即亚砷酸钠暴露后2h,Nqo1和Hmox-1 mRNA表达开始增高,6h达到高峰,随后逐渐下降。结论急性亚砷酸钠暴露后,能够诱导小鼠胰岛β细胞内Nrf2的蛋白表达,并促进其转位进入细胞核,调节其下游II相解毒酶Nqo1和Hmox-1的转录活性。

化学防癌药物keap1-nrf2信号通路活化剂的研究进展

化学防癌是应用天然的或合成的化学物质来阻断、抑制或治疗癌症的过程,这一过程与肝内的Ⅱ相代谢酶的作用有关.研究表明,Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路能有效地诱导Ⅱ相代谢酶基因的表达,而这一作用是作为碱性亮氨酸拉链蛋白家族的转录因子nrf2从胞质蛋白keap1上解离,然后转位至核内并与ARE结合后完成.这一传导通路机制加深了我们对于化学防癌机制的认识,并且为化学防癌药物的筛选提供了有效的靶点.就以Keap1/Nrf2/ARE传导通路为靶点的化学防癌药物的国内外研究进展进行了综述.

食品中亲电物质的最新研究进展

食品中的亲电物质是高效低毒的核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)诱导剂,通过Keap1/Nrf2/ARE通路激活Ⅱ相酶和抗氧化酶的转录。Ⅱ相酶和抗氧化蛋白可发挥慢速、长效的抗氧化和解毒作用。目前已经发现食品中有9类亲电物质,它们具有相似的结构特征。研究和开发食品中的亲电物质,将成为功能性食品新的研究领域。

II相酶诱导剂CPDT对运动神经元损伤保护作用的机制初探

利用谷氨酸转运体抑制剂制备选择性运动神经元损伤的脊髓片培养模型,在此基础上探讨Ⅱ相酶诱导剂5,6-二氢环戊烯并1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(CPDT)对运动神经元的保护作用及机制。乳大鼠脊髓片分为正常对照组、THA模型组(100μmol/L苏-羟天冬氨酸;THA)和Ⅱ相酶诱导剂CPDT干预组(15和30μmol/L)。通过免疫组化方法对脊髓腹角α运动神经元进行计数,并利用RT-PCR半定量方法、免疫印迹及酶活性检测等方法,分析各组间醌氧化还原酶1(NQO1)和铁蛋白重链的表达。结果表明CPDT(15或30μmol/L)干预组脊髓腹角的运动神经元数明显增多,与THA模型组相比差异显著(P<0.05,P<0.01),并且经CPDT干预可以有效的诱导NQO1以及铁蛋白重链的表达增加,为下一步在肌萎缩侧索硬化(ALS))动物模型或ALS病人中进行临床干预打下了前期基础。

经Nrf2/ARE通路发挥化学防癌作用的天然化合物

消除各种内外源性致癌物对机体细胞和组织的侵害,是对癌症进行化学预防的有效方法,该过程与Ⅱ相代谢酶的作用有关,并主要受Nrf2/ARE通路调控。研究表明,某些天然化合物能通过Nrf2/ARE途径,诱导Ⅱ相代谢酶而发挥化学防癌作用。本文综述经上述途径发挥化学防癌作用的各种天然化合物。

Nrf2信号通路在镉致大鼠生殖毒性中的作用

目的探讨Nrf2信号通路在镉致大鼠生殖毒性中的作用。方法 SD大鼠随机分为4组,每组6只。第1组为对照组,第2～4组为氯化镉低、中、高剂量组。第1组给予腹腔注射0.9%生理盐水,第2～4组分别给予腹腔注射1.14、2.28、4.56mg/kg体重的CdCl_2溶液,48h后处死动物,解剖取出大鼠睾丸、卵巢组织测定超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,并用Real-time PCR和Western blot法分别测定核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽-S-转移酶P1亚基(GST-P1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的mRNA和Nrf2蛋白的表达水平。结果在1.14、2.28、4.56mg/kg剂量条件下,大鼠睾丸和卵巢SOD、GSH-Px活性均明显低于对照组(均P<0.05),MDA含量有所升高(P<0.05)。2.28和4.56mg/kg组大鼠睾丸和卵巢Nrf2mRNA和蛋白的表达水平均显著高于对照组(均P<0.05),大鼠睾丸Nrf2mRNA和蛋白的表达与氯化镉染毒剂量均存在明显的剂量-效应关系(均P<0.05)。2.28和4.56mg/kg组大鼠睾丸GST-P1和GCLC mRNA表达均显著高于对照组(均P<0.05),大鼠卵巢GST-P1、GCLC mRNA在4.56mg/kg剂量条件下的表达显著升高(均P<0.05),但GST-P1和GCLC mRNA表达分别在1.14和2.28mg/kg剂量条件下出现显著的下降(均P<0.05)。结论在一定染毒剂量条件下,镉可引起大鼠睾丸和卵巢发生氧化应激,激活Nrf2介导的抗氧化机制,上调下游Ⅱ相解毒酶的转录表达。雌性大鼠卵巢可能比雄性大鼠睾丸更容易受到镉毒性作用的损害。

抗氧化反应元件调控的EGFP在HepG2细胞中的表达

目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系。方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养。结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带。DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确。转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系。结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达。为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础。

不同性别小鼠肝脏中Ⅱ相代谢酶的mRNA表达

该研究考察了性别差异对小鼠肝脏Ⅱ相代谢酶的mRNA表达的影响。将6月龄不同性别的C57BL/6小鼠分为雌、雄两组(n=6),分别取其肝脏。以荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)测定肝脏中II相代谢酶mRNA的相对表达量。在分析的19个II相代谢酶中,有4个代谢酶(Ugt1a1、Sult1a1、Sult2a2和Sult3a1)的mRNA水平在雌性小鼠肝脏中高表达(P<0.01或P<0.05);6个代谢酶(Ugt2b1、Ugt2b5、Ugt2b35、Sult5a1、Gstp1和Gstp2)的mRNA水平在雄性小鼠肝脏中表达较高(P<0.01或P<0.05);其他检测的II相代谢酶在雌雄小鼠肝脏中的mRNA表达没有显著性差异。性别差异显著影响小鼠肝脏中II相代谢酶的mRNA表达,这将导致药物在药效和毒性方面的个体差异。

Ⅱ相代谢酶基因多态性与肿瘤易感性

Ⅱ相代谢酶是催化外源性物质在体内进行生物转化的重要代谢酶，其功能强弱可以影响机体对外源性致癌物质的代谢和解毒能力。多种Ⅱ相代谢酶被证实具有基因多态性，且病因学研究结果表明由于代谢酶基因多态性的存在，使暴露于相同环境致癌因素的个体对肿瘤的易感性不同。

富含黄酮类物质果蔬汁对大鼠肝脏中氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶基因mRNA表达的影响

目的探讨富含黄酮类物质的果蔬汁对大鼠肝脏内氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶基因表达的影响。方法SPF级雄性成年大鼠54只按体重随机分为对照组、低剂量果蔬汁干预组和高剂量果蔬汁干预组,对照组每日给予生理盐水灌胃、干预组给予低剂量和高剂量果蔬汁灌胃。干预5周后,腹主动脉采血用于生化指标检测;取肝脏组织检测基因表达情况。RT-PCR方法检测肝脏中氧化损伤相关Ⅱ相代谢酶mRNA的表达情况;试剂盒法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量。结果与对照组相比,低、高剂量果蔬汁饮食干预组大鼠的血清抗氧化能力增强,同时上调肝脏中药物代谢Ⅱ相酶人醌NADH脱氢酶(NQO1)和谷氨酰-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)mRNA的表达(P<0.05),但对GSTP1、GCLM、GSTM2、GSTA2Ⅱ相代谢酶基因mRNA表达无影响。结论富含黄酮类物质果蔬汁可以增强大鼠血清抗氧化能力,同时诱导肝脏中抗氧化Ⅱ相代谢酶NQO1及GCLC基因mRNA的表达。