植物凝集素(PHA)的提取及血凝效果研究

凝集素是一类具有糖专一性、可促使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白 ,本文通过提取8种豆科植物种子中的凝集素 ,分别与人的四种血型红细胞悬液发生凝集反应 (A型、B型、O型、AB型 ) ,通过血凝反应的强弱程度来验证不同凝集素的血型专一性 ,并进一步测定其相对含量。

植物血凝素(PHA)对小鼠骨髓粒—巨噬祖细胞的保护作用

以体外半固体琼脂培养方法,观察了PHA对小鼠骨髓CFU—GM的保护作用.结果显示 小鼠经腹腔往射PHA后,对小鼠CFU—GM的自杀率有明显提高,提示适量的PHA在体内可以促进小鼠CFU—GM增殖.使更多的CFU—GM由Go进入S期.我们发现4mg/kg三尖杉酯碱(Ha)明显抑制小鼠CFU—GM增殖,若先用PHA(30mg/kg处理小鼠,则可对抗上述剂量的Ha,使CFU—GM产率维持于对照组水平.提示PHA能有效地保护粒-巨噬系免受Ha的损害,

植物血凝素(PHA)对小鼠骨髓粒—单祖细胞增殖的影响

用体外琼脂培养法研究了PHA对小鼠骨髓CFU-GM的影响,结果表明,小鼠经腹腔注射PHA后,对小鼠CFU-GM产率和自杀率的影响随PHA的剂量不同而异,20～40mg/kg的PHA能明显提高CFU-GM的产率,其作用时间维持3天,剂量大于50mg/kg,可抑制CFU-GM产率。PHA组自杀率较对照组明显提高,提示适量的PHA在体内可促进小鼠CFU-GM的增殖,使更多的CFU-GM由Go期进入S期。将PHA直接加入无CSF的培养体系中,未见集落生长。此项结果提示PHA可能通过间接机制而非直接作用于CFU-GM。

江苏菜豆(Phaseolus vulgaris)PHA-p促淋巴细胞转化特性研究

本文用细胞形态学观察和生物大分子测定法研究了江苏PHA-p对人及动物淋巴细胞的转化作用。结果表明:江苏PHA-p在10-20μg/cm^3范围内,对人淋巴细胞转化率可达80%以上,优于国内同类产品。

植物血球凝集素-Sepharose 4B亲和层析纯化人绒毛膜促性腺激素

本文报道一种新的制备和纯化HCG的方法．人工流产物经45％乙醇抽提、调pH5．2～5．4后40～60％乙醇分级、植物血球凝集素-Sepharose4B柱层析纯化后，低温酒精沉淀干燥，可得到比效价3777.8IU／mg的hCG精品．

从小雪豆中提取植物血球凝集素(PHA)的实验

目的尝试从市售豆类种子中提取PHA。方法用0.9%生理盐水浸渍小雪豆粉,浸出液经离心、过滤后,在淋巴细胞染色体培养实验中与伊华公司的PHA进行比较,检验其有丝分裂原效价。结果自行提取的小雪豆PHA对淋巴细胞转化成淋巴母细胞的刺激作用与伊华公司的PHA类似。结论从小雪豆中提取的PHA,能满足一般实验室条件下染色体制备的要求。

光照强度对雄性黑线毛足鼠免疫和身体成分的影响

为了解光照强度如何影响动物的免疫能力,将16只成年雄性黑线毛足鼠(Phodopus sungorus)随机分为弱光组(low light density,LLD,n=8)和强光组(high light density,HLD,n=8),进行了9周的实验观测.统计分析发现:光照强度不影响黑线毛足鼠的体重;强光照降低了肠系膜脂肪含量,但其他身体成分不受光照强度的影响;器官鲜重不受光照强度的影响,胸腺和脾脏鲜重、白细胞总数在强光组与弱光组之间也不存在显著差异;光照强度不影响反映细胞免疫能力的植物血球凝集素(PHA)反应.总之,光照强度对黑线毛足鼠的体重、内脏器官和大多数身体成分及其细胞免疫功能都没有显著影响.

植物血凝素对鸡免疫功能的影响

选用罗曼蛋公鸡270羽,随机分为9组,连续3次肌肉注射不同剂量植物血凝素(PHA)后,对其血清蛋白、免疫器官指数及新城疫的攻毒保护效果进行检测.结果表明:肌注2.4 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高鸡的血液生化指标(P<0.05),极显著提高对鸡新城疫的保护率(P<0.01);肌注1.2 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高胸腺指数和新城疫攻毒保护率(P<0.05).

不同繁殖状态雌性黑线仓鼠对植物血凝素的反应模式

由植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)诱导产生的肿胀反应是生态免疫学中被广泛使用的免疫学参数,通过注射部位的肿胀程度大体上可反映细胞介导的免疫和天然免疫的综合变化情况。为探讨小型哺乳动物不同繁殖状态对PHA的反应模式,以非繁殖期、妊娠期、哺乳期和断乳期的雌性黑线仓鼠为研究对象,测定了注射PHA和生理盐水前(0 h)及注射后6 h、12 h和24 h注射部位皮肤组织的增厚程度。结果显示:(1)黑线仓鼠对PHA的反应有两种模式:非繁殖期、妊娠期和断乳期对PHA的反应模式相似,都在注射后6 h最高,12 h和24 h后逐渐下降;哺乳期对PHA的反应在注射后6 h、12 h和24 h接近,彼此间的差异均不显著。(2)哺乳期黑线仓鼠的PHA反应高峰值有下降趋势,但与非繁殖期、妊娠期和断乳期高峰值之间的差异不显著。结果表明,黑线仓鼠在哺乳期对PHA的反应模式不同于其他繁殖阶段,且反应的高峰值被延迟,这对其存活可能有害,但有助于繁殖进程的延续和后代的生长发育。

芸豆植物凝集素对昆明白小鼠精子畸形的影响

目的测定芸豆植物凝集素(PHA)对小鼠精子的影响。方法实验小鼠腹腔注射1/3 LD_(50),1/10 LD_(50)和1/30 LD_(50)的芸豆PHA,阴性对照组给予生理盐水,阳性对照组给予环磷酰胺,剂量为40 mg/kg体重。所有各组均按0.1 ml/只腹腔注射,每日一次,连续5 d。各组于首次给药后35 d和70 d取样制片观察。结果给药后35 d和70 d取材,高、中、低剂量组分别与阴性对照组相比,小鼠精子畸形率无显著差异(P>0.05),与阳性对照组相比,有极显著差异(P<0.01)。各剂量组之间相比,无显著性差异,即无剂量效应关系。结论 PHA并不引起小鼠精子畸形率升高。

人类LAK细胞体外实验性扩增及生物学活性分析

由癌症患者外周血中分离出少量LAK前体细胞。在LAK细胞培养体系中加入重组人类白细胞介素2,植物血球凝集素以及辅助细胞,明显提高了LAK细胞的体外增殖能力并延长了LAK细胞的存活时间。表型分析发现,LAK-L细胞的1L 2受体(1L 2 R^-)表达水平明显高于LAK-S细胞,LAK-L细胞的体外大量增殖具有以OkT_2表型为主的单亚群增殖特性。体外杀伤实验及裸小鼠体内成瘤抑制实验结果表明.用此法扩增的LAK细胞(LAK-L)与体外短时间激活的LAK细胞(LAK-S)具有同样的抗肿瘤效应。

植物血凝素诱发凝集反应及对凝血系统的影响

目的:探讨植物血凝素(PHA)诱发红细胞凝集反应及对凝血系统的影响。方法:12只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,分别经尾静脉注射植物血凝素和生理盐水,观察红细胞在体内外的凝集反应、溶血现象,大鼠的一般状况以及大鼠凝血指标的变化情况。结果:植物血凝素在体内外均能诱发凝集反应。实验组大鼠表现为竖毛、弓背、蜷缩、颤抖,而对照组大鼠无上述表现。实验组大鼠纤维蛋白原显著低于对照组,凝血酶原时间、凝血酶时间、活化的部分凝血活酶时间、国际标准化比值显著高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:植物血凝素在体内外均能诱发凝集反应,并能激活凝血系统,在临床应用时应注意其对凝血系统的影响。

急性菜豆角中毒35例临床分析

目的探讨急性菜豆角中毒发生的流行病学特征、临床特点和治疗方法，并为预防救治此类疾病提供指导。方法回顾分析大同市第三人民医院急诊科2006年5月～2008年12月收治的35例急性菜豆角中毒患者的临床资料。结果所有患者在来诊5～20min内均得到输液及其他有效治疗，1～3h内症状缓解，2d症状消失，3d治愈出院，无1例延误诊治，亦未出现有溶血、休克等病情严重危及生命者。结论急性菜豆角中毒极易误诊为急性胃肠炎，目前暂无特效解毒剂。故避免误诊、早诊断、早治疗，是此类患者成功救治的关键；做好食品卫生宣教，嘱烹饪者将菜豆角煮沸约15min后再加工食用是预防中毒的重要措施。

肺癌细胞株表面PD-L1分子表达对Treg细胞分化增殖的影响

目的研究肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平及如何诱导Treg细胞分化生成,为肺癌患者的免疫治疗提供可靠依据。方法首先用流式细胞法测定肺癌细胞株表面的PD-L1蛋白分子表达水平。通过作图分析,选取PD-L1表达水平最高的肺癌细胞株X作为实验使用。通过常规分离Ficooll法分离人体外周静脉血单核细胞(PBMC)后再通过免疫磁珠法分选出来的T淋巴细胞经过不同浓度PHA(植物血凝素)活化后,得出最适即活化量最大的PHA浓度。加入最适浓度的、用于活化人体外周血Treg细胞的PHA,并将肺癌细胞株与人体外周血Treg细胞共同培养,对比观察PD-L1分子对Treg细胞影响分化程度水平。以TGF-β(转化生长因子-β)与PD-L1抑制素、TGF-β抑制素的存在与否设置实验组1、2、3,最后统计学分析。结果 SPCA-1、H1299、A549肺癌细胞株表面的PD-L1分子表达水平依次为(98.5±1.1)%、(91.0±3.2)%、(20.1±6.4)%,且两组互相相比有统计学差异(P<0.05),选取的肺癌细胞株X为SPCA-1,以此进行下一步实验。通过实验组1、2、3的肺癌细胞株与人体外周血Treg淋巴细胞共同培养后发现,Treg细胞活化比例大小依次为实验组2(19.7%)、实验组3(12.5%)、实验组1(6.2%),通过对比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平会影响Treg细胞分化生成,PD-L1抑制剂应用于肺癌治疗中能提高患者免疫力同时清除肿瘤细胞,也降低了治疗的不良反应,是肺癌免疫治疗方法的可靠依据。

抗CD3/CD28单克隆抗体联合PHA对T淋巴细胞活化和增殖的影响

目的探讨抗人CD3/CD28单克隆抗体联合植物血凝素(PHA)对人外周血T淋巴细胞活化增殖的影响。方法通过Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单核细胞后,用CD3免疫磁珠分选T淋巴细胞,抗CD3/CD28单抗、PHA及重组人白介素-2(recombinant human IL-2,rhIL-2)刺激T淋巴细胞。用CCK-8试剂盒(CCK-8 cell counting kit)检测细胞增殖情况,ELISA测定细胞上清液干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的含量。结果CCK-8结果显示在增殖3 d时,CD3/CD28+PHA组A450 nm值与PHA组、IL-2组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);比较各组在6、9、12 d的增殖情况,CD3/CD28+PHA组的A450 nm值与其他各组差异均有统计学意义(P<0.05)。刺激3 d各组分泌的IFN-γ质量浓度是最高的。刺激9 d时,CD3/CD28+PHA组、CD3/CD28组、PHA组上清液中IFN-γ浓度分别为(235.27±27.80)、(189.23±24.79)和(124.66±3.39)pg/mL,CD3/CD28+PHA组上清液中IFN-γ的质量浓度高于其余2组(P<0.05)。结论抗CD3/CD28单抗联合PHA比单用抗CD3/CD28单抗、PHA或rhIL-2能更好地激活T细胞及持久地促使T细胞增殖。

变态期花背蟾蜍蝌蚪对植物血凝素的反应模式及其生态学意义

以戈斯纳(Gosner 1960)分期表为标准,以花背蟾蜍(Pseudepidalea raddei)蝌蚪为研究对象,在46期蝌蚪小腿部位注射20μL不同浓度(1、2.5和5 mg·mL^(-1))的植物血凝素(phytohemagglutinin-P,PHA-P)溶液,对侧同部位注射等量的生理盐水溶液,测定了注射前(0 h)及注射后3、6、9和12 h被注射部位组织厚度的变化情况,确定了蝌蚪对PHA-P反应的最适浓度;在最适浓度条件下,比较了37、42、44和46期蝌蚪对PHA-P的反应强度和持续时间。结果表明:46期蝌蚪对3种不同浓度的PHA-P溶液的反应无显著性差异,但反应峰值有先后,2.5 mg·mL^(-1)为最适注射浓度;42期蝌蚪在注射后3 h达反应峰值,而37、44和46期分别在注射后3~6、3~9及3~12 h出现反应峰值;37期蝌蚪对PHA-P的反应峰值高于46期,但与42和44期的蝌蚪无显著性差异;花背蟾蜍蝌蚪对PHA-P的反应模式随不同发育阶段而变化,42期为反应迅速、持续时间短的单峰值,其他水生阶段反应峰值有后延现象,且在登陆后反应峰值强度下降、持续时间延长,这可能与陆地多变的环境条件有关。

白芸豆植物凝集素对小鼠胚胎发育的影响

目的:研究不同浓度的白芸豆提取物PHA(植物凝集素)对小鼠胚胎体外发育的影响。方法:实验一,采用添加不同浓度PHA的M16培养液培养小鼠2-细胞期胚胎,观察72 h后的发育情况,记录囊胚及各阶段胚胎的数目。实验二,用与实验一相同浓度的PHA预处理从1-细胞到囊胚不同发育阶段的胚胎24 h,然后移入不含PHA的培养液中继续培养,观察到囊胚或孵化囊胚的发育率。结果:含低质量浓度PHA的培养液有促进小鼠胚胎发育的作用,即50,100 mg·L-1的PHA可显著增加囊胚的数量。而含高质量浓度PHA(>1 000 mg·L-1)的培养液会使胚胎发育停滞在1-细胞到囊胚的不同时期,并随浓度增加表现为副凋亡或致死现象。结论:不同浓度PHA可对小鼠胚胎的体外发育具有不同的作用。1-细胞阶段的胚胎对PHA处理具有较高的敏感性。在作用时间上,24 h PHA预处理即可表现出对胚胎发育的促进或抑制作用。低浓度的PHA可促进胚胎发育,而高浓度的PHA则导致小鼠胚胎发育停滞,出现副凋亡或死亡。

阴道或直肠注入芸豆植物凝集素的亚慢性实验研究

目的确定植物凝集素亚慢性的效应谱,研究植物凝集素亚慢性中毒作用的靶器官,并提出安全限量参考值。方法通过阴道(雌鼠)或者直肠(雄鼠)注入含有赋形剂的植物凝集素。分低、中、高3个剂量组,每组12只小鼠,雌雄各半,剂量分别为0、1、2、4 mg/只,对照组给以相同剂量的润滑剂(避孕药赋形剂)。每日一次,共30d。所有动物均在第31天处死,测定各脏器系数。结果各组肝脏系数、脾脏系数和胸腺系数差异具有统计学意义。4 mg/只剂量组的肝脏系数为6.98±0.61,与对照组的5.32±0.31比较差异有统计学意义(P<0.01);2 mg/只剂量组和1 mg/只剂量组的肝脏系数分别为6.56±0.48和6.01±0.38,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4 mg/只,2 mg/只及1 mg/只的脾脏系数分别为0.68±0.05,0.66±0.09及0.61±0.03与对照组的0.48±0.05相比差异有统计学意义(P<0.01)。4 mg/只的胸腺系数为0.29±0.02,与对照组的0.19±0.01比较差异有统计学意义(P<0.01),2 mg/只及1mg/只剂量组的胸腺系数分别为0.24±0.04及0.23±0.03与对照组的0.19±0.01比较差异有统计学意义(P<0.05)。其他脏器系数差异均无统计学意义。结论芸豆植物凝集素对小鼠阴道及直肠没有亚慢性毒性作用。

红芸豆植物凝集素终止小鼠中晚期妊娠中的相关生殖激素变化研究

目的:探讨红芸豆植物凝集素(PHA)在终止小鼠中晚期妊娠时对孕鼠相关神经内分泌激素水平的影响。方法:将妊娠14 d的孕鼠随机分为PHA组和溶剂对照(PBS)组,每组各40只。采用非手术法经阴道向每只孕鼠子宫注射5 mg的红芸豆PHA或等量的PBS,并于注射后2 h、5 h、8 h及发生流产时采血,取子宫胎盘(每个时间点每组处死10只动物),采用电化学发光法对孕鼠血清中的孕酮(P)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)进行检测,比较妊娠结局;用派诺宁-甲基绿染色法观察子宫、胎盘石蜡切片。结果:注射PHA组孕鼠血清中E2、FSH、LH和T水平与注射PBS组无统计学差异;而P和PRL水平在注射红芸豆PHA后2 h时明显高于PBS组,流产时明显低于PBS组;PHA组胎盘出现明显细胞凋亡。结论:红芸豆PHA终止小鼠中晚期妊娠并不改变孕鼠体内的E2、FSH、LH和T水平,但对P和PRL有较大影响,提示红芸豆PHA通过作用于子宫局部而导致流产,不影响中枢神经内分泌系统。

人精浆对不同丝裂原诱导淋转反应的影响

本文通过人精浆对PHA、ConA和PWM三种丝裂原诱导淋巴细胞转化反应的影响,间接了解HSP对T辅助、T抑制和B淋巴细胞功能的影响,结果发现不同浓度的精浆对三种丝裂原诱导的淋转反应均有明显抑制作用(P<0.05),且三种浓度HSP的抑制作用在无显著性差异(P>0.05);中浓度的精浆对PHA、ConA和PWM诱导转反应的抑制率分别为69.7、51.7和48.3％,说明精浆对机体的T辅助、T抑制性和B淋巴细胞功能均有明显的抑制作用。此外,还对精浆的免疫抑制作用机理和意义进行了讨论。