威廉环毛蚓中8种核苷提取工艺优化及含量测定

目的优化威廉环毛蚓中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、肌苷、鸟苷、2′-脱氧鸟苷提取工艺,并测定其含量。方法以料液比、超声时间、超声温度为影响因素,次黄嘌呤、总核苷含量为评价指标,正交试验优化提取工艺。HPLC法测定各核苷含量,分析采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-水,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长260 nm。结果最佳条件为料液比1∶250,超声时间30 min,超声温度60℃。8种核苷在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.9990),平均加样回收率99.11%~103.27%,RSD 0.85%~2.89%。结论该方法稳定可靠,可用于威廉环毛蚓中核苷的提取与含量测定。

正交设计优选地龙的提取工艺

目的优选地龙的最佳提取工艺。方法通过琼脂纤维蛋白平板法测量溶圈面积,优选出用水匀浆法作为地龙的提取方法;综合考虑得率和溶圈面积这两个指标,采用正交实验对地龙的水匀浆工艺条件进行优化。结果最佳工艺参数为:即加入5倍量水,浸渍2h,以10000r/min转速在40℃下匀浆6h。结论优选出的工艺稳定可行。

顶空毛细管气相色谱法测定地龙提取物中甲醇残留量

目的：建立地龙提取物中甲醇残留量的测定方法。方法：采用顶空进样毛细管气相色谱法。色谱柱为DB-FFAP（30m×0.25mm×0.50μm）,FID检测器。程序升温：初始温度为40℃,保持5min,以每分钟10℃的速率升至200℃,保持5min;进样口温度为150℃,检测器温度为200℃。结果：在考察的浓度范围内呈现良好的线性关系（r=0.9971）,平均回收率为98.22%～108.38%,精密度实验RSD为1.52%。结论：该方法简便快捷、准确可靠、灵敏度高,可作为地龙提取物中甲醇残留量的测定方法。

甘草水制广地龙饮片质量标准研究

目的建立甘草水制广地龙饮片的质量标准。方法按2005年版《中国药典》附录ⅨH水分测定法中的第一法、附录ⅨK灰分测定法和附录ⅩA浸出物测定法测定;采用HPLC法测定饮片中的次黄嘌呤和肌苷的含量。结果甘草水制广地龙饮片质量标准为:水分含量≤5.0%,总灰分含量≤10.0%,酸不溶性灰分含量≤5.0%,水溶性浸出物浓度≥20.0%,乙醇浸提物浓度≥8.0%;次黄嘌呤含量≥0.006%,肌苷含量≥0.40%。结论建立了较完善的甘草水制广地龙饮片的质量标准,改变了过去仅依靠经验和感官判断的鉴定方法。

地龙抗凝活性物质提取方法研究

目的比较不同提取方法对两种不同品种的地龙——广地龙和沪地龙提取物抗凝活性的影响,分别确定两种地龙的最佳提取方法。方法应用凝血酶滴定法分别比较两个不同品种地龙干品水煎煮、0.9% NaCl煎煮、70%乙醇回流提取、石油醚脱脂后水煎煮、石油醚脱脂后0.9% NaCl煎煮及石油醚脱脂后70%乙醇回流提取6种不同提取方法提取物中抗凝活性物质的差异。结果以宽体金钱蛭为阳性对照,与空白组、阴性组对照后,两种地龙分别在6种提取方法下提取物均表现抗凝活性,并且两种地龙均是石油醚脱脂后0.9% NaCl煎煮提取物中抗凝活性最强。结论不同品种的地龙抗凝活性强度与提取前处理、提取方法有密切联系,干品石油醚脱脂有利于地龙抗凝活性物质的提取。

地龙提取物抑制核因子κB信号通路延缓椎间盘髓核细胞的退变

背景:髓核细胞炎症微环境是促进髓核退变的重要因素,炎症因子通过激活核因子κB信号通路产生炎症级联反应,形成恶性循环,加速髓核退变进程。抑制核因子κB信号通路活性,可延缓椎间盘退变进展。目的:探讨地龙提取物对髓核细胞退变的作用机制。方法:采用冷浸法提取地龙活性成分,CCK-8法检测0,25,50,100,200,400 mg/L地龙提取物对大鼠髓核细胞活性的影响,筛选合适药物浓度用于后续实验。采用肿瘤坏死因子α诱导髓核细胞退变模型,选取50,100,200 mg/L地龙提取物作用于细胞模型,通过Western blot法检测聚蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的mRNA表达;采用细胞免疫荧光法检测核因子κB信号通路关键分子P65的入核表达。结果与结论:①与空白组(0 mg/L地龙提取物)比较,400 mg/L地龙提取物抑制髓核细胞活性,其余浓度对髓核细胞活性无明显影响,选用50,100,200 mg/L地龙提取物用于后续实验;②与正常组(不作处理)比较,模型组聚蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达水平降低,肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的蛋白和mRNA水平上调,P65入核增加;③与模型组比较,地龙提取物能增加细胞外基质成分聚蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达,下调炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的mRNA和蛋白表达水平,减少P65在核内的表达;④结果表明,地龙提取物能够减少炎症因子表达,增加细胞外基质合成,抑制核因子κB信号通路活性,地龙提取物可能通过作用于核因子κB信号通路进而延缓椎间盘髓核细胞退变。

地龙提取物减弱矽尘诱导小鼠肺纤维化作用与a-SMA、TGF-β表达关系研究

目的研究地龙提取物减弱矽尘诱导的小鼠肺纤维化作用及与a-SMA、TGF-β表达的关系。方法选取的SPF BALB/c小鼠进行常规饲养,3组小鼠每组各20只采用随机数字表法将患矽尘病小鼠随机分组,正常鼠注射生理盐水作为空白组,矽肺鼠气管注射等量生理盐水作为模型组,矽肺鼠腹腔注射地龙提取物作为地龙提取物组,测定并记录小鼠0~5周内体质量具体变化情况,采用染色试剂染色后显微镜下观察肺纤维细胞增殖速率状况。采用RT-PCR荧光标记法检测TGF-β1及α-SMA mRNA的表达采用免疫荧光染色检测TGF-β1及α-SMA蛋白表达结果,探讨地龙提取物减弱矽尘诱导的小鼠肺纤维化作用及与a-SMA、TGF-β表达的关系。结果空白组小鼠od值为(0.328±0.0045),其肺纤维细胞增殖水平最低,模型组小鼠od值为(0.411±0.0100),其肺纤维细胞增殖水平最高,地龙提取物组小鼠od值为(0.359±0.0050),水平介于空白组与模型组之间,差异有统计学意义(χ2=14.9887,P=0.0006)。0~5周小鼠体质量呈现出增长趋势,第1、3、5周模型组小鼠体质量与空白组、地龙提取物组小鼠体质量比较有明显差异,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠肺纤维α-SMA蛋白表达水平空白组(1.000±0.019)明显低于模型组(1.739±0.101),模型组(1.739±0.101)明显高于地龙提取物组(1.463±0.047),比较存在差异且具有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白表达水平,地龙提取物组(1.295±0.042)较模型组(1.521±0.091)明显偏低,比较存在差异且具有统计学意义(P<0.05)。空白组α-SMA、TGF-β1 mRNA相对表达量较模型组低,差异有统计学意义(P<0.05);经地龙提取物干预后,地龙提取物α-SMA、TGF-β1 mRNA相对表达量较模型组α-SMA、TGF-β1 mRNA相对表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论研究结果表明地龙提取物可明显降低肺纤维化组织细胞基质外聚集与沉积的细胞质基质,能调控TGF-β1蛋白与α-SMA蛋白的有效表达,抑制肺纤维细胞增殖及肺组织细胞纤维化速率,加快细胞外细胞基质沉积降解,减缓肺组织细胞纤维化。

地龙提取物通过抑制wnt/β-catenin通路促进人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨地龙提取物对人卵巢癌细胞凋亡的影响及生物学机制。方法获取正常人卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞,应用免疫组化检测细胞内wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达,应用PCR检测细胞wnt3a mRNA、β-catenin mRNA、c-Myc mRNA、Cyclin D1mRNA相对表达量,应用western-blot检测细胞wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达;分别应用终浓度400 mg/L和800 mg/L地龙提取物干预卵巢癌细胞生长72 h后、应用免疫组化检测细胞内wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达,应用PCR检测细胞wnt3a mRNA、β-catenin mRNA、c-Myc mRNA、Cyclin D1 mRNA相对表达量,应用western-blot检测细胞wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达,应用Tunel法分别检测卵巢癌细胞24、48、72 h凋亡率。结果与正常人卵巢上皮细胞比较,免疫组化结果显示卵巢癌细胞表达蛋白wnt3a[(5.61±1.13)分vs(0.79±0.21)分,t=9.60,P=0.00]、β-catenin[(5.27±1.40)分vs(0.74±0.25)分,t=7.12,P=0.00]、c-Myc[(4.15±1.70)分vs(1.10±0.30)分,t=3.88,P=0.01]、Cyclin D1[(5.42±1.90)分vs(1.00±0.38)分,t=5.07,P=0.00]均增多,PCR结果显示卵巢癌细胞wnt3amRNA[(7.20±2.12)倍vs(1.00±0.10)倍,t=6.92,P=0.00]、β-catenin mRNA[(6.44±1.27)倍vs(0.99±0.09)倍,t=10.03,P=0.00]、c-Myc mRNA[(3.65±1.10)倍vs(1.00±0.10)倍,t=5.26,P=0.00]、Cyclin D1mRNA[(6.50±1.72)倍vs(1.00±0.10)倍,t=20.44,P=0.00]相对表达量均增高,western-blot结果显示卵巢癌细胞wnt3a[(0.61±0.20)vs(0.18±0.10),t=4.00,P=0.00]、β-catenin[(1.24±0.43)vs(0.32±0.09),t=4.88,P=0.00]、c-Myc[(0.80±0.27)vs(0.11±0.08),t=4.95,P=0.00]、Cyclin D1[(0.51±0.18)vs(0.10±0.07),t=11.19,P=0.00]均增多;经地龙提取物干预后,免疫组化结果显示卵巢癌细胞表达蛋白wnt3a[0 mg组(5.80±1.40)分,400 mg组(3.10±1.00)分,800 mg组(1.60±0.30)分,F=22.28,P=0.00]、β-catenin[0 mg组(5.00±1.60)分,400 mg组(3.70±1.10)分,800 mg组(2.40±1.00)分,F=5.31,P=0.02]、c-Myc[0 mg组(4.60±2.11)分,400 mg组(3.58±1.75)分,800 mg组(1.20±0.40)分,F=6.49,P=0.01]、Cyclin D1[0 mg组(5.70±1.80)分,400 mg组(2.61±1.20)分,800 mg组(1.82±0.54)分,F=12.91,P=0.00]均降低,PCR结果显示卵巢癌细胞wnt3a mRNA[0 mg组(1.00±0.12),400 mg组(0.63±0.18),800 mg组(0.20±0.09),F=40.00,P=0.00]、β-catenin mRNA[0 mg组(1.00±0.09),400 mg组(0.41±0.09),800 mg组(0.10±0.08),F=112.10,P=0.00]、c-Myc mRNA[0 mg组(1.00±0.07),400 mg组(0.71±0.22),800 mg组(0.30±0.09),F=31.84,P=0.00]、Cyclin D1mRNA[0 mg组(1.00±0.10),400 mg组(0.48±0.20),800 mg组(0.23±0.09),F=40.83,P=0.00]相对表达量均减少,western-blot结果显示卵巢癌细胞表达蛋白wnt3a[0 mg组(1.33±0.42),400 mg组(0.81±0.30),800 mg组(0.10±0.08),F=20.96,P=0.00]、β-catenin[0 mg组(1.81±0.52),400 mg组(0.90±0.27),800 mg组(0.38±0.19),F=19.87,P=0.00]、c-Myc[0 mg组(1.41±0.40),400 mg组(0.28±0.10),800 mg组(0.10±0.06),F=40.83,P=0.00]、Cyclin D1[0 mg组(1.10±0.38),400 mg组(0.78±0.26),800 mg组(0.11±0.06),F=20.79,P=0.00]均减少,Tunel结果显示72h卵巢癌细胞凋亡率增高[0 mg组(2.17±1.10)%,400 mg组(17.20±3.65)%,800mg组(28.64±7.11)%,F=40.62,P=0.00]。结论地龙提取物可以通过抑制wnt/β-catenin通路来促进人卵巢癌细胞的凋亡,并且以终浓度800 mg/L为佳。

地龙中游离氨基酸的含量测定

目的:选择地龙中游离氨基酸的最佳提取方法。方法:采用水提正交法、渗漉法、水提醇沉法提取地龙中游离氨基酸。用氨基酸自动分析仪测定提取液中游离氨基酸的含量。结果:比较分析出最佳提取条件。结论:水提醇沉是最佳的提取方法。

地龙药材中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的含量检测

目的建立超声萃取-免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生法高效液相色谱法同时测定地龙药材中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)含量的测定方法。方法样品粉碎过120目筛后,采用70%甲醇超声处理30min,经免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定4种黄曲霉毒素的含量。结果线性范分别为:黄曲霉毒素B_(1)0.0104~0.0520ng(r=0.9999)、黄曲霉毒素B_(2)0.0038~0.0190ng(r=0.9998)、黄曲霉毒素G_(1)0.0108~0.0540ng(r=0.9998)、黄曲霉毒素G_(2)0.0038~0.0190ng(r=0.9998),线性关系良好。检出限分别为0.43、0.15、0.43、0.15μg·kg^(-1)。回收率在90.42~99.47%之间,RSD≤3.2%(n=6)。结论该方法操作简便,灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于地龙中黄曲霉毒素含量的测定。

掺伪地龙的质量分析

目的测定掺伪地龙药材的总灰分和水溶性浸出物质量评价参数,为控制地龙药材的质量提供实验依据。方法按2010版《中国药典》附录IXK灰分测定法和附录XA浸出物测定法测定杂质含量分别为47.9%和23%的地龙药材样品S2和S7的总灰分、水溶性浸出物含量。结果样品S2和S7的总灰分分别为60.5%%和54.7%,水溶性浸出物含量分别为10.08%和17.14%。结论杂质超标将导致地龙总灰分的偏高和浸出物含量的偏少,因此应严格控制地龙药材的杂质含量。

QuEChERS-dSPE-UPLC-MS/MS筛查中药材地龙中41种兽药残留

建立了基于超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)的动态多反应监测模式(d-MRM)快速筛查中药材地龙中7大类(喹诺酮类、磺胺类、糖皮质激素类、硝基咪唑类、抗病毒类、非甾体抗炎类、镇静安眠类)41种兽药残留的分析方法。样品采用QuEChERS提取,分散式固相萃取管(dSPE EMR-Lipid)进行净化,采用d-MRM采集模式进行定性和定量检测,外标法定量,41种兽药测定在各自线性范围呈良好的线性关系,相关系数(R 2)均大于0.9917,检出限为0.1000~3.105μg/kg,定量限为0.3184~7.532μg/kg,3个添加水平的回收率为62.8%~112.3%,精密度为1.1%~8.9%。该方法前处理简单、重现性好、灵敏度高,适用于中药材地龙中41种兽药残留的快速筛查。

超声波提取地龙抗血栓部位的工艺研究

通过提取方式选择和正交设计法对地龙的抗血栓部位进行超声波提取,以纤溶酶活性和干膏率为指标,分别对料液比、提取温度、提取时间等因素进行考察,优选出最佳工艺条件为:以水为提取溶剂,料液比1∶12/1∶10,提取温度25℃,提取时间40min;验证试验表明工艺稳定可行。

地龙及其提取物治疗慢性肾脏病的研究与应用

慢性肾脏病已成为全球性健康负担。本文系统收集了关于地龙及其提取物的相关文献,整理其治疗慢性肾脏病的药理作用和机制。研究发现地龙及其提取物可以通过改善凝血纤溶系统的失衡,抑制血小板活化,调节脂质代谢紊乱,纠正血液流变学异常达到改善微循环的目的。其次,地龙及其提取物可通过抑制氧化应激,改善内皮细胞功能紊乱,抑制微炎症状态,从而抑制肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质(ECM)的过度积聚以及肾间质纤维化的发生。这表明地龙及其提取物在延缓慢性肾脏病进展方面具有广阔的开发前景,然而仍还存在诸多不足,因此需要进行更深入的研究。

正交试验优选地龙水提取工艺

目的:优选地龙的水提取工艺条件。方法:以次黄嘌呤含量为指标,HPLC测定指标成分含量,在单因素试验基础上,采用L9(34)正交试验考察加水量、提取次数、提取时间对次黄嘌呤含量的影响,优选地龙的水提取工艺。结果:各因素对水提取工艺的影响顺序为提取次数>提取时间>加水量;最佳水提取工艺为地龙药材加10倍量水回流提取1次,提取时间1 h。结论:优选的水提取工艺稳定可行。

HPLC法测定沪地龙中7个核苷类成分的含量

目的:建立中药材沪地龙中7个核苷类成分的分析方法。方法:采用0.1%氨水超声提取沪地龙药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、2’-脱氧鸟苷,并应用反相高效液相色谱法测定其含量;色谱条件:采用Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以5 mmol·L^(-1)乙酸铵溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温30℃。结果:尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷和2’-脱氧鸟苷的线性范围分别为0.51~102.09μg·mL^(-1)(r=1.000 0),0.52~103.78μg·mL^(-1)(r=1.000 0),0.50~101.03μg·mL^(-1)(r=1.000 0),0.52~104.79μg·mL^(-1)(r=1.000 0),0.50~99.99μg·mL^(-1)(r=1.000 0),0.55~110.54μg·mL^(-1)(r=1.000 0),0.50~99.28μg·mL^(-1)(r=1.000 0);平均回收率(n=6)分别为98.6%(RSD=2.6%)、104.6%(RSD=1.8%)、105.3%(RSD=1.4%)、96.2%(RSD=2.6%)、91.0%(RSD=0.42%)、88.1%(RSD=2.1%)和106.5%(RSD=2.1%)。12批样品中上述7个核苷类成分的含量测定结果分别为0.046~0.864、0.263~0.770、0.034~0.631、0.379~0.994、1.655~3.595、0.544~1.465和0.074~0.208 mg·g^(-1)。结论:该方法可用于沪地龙药材中核苷类成分的含量测定。

黄精地龙提取液对老年痴呆大鼠脑内烟碱型乙酰胆碱受体的影响

目的:探讨黄精地龙提取液(EPP)对老年痴呆大鼠脑内α3和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α3,α7-nAChR)阳性神经元数量、蛋白及mRNA表达的影响。方法:SD大鼠40只,随机均分为正常组,模型组,脑复康(阳性药物,0.6 g·kg^(-1)·d^(-1))组,EPP(相当生药量4 g·kg^(-1)·d^(-1))组。给大鼠颈背部皮下注射1%D-半乳糖(5 m L·kg^(-1)·d^(-1),连续3周)后,腹腔注射东莨菪碱(2 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续后2周)复制大鼠老年痴呆模型;造模1周后同时对脑复康组及EPP组大鼠每天灌胃给相应实验药物,正常组及模型组大鼠灌胃给生理盐水1 mL。实验结束,处死各组大鼠,取出脑组织,一半置于10%中性甲醛液浸泡固定待组织切片检查,另一半置于冰上匀浆,进行mRNA及蛋白提取;运用尼氏染色、免疫组化观察各大鼠大脑皮层第一躯体感觉区(S1Tr)和海马CA1与CA3区的阳性神经元数量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各大鼠大脑内的α3和α7-nAChR mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠大脑S1Tr区和海马CA1及CA3区神经元数量显著减少,大脑内α3和α7-n AChR mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.01);EPP能增加痴呆大鼠大脑S1Tr区和海马CA1及CA3区神经元数量,能升高痴呆大鼠大脑内α3和α7-n AChR mRNA和蛋白的表达水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:EPP能保护大脑认知学习记忆有关重要区的神经细胞,同时触发α3和α7-n AChR受体效应,提高中枢乙酰胆碱(ACh)含量,进而升高老年痴呆大鼠中枢胆碱能系统活性。

基于NLRP3炎性小体活化探讨地龙提取物对肺动脉高压的保护机制

目的研究地龙提取物对肺血管内皮细胞损伤及肺动脉高压的保护作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、模型+地龙提取物组及地龙提取物组,给予地龙提取物干预后,采用颈静脉插管检测各组大鼠右心室收缩压,计算右心室肥大指数;分离肺组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺血管形态学变化;采用免疫荧光及Western blotting法检测肺组织Nod样受体家族的吡啶结构域3 (Nod-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)蛋白表达;采用流式细胞术检测肺组织活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)水平;采用ELISA法检测肺组织白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和IL-18水平。体外培养人肺动脉内皮细胞(human pulmonary arterial endothelial cell,HPAEC),给予NLRP3激动剂尼日利亚菌素诱导细胞损伤,考察地龙提取物对HPAEC凋亡、线粒体功能、ROS水平及IL-1β、半胱氨酸蛋白酶-1 (Caspase-1)和IL-18蛋白表达的影响。结果与对照组比较,模型组大鼠右心室收缩压和右心肥大指数显著升高,肺血管壁增厚(P<0.01),肺组织NLRP3蛋白表达水平显著升高,ROS、IL-1β、IL-6和IL-18水平升高(P<0.01);地龙提取物可显著降低模型大鼠右心室收缩压和右心肥大指数(P<0.01),改善肺血管重构,同时下调肺组织NLRP3蛋白表达、ROS、IL-1β、IL-6和IL-18的水平(P<0.05、0.01)。尼日利亚菌素诱导HPAEC线粒体结构损伤及ROS增强,导致细胞凋亡(P<0.01);地龙提取物对尼日利亚菌素诱导的HPAEC凋亡、ROS水平、线粒体功能损伤及IL-1β、IL-6和IL-18蛋白表达有显著抑制作用(P<0.05、0.01)。结论地龙提取物通过降低肺血管内皮NLRP3诱导的线粒体ROS水平升高和炎症反应,从而减轻肺动脉高压。

闪式提取猴头菌-地龙生物转化物中抗凝血活性成分的工艺研究

目的优选闪式提取猴头菌-地龙生物转化物(Hericium erinaceus-Pheretima biotransformation,HD)中抗凝血活性成分工艺参数。方法以活化部分凝血酶时间为评价指标,以水作提取溶剂,提取2次,通过响应面设计试验法,对闪式提取HD中抗凝血活性成分的主要工艺参数进行优化。结果闪式提取HD中抗凝血活性成分的最优工艺条件为:提取2次,第1次提取加水12倍,5 500 r·min^(-1)提取7 min;第2次提取加水10倍,5 500 r·min^(-1)提取7 min。在此工艺条件下所制备提取液的活化部分凝血酶时间均值最高,为(53.42±3.02)s。结论通过优化与验证,首次创立了闪式提取HD中抗凝血活性成分的工艺路线。该工艺提取速度快,提取溶剂无毒,提取设备操作简单、所占空间小,节约资源。