向日葵黑茎病菌分离鉴定及其RFLP分析

【目的】对新疆近期发生的向日葵黑茎病进行病原菌分离鉴定,并对该菌进行RFLP分析。【方法】用常规分离培养法从田间采集的向日葵黑茎病病株获得致病菌,观察该菌的形态学特征;用PCR法对该菌ITS区进行扩增和测序,并与向日葵茎点霉黑茎病菌进行分子比对,明确二者的同源性;选取10种限制性内切酶对该菌的ITS区PCR产物进行RFLP分析。【结果】该菌的形态学特征为茎点霉属真菌,与向日葵茎点霉黑茎病菌的同源性达到99%以上,说明该致病菌为向日葵茎点霉黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi。通过RFLP分析确定了该病菌的酶切位点。【结论】该致病菌的形态学和分子生物学鉴定结果表明,向日葵黑茎病由向日葵茎点霉黑茎病菌引起。

不同营养和培养条件对向日葵黑茎病菌生长特性的影响

【目的】对向日葵黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi生态适应性中的营养和培养条件进行研究,以期建立常规生物学检测方法,以便采取有效检疫处理措施。【方法】不同营养和培养条件下(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照),对该菌培养7 d,测量其菌落直径大小和观察其生长状况。并用SPSS 12.0软件进行相应的计算处理、统计分析。【结果】向日葵黑茎病菌在PDA、HLA培养基上生长较好,在WA培养基上生长较慢。该病菌能充分利用可溶性淀粉和硝酸钾。在温度4～32℃均能生长,最适生长温度为24～28℃,适宜生长的pH 4.0～8.0,最适pH 5.0～7.0;在全光照培养条件下有助于菌丝的生长。【结论】通过不同营养和培养条件下的生长情况,可知该病菌的最适生长条件,有助于对该病菌进行有效的检疫处理。

进境哈萨克斯坦油葵中向日葵黑茎病菌的检疫鉴定

依据出入境检验检疫行业标准SN/T 3174-2012,对新疆口岸进境的哈萨克斯坦油葵中的向日葵黑茎病菌进行检疫鉴定。挑取油葵样品中的可疑病种子和植株残体作为实验材料,分别提取其DNA,用向日葵黑茎病菌特异性检测引物LEPB/LEPF对挑取的样品进行PCR检测初筛,初筛结果阳性者,进行病原分离培养。对分离获得的阳性纯培养菌株的菌落、孢子形态进行观察,PCR检测及致病性测定,最终确定其为向日葵黑茎病菌。本研究从进境哈萨克斯坦油葵中分离到检疫性病原菌,新疆周边口岸应进一步加强疫情监测与调查。