PKC激活剂佛波酯PMA和抑制剂Staurosporine对大肠癌HT-29细胞黏附作用的影响

目的 探讨蛋白激酶C(PKC )激活剂佛波酯PMA和PKC抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT -2 9细胞黏附作用的影响。方法 采用体外细胞培养观察、细胞黏附人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)测定、Westernblot分析黏附分子E Cadherin(E Cad)、LamininReceptor(LnR)、αCatenin和αCatenin表达等方法,研究PMA和SP对HT- 2 9细胞黏附作用的影响。结果 从体外细胞培养观察和黏附HUVECs实验结果发现,10 0nmol/LPMA处理后,和培养液对照组相比可见HT- 2 9细胞由圆形变成成纤维细胞样生长,细胞发生游走、扩散,HT -2 9细胞间黏附减弱,而对HUVECs的黏附增强(P <0 .0 5 )。而10 0nmol/LPMA和10 0nmol/LSP联合处理HT 2 9细胞,可见细胞成片生长,HT- 2 9细胞间黏附增强,而对HUVECs的黏附则降低(P <0 .0 5 )。Westernblot分析结果提示,培养液对照组细胞可较高水平表达E Cad、LnR ,而低水平表达αCatenin、αCatenin。10 0nmol/LPMA作用细胞可诱导HT- 2 9细胞LnR表达水平增强,而E Cad表达水平轻度减弱,对αCatenin、α- Catenin表达水平无作用。而SP可拮抗PMA的作用,使LnR表达水平降低,E Cad表达水平增强,而对α- Catenin和α- Catenin的表达亦无影响。结论 PKC激活剂佛波酯PMA可促使肿瘤细胞间的同质性黏附能力减弱,与HUVECs间?

水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响

目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞。蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异。结果气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性。PMA 20ng/mL刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P<0.05),两者差异有统计学意义。PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌。原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化。结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌。

人参二醇组皂甙对佛波酯诱导心肌细胞蛋白激酶C活力的影响

人参二醇组皂甙对佛波酯诱导心肌细胞蛋白激酶Ｃ活力的影响徐学萍，肖殿模，周文华，王小鲁，张俊宝，邵春杰，赵雪俭，陈华粹（中国医学科学院，中国协和医科大学基础医学研究所北京１００００５）人参皂甙为人参主要活性成分之一，有多种药理活性和防治心血管疾病的作用...

蛋白激酶C表达上调与KBV200细胞多药耐药的关系

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)的表达上调与肿瘤多药耐药的关系。方法:32P掺入法测定多药耐药KBV200细胞株的PKC活性;Westernbloteing法检测PKC亚型表达和亚细胞分布;MTT法检测细胞耐药性;实验组应用200nmol/L佛波酯(PMA)预孵育KBV200细胞。结果:PMA可提高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性,降低浆组分PKC活性(P<0.01);使膜组分PKCα表达增加,浆组分PKCα表达降低,膜组分PKCβ无明显变化,浆组分PKCβ的表达稍增强;PMA可升高长春新碱(VCR)、阿霉素(ADR)对KBV200细胞的IC50值(P<0.01)。结论:PMA使KBV200细胞耐药性增加,可能与PKC表达上调有关。

细胞呼吸爆发的微量量热学研究

The heat production of Wistar rat polymorphonuclear leukocytes (PMN) was measured by an LKB 2277 Thermal Activity Monitor. When PMN were activited with phorbol-12-myristate13-acetate (PMA), the respiratory burst was recorded by greatly incr eased heat production. Experiment was also carred out in the present of the inhibitor, Total Flavonoids of Lycium Barbarum L. (TFL). The respiratory burst heat production peak was disappeared, but the heat production curve was higher than that of PMA because TFL increased the metabolic activities of PMN.

4种刺激剂对小鼠腹腔巨噬细胞生成白细胞介素6的研究

用白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ＩＬ６）依赖细胞株Ｂ９的ＭＴＴ法，研究了４种刺激剂ＰＭＡ，Ａ２３１８７，ｆＭＬＰ和ＬＰＳ对小鼠腹腔巨噬细胞生成及分泌ＩＬ６的影响。分别检测了巨噬细胞培养上清液及胞溶部分ＩＬ６的含量。结果表明，ＰＭＡ（０１～１０μｍｏｌ·Ｌ－１），Ａ２３１８７（００１～１μｍｏｌ·Ｌ－１），ｆＭＬＰ（００２５～２５μｍｏｌ·Ｌ－１）均能促进巨噬细胞生成及分泌ＩＬ６，且有量效关系。ＬＰＳ（０１～１０μｇ·ｍｌ－１）能增加巨噬细胞培养上清液中ＩＬ６的含量，但对胞溶部分无影响。结果提示：巨噬细胞ＩＬ６的生成及分泌与蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和钙离子通道活化有关；

不同方法诱导THP-1细胞分化效果比较

目的优化不同方法刺激THP-1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础。方法首先用PMA和GM-CSF/M-CSF两种方法刺激诱导THP-1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况。结果两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致。THP-1-M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP-1-M2细胞高表达CD163和CD209;THP-1-DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c。PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM-CSF/M-CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长。结论两种方法均能成功地诱导THP-1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法。

佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用

目的探讨佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素(granulysin,GLS)表达的激活作用。方法分别用不同浓度的PMA(130、160、180 nmol/L)诱导THP-1细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中GLS基因mRNA的转录,筛选PMA最佳诱导浓度;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24和48 h,RT-PCR法检测GLS基因mRNA的转录,筛选最佳诱导时间;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24、48和72 h,Western blot法检测GLS蛋白的表达,免疫细胞化学法检测48 h时GLS蛋白的表达。结果以160 nmol/L的PMA诱导THP-1细胞24 h,细胞中GLS基因mRNA的转录水平最高;诱导48 h后可检测到GLS蛋白大量表达。结论 PMA可激活THP-1细胞中GLS的表达,本实验为后续进一步研究GLS表达的调控机制奠定了基础。

THP-1分化巨噬细胞用于检测细胞免疫的体外方法的建立

目的建立THP-1分化巨噬细胞用于检测细胞免疫的体外方法。方法将HPV治疗性疫苗原液参考品及样品用含佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)的RPMI1640培养基稀释后,加入THP-1细胞,设PMA对照(只加PMA),37℃,5%CO2培养箱孵育,取上清,检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量,测定样品体外相对效力。按上述方法对细胞密度(2.0×105、5.0×105、10.0×105个/ml)、PMA终浓度(2.8、8.3、25、75、225 ng/ml)和培养时间(2、3、4 d)进行优化,确定最佳检测条件。用HPV预防性疫苗原液及ELISPOT法验证该方法的有效性。结果优化的最佳检测条件为:细胞密度5.0×105个/ml,PMA终浓度25 ng/ml,培养时间3 d。验证结果表明该方法有效可行。结论建立了THP-1分化巨噬细胞用于检测细胞免疫的体外方法,为检测治疗性疫苗的细胞免疫提供了一个体外检测平台。