佛波酯磷脂酰-L-丝氨酸(PEPS)中间体的合成工艺改进

目的改进佛波酯磷脂酰-L-丝氨酸(PEPS)的中间体3-苄基-2-(8-叔丁基二苯基硅氧辛酰基)-1-三苯甲基-sn-甘油(9)和N-叔丁氧羰基-L-丝氨酸二苯甲酯(11)的合成工艺。方法以D-甘露醇为原料,经丙叉基保护、氧化-还原、苄基保护、脱丙叉保护、选择性保护、酯化、羧基还原、硅烷基保护合成化合物9;以L-丝氨酸为原料,经氨基、羧基保护合成化合物11。结果与结论目标化合物的结构经1H-NMR谱确证,改进后的工艺,缩短了合成路线,简化了柱色谱分离、纯化步骤,具有原料易得,操作简便,成本低廉的优点。

贮存血小板形态变化与凋亡因子磷脂酰丝氨酸表达的研究

目的探讨储存期间机采血小板形态变化、凋亡因子磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl serine,PS)表达以及两者之间的关系,为确立血小板体外保存时限提供实验依据。方法应用May-Grunwald-Giemsa染色方法观察机采血小板储存0-8d时的形态变化,同时应用流式细胞术检测血小板的膜PS表达率。结果储存至第4天,血小板形态出现损伤,表现为形态学计分与新鲜血小板相比显著下降(t=2.341,P<0.05);随着储存时间延长,血小板形态学计分持续下降,至第7天,形态学计分下降31%。血小板凋亡因子PS表达,储存1d组与新鲜血小板0d组相比有明显升高(t=3.088,P<0.05);储存1-3d,PS表达无明显变化,储存至第4天,PS表达显著增加(t=2.1612,P<0.05);储存5-8d,PS表达持续增加,各组间有统计学差异(P均<0.05)。血小板形态学变化分值与膜PS的表达随储存时间延长呈负相关性(r=-0.9923,P<0.01)。结论储存血小板形态学变化分值与膜PS表达率高度负相关。

流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较

目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法。方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况。结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观。结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法。

钴^(60)辐照对存储红细胞体内清除相关指标的影响

目的评估钴60辐照对MAP保存液中红细胞体内清除相关指标造成的影响,寻找辐照促进红细胞在体内清除的可能机制。方法将滤除白细胞的红细胞悬液分3组:对照组不予辐照,即刻辐照组在采集后立刻辐照,14 d辐照组在保存14 d后进行辐照。在储存期的d1、7、14、21、28、35检测3组红细胞平均细胞体积(MCV)、红细胞刚性指数及丝氨酸磷脂(PS)。结果辐照后短时间内3组间MCV无差异,d14日起即刻辐照组与其它2组出现差异,且差异随保存时间的延长而增大。14 d辐照组在辐照前MCV升高缓慢,辐照后升高加速,但至d35时仍低于即刻辐照组。这种变化规律同样可以见于红细胞刚性指数。PS呈缓慢升高,存储至d28天3组才开始出现明显差异,即刻辐照组PS阳性率最高,对照组最低。结论钴60辐照可能通过影响平均细胞体积及红细胞变形性,促进红细胞体内清除,降低红细胞活力。辐照可促进丝氨酸磷脂缓慢外化,但在血液存储有效期内应该不是引起红细胞清除率增高的主要原因。

沙库巴曲缬沙坦对原发性高血压的治疗效果及机制研究

目的:探讨沙库巴曲缬沙坦对原发性高血压(EH)的治疗效果,并分析其可能机制。方法:随机数字表法将168例EH患者均分为两组,其中对照组服用替米沙坦降低血压,观察组服用沙库巴曲缬沙坦降血压,两组均持续服用12周。比较两组治疗前后血压(收缩压、舒张压)、氧化应激[晚期氧化蛋白产物(AOPP)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)]、炎症反应[白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、PI3K/AKT信号蛋白[PI3K、AKT、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)]及血管内皮功能[血管内皮细胞(VEC)数目、VEC表达频率、血管内皮舒张功能(FMD)、血管内皮功能障碍]变化情况。结果:与治疗前比,两组治疗后收缩压、舒张压、AOPP、NO、IL-1、IL-6、TNF-α、p-AKT、血管内皮功能障碍发生率均明显下降,血清SOD、PI3K、AKT、VEC数目、VEC表达频率、FMD明显增大(均P<0.05)。观察组治疗后的收缩压、舒张压、AOPP、NO、IL-1、IL-6、TNF-α、p-AKT、血管内皮功能障碍发生率均明显低于对照组,血清SOD、PI3K、AKT、VEC数目、VEC表达频率、FMD明显大于对照组(均P<0.05)。结论:沙库巴曲缬沙坦具有良好的降血压作用,同时可通过调节PI3K/AKT信号通路,抑制EH体内氧化应激和炎症反应,促进患者VEC增殖,逆转血管内皮损伤。

超极化停搏对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察超极化停搏对体外循环(extracorporeal circulation,ECC)中缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,评价其对心肌的保护作用。方法将75只健康家猫随机均分为3组。应用猫ECC模型。并行循环组:ECC建立后不阻断上、下腔静脉和主动脉,仅并行循环150 min;去极化停搏组:主动脉阻断(ACC)60 min,再灌注60min,心脏停搏液使用去极化高钾St.Thomas液;超极化停搏组:心脏停搏液使用含吡那地尔的低钾St.Thomas液,余处理与去极化停搏组相同。应用Annexin-V/PI联合染色、流式细胞仪检测心肌细胞膜磷脂酰丝氨酸的外翻,比较超极化停搏处理组及去极化停搏组ECC过程中心肌细胞坏死和凋亡的数量。结果去极化停搏组于ACC 60min及再灌注60 min时坏死心肌细胞率分别为(2.727±0.436)%及(5.622±1.389)%;而超极化停搏组分别为(1.514±0.333)%和(3.052±0.403)%。两组ACC 60 min时,均未检出凋亡心肌细胞,但在再灌注60 min时,去极化停搏组和超极化停搏组凋亡细胞率分别达(2.253±0.581)%和(0.875±0.232)%。超极化停搏处理组缺血再灌注期间坏死及凋亡的心肌细胞明显减少。结论超极化停搏不仅能减少ECC缺血再灌注导致的细胞坏死,而且能够抑制再灌注期间发生的细胞凋亡。

Wortmannin抑制PI3K途径对K562细胞增殖和Ara-C诱导的细胞凋亡的影响

目的 :探讨磷酰肌醇 - 3激酶 (PI3K)途径在K5 6 2、NB4和HL6 0细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用 .方法 :用磷酰肌醇 - 3激酶 (PI3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K活性 ,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V (Annexin -V -Flous)标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数 .观察K5 6 2、NB4和HL6 0细胞增殖能力及凋亡抗性的变化 .结果 :K5 6 2、NB4和HL6 0细胞在 2 4、 4 8、 72h的增殖抑制率分别为 4 1 33%、 5 7 4 6 %、 6 5 85 %和 2 6 2 9%、 5 5 1%、 2 10 %及 32 14 %、 17 14 %、13 14 % .生长曲线显示Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K5 6 2细胞的增殖 (P <0 0 5 ) ,而对NB4和HL6 0细胞增殖无明显影响 (P >0 0 5 ) .K5 6 2、NB4和HL6 0细胞加和不加Wortmannin ,培养 14d后的集落形成率分别为 :16 15 %和 7 6 0 % ,5 90 %和 6 10 % ,6 6 0 %和 6 4 0 % .集落形成抑制率为 5 2 94 %、3 39%和 3 0 3% .Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K5 6 2细胞的集落形成 (P <0 0 5 ) ,而对NB4和HL6 0细胞集落形成无明显影响 (P >0 0 5 ) .K5 6 2、NB4和HL6 0细胞加WT、AraC、WT +AraC作用 2 4h后的凋亡细胞百分比分别为 (17 2 7± 1 94 ) %、 (2 3 2 5± 14 12 ) %、 (17

miR-23b过表达对高糖诱导近端肾小管上皮细胞EMT及PI3K-AKT通路的影响

目的研究过表达miR-23b对高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及PI3K-AKT通路的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为4组:正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、miR-23b阴性对照(NC)组和miR-23b过表达(mimic)组,转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23bmRNA的表达,光学显微镜观察细胞形态,qRT-PCR检测波形蛋白(VIM)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-CD) mRNA的表达,蛋白免疫印迹(WB)检测VIM、α-SMA、E-CD、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。结果与NG组比较,HG组中miR-23b表达显著下调,差异有统计学意义(P <0. 05);转染miR-23b mimic后,HK-2细胞中miR-23b表达显著上调(P <0. 05)。与NG组比较,HG组、NC组和mimic组HK-2细胞出现大量纺锤形细胞,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达显著上调(P <0. 05),E-CDmRNA和蛋白表达显著下调(P <0. 05),PTEN蛋白表达上调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达下调(P <0. 05);与HG组、NC组比较,mimic组HK-2细胞纺锤形细胞数量明显减少,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P <0. 05),E-CD、PI3K mRNA和蛋白表达上调(P <0. 05),PTEN蛋白表达下调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达上调(P <0. 05)。结论过表达miR-23b抑制高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT通路激活有关。

缺氧诱导因子在常氧条件下的调节

缺氧诱导因子(HIF-1α)对细胞内缺氧应答起着关键的作用,目前的研究主要集中在其缺氧条件下的机制调节。实际上,含氧量正常条件下,缺氧诱导因子同样可以通过不同的受体介导因子,如生长因子和细胞因子达到同样的目的。综合缺氧诱导因子常氧条件下调节的有关机制以对其有更全面的了解。

注射磷脂酰丝氨酸对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响

为研究磷脂酰丝氨酸(PS)对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响,并探讨PS激活凡纳滨对虾血蓝蛋白发挥酚氧化酶活性的机制,实验采用5、10和20μg/mL 3个PS浓度对凡纳滨对虾尾节肌肉进行注射,注射量为50μL,对照组注射生理盐水,各处理组设3个平行组,取样时间为0、6、12、24、36、48和60 h,分别测定了血浆血蓝蛋白含量,肝胰脏血蓝蛋白p75、p77亚基和mRNA的表达以及血浆血蓝蛋白酚氧化酶活性。结果显示:与对照组相比,血蓝蛋白含量在6 h内略有下降,6～36 h内呈峰值变化,24 h时达到最大值(P<0.05);血蓝蛋白亚基p75、p77和mRNA表达在0～36 h内呈峰值变化,12 h时达到最大值(P<0.05);血蓝蛋白酚氧化酶活性在36 h内呈峰值变化,12 h时达到最大值(P<0.05)。研究表明,PS能够激活凡纳滨对虾血蓝蛋白的酚氧化酶活性,表现出明显的时间剂量效应,同时在短时间内引起血蓝蛋白含量下降,随后机体启动血蓝蛋白的合成机制,证实PS是凡纳滨对虾血蓝蛋白发挥酚氧化酶活性的激活因子,为对虾血蓝蛋白免疫活性的研究奠定了理论基础。

核桃健脑片对东莨菪碱诱导记忆障碍小鼠的作用及其机制考察

目的:考察核桃健脑片对东莨菪碱诱导记忆障碍小鼠的作用及机制。方法:小鼠随机分为正常组,模型组,磷脂酰丝氨酸组(40 mg·kg^(-1)),核桃酶解提取物(66.7 mg·kg^(-1))组,核桃健脑片低(333 mg·kg^(-1))、中(667 mg·kg^(-1))、高(1 333mg·kg^(-1))剂量组,连续给药30 d后注射东莨菪碱进行跳台测试,观察潜伏期和错误次数。各组小鼠连续给药第26~30天注射东莨菪碱进行水迷宫测试,观察定位航行测试的逃避潜伏期和空间探索测试穿越原平台次数、到达原平台的时间和在原平台象限游泳的时间;然后取脑组织测定乙酰胆碱酯酶(AChE)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、Na^+/K^+-ATP酶(Na^+/K^+-ATPase)的活性,试剂盒测定乙酰胆碱(ACh)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果:核桃健脑片中、高剂量可减少跳台测试中小鼠错误次数(P<0.05);缩短水迷宫定位航行测试的逃避潜伏期和空间探索测试的到达原平台时间(P<0.05),增加在原平台象限游泳的时间(P<0.05)和穿越原平台次数。核桃健脑片中、高剂量可降低脑组织的ACh E活性和GABA含量(P<0.05),增加脑组织的ChAT和Na^+/K^+-ATPase的活性,增加ACh、Glu的含量(P<0.05)。结论:核桃健脑片中、高剂量可改善东莨菪碱诱导记忆障碍小鼠的学习记忆,其作用机制与调节ACh的代谢,调节Glu与GABA的比例,增加Na^+/K^+-ATPase的活性有关。

血小板参数和血小板聚集功能检测对2型糖尿病治疗后监测的临床价值探讨

目的探讨血小板参数及血小板聚集功能检测对2型糖尿病(T2DM)诊治的临床价值。方法选择2020年4—9月于蚌埠医学院附属连云港市第二人民医院内分泌科进行住院治疗的非初诊T2DM患者60例纳入治疗组,选取同期门诊确诊、初发、未经治疗的T2DM患者60例纳入初发组,选取同期排除T2DM的健康体检者60例纳入对照组。采用全自动血液分析仪检测3组研究对象的血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、血小板平均体积(MPV)及血小板压积(PCT);采用血小板聚集仪分别以花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)及胶原(COL)为诱导剂来检测3组研究对象的血小板最大聚集率(PAgTm);采用流式细胞仪检测血小板P-选择素和磷脂酰丝氨酸(PS)外翻的表达;比较3组间各项指标水平;绘制MPV、AA-PAgTm、ADP-PAgTm、COL-PAgTm、血小板P-选择素及PS外翻辅助诊断T2DM的ROC曲线,并分析其诊断价值。结果治疗组MPV明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001),而PCT、PDW、PLT、AA-PAgTm、ADP-PAgTm、COL-PAgTm、血小板P-选择素及PS在两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);初发组MPV、血小板P-选择素、PS外翻、AA-PAgTm、ADP-PAgTm、COL-PAgTm明显高于对照组和治疗组,差异有统计学意义(P<0.001),而PCT、PDW、PLT 3组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MPV、PAgTm及血小板P-选择素和PS可以作为T2MD患者治疗后血小板活性监测的有效指标来辅助T2MD的诊治。

基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究

为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达,使用rTaq酶从E coli K12总DNA中PCR扩增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段,将其重组于高效表达载体pET28b质粒,转入相应表达菌株进行表达,收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液,使用两相反应体系进行生物转化,HPLC-ELSD手段进行酶活检测。结果显示,重组菌株中PSS的酶活力比对照有所提高,同时获得酶活力提高的突变基因pssE210G。将突变基因重组于更高效的表达载体pBAD-MCS,转入相应宿主菌株表达。结果显示E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)表达的酶活性明显优于E.coli BL21(pET28b-pss)中表达的酶活性。以上实验结果表明,将目的基因重组于高效表达质粒有助于提高酶活力;组合到不同的表达质粒,酶活提高程度不同;磷脂酰丝氨酸合成酶基因第73位氨基酸发生突变,对其酶结构和酶活力有直接的影响。

大豆粉末磷脂主要成分抗氧化能力对比研究

通过对大豆粉末磷脂主要成分的羟基自由基消除率和应用抗氧化实验,对比大豆粉末磷脂主要成分的抗氧化性差异。结果表明,大豆粉末磷脂主要成分的抗氧化性由大到小为磷脂酰乙醇胺>磷脂酸>磷脂酰丝氨酸>磷脂酰胆碱>磷脂酰肌醇,其中抗氧化性最强的磷脂酰乙醇胺自由基清除率达到96.54%,应用过氧化值提高了7.16%~8.29%,抗氧化能力相当于同等用量下维生素C的85.20%~100.00%;抗氧化性最弱的磷脂酰肌醇羟基自由基清除率达63.94%;应用过氧化值提高了32.58%~33.80%,抗氧化能力相当于同等用量下维生素C的18.32%~23.08%。

骨髓基质抗原蛋白2对甲状腺乳头状癌细胞转移活性的影响

目的探究骨髓基质抗原蛋白2(BST2)调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路对甲状腺乳头状癌细胞增殖、转移和凋亡的影响.方法选取2022年8月至2023年11月在山西省肿瘤医院诊治的11例甲状腺乳头状癌患者[(65±8)岁]中收集癌组织和癌旁组织.将甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,通过随机数表法随机分为4组:阴性对照组,siBST2组,PI3K/Akt信号通路抑制剂组、pcDNA BST2组.免疫组化分析甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织BST2的表达水平;CCK-8实验分析各组TPC-1细胞的增殖能力;细胞划痕实验分析各组TPC-1细胞的迁移能力;Transwell实验分析各组TPC-1细胞的侵袭能力;流式细胞术分析各组TPC-1细胞凋亡率;蛋白免疫印迹分析TPC-1细胞中BST2和PI3K/AKT通路蛋白的表达.两组间比较采用独立样本t检验.结果甲状腺乳头状癌组织中BST2表达高于癌旁组织(0.17±0.03比0.83±0.05,t=12.905,P<0.05);siBST2组TPC-1细胞的BST、Akt、PI3K蛋白表达低于阴性对照组(0.60±0.02比0.13±0.02,t=11.367,P<0.05;0.59±0.05比0.11±0.03,t=9.235,P<0.05;0.51±0.06比0.15±0.03,t=15.325,P<0.05);pcDNA BST2组的TPC-1细胞的BST、Akt、PI3K蛋白表达高于阴性对照组(0.60±0.02比0.88±0.55,t=11.911,P<0.05;0.59±0.05比0.81±0.03,t=16.255,P<0.05;0.51±0.06比0.82±0.03,t=13.271,P<0.05);siBST2组、PI3K/Akt信号通路抑制剂组的TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力低于阴性对照组(85.12±8.12比153.28±9.88,t=12.766,P<0.05;81.62±9.33比153.28±9.88,t=11.698,P<0.05);siBST2组、PI3K/Akt信号通路抑制剂组的TPC-1细胞的凋亡率高于阴性对照组(13.05±1.16比6.70±0.12,t=9.081,P<0.05;14.36±0.98比6.70±0.12,t=11.661,P<0.05);pcDNA BST2组的TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力高于阴性对照组(209.78±15.92比153.28±9.88,t=12.568,P<0.05);pcDNA BST2组的TPC-1细胞凋亡率低于阴性对照组(3.56±0.05比6.70±0.12,t=12.562,P<0.05).结论下调BST2或抑制PI3K/Akt信号通路能够抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进TPC-1细胞凋亡.

PI3K／Akt信号通路在发育期大鼠癫痫持续状态后海马内HIF一1α表达中的作用

目的探讨发育期大鼠癫痫持续状态后海马内低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达与磷脂酰肌醇．3激酶（P13K1／丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路之间的关系。方法21d龄SD大鼠54只按随机数字表法分为生理盐水组（n=24）、模型组（n=24）和渥曼青霉素干预组（n=6），其中模型组腹腔注射戊四氮（PTZ）诱导建立癫痫持续状态模型，生理盐水组腹腔注射等量生理盐水，渥曼青霉素干预组于癫痫持续状态模型建立前30min腹腔注射0．5mg/kg渥曼青霉素。分别于建模后1、4、8、24h处死大鼠取出海马，应用免疫组化染色检测HIF-1α、Akt阳性细胞表达，Westernblottiong检测HIF-1α、Akt及磷酸化Akt（p-Akt）蛋白含量。结果模型组海马内HIF-1α阳性细胞及蛋白于建模后lh即开始表达，4h明显升高，8h达高峰，24h后下降；Akt阳性细胞及蛋白表达在各时间点间无明显变化；P-Akt蛋白于建模后lh即明显升高，4h达高峰，8h开始下降。生理盐水组各时间点HIF—let阳性细胞及蛋白、P-Akt蛋白仅有极少量表达，其中模型组各时间点HIF-let阳性细胞及蛋白表达均明显高于生理盐水组，差异有统计学意义fP〈O．05）；Akt阳性细胞与蛋白表达与生理盐水组比较差异无统计学意义（pO．05）；建模后1、4、8hP．Akt蛋白表达明显高于生理盐水组，差异有统计学意义（氏0．05）。渥曼青霉素干预组HIF-1α、p-Akt蛋白表达于建模后4h有明显下降，与模型组比较差异均有统计学意义（p＜0．05）。结论发育期大鼠癫痫持续状态后可激活P13K／Akt信号通路，并参与调控海马内HIF—1α的表达。

PIK3CA过表达与鼻咽癌发生及预后的关系

目的:分析磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)过表达与鼻咽癌发生及预后的关系。方法:对正常鼻咽黏膜、癌旁组织以及鼻咽癌组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)与PIK3CA的表达状况进行检测,用免疫组织化学方法对其与肿瘤的发展关系进行深入分析;对肿瘤分期、预后与PIK3CA过表达之间的关系进行全面分析。结果:癌旁组织、鼻咽癌组织中pAkt、PIK3CA的表达明显升高(P<0.05)。PIK3CA过表达的程度和肿瘤临床分期之间存在显著相关性(T分期:r=0.437,P<0.01;N分期:r=0.318,P<0.05;临床分期:r=0.496,P<0.01)。与PIK3CA表达阴性者相比,PIK3CA表达阳性者有着更差的总生存预后(P<0.01)。结论:PIK3CA在鼻咽癌组织中呈现高表达,其与更差的临床分期及总生存预后呈显著相关。

丙泊酚对乳腺肿瘤细胞磷脂酰肌醇3-激酶／丝氨酸蛋白激酶信号通路的影响

目的观察丙泊酚对乳腺癌肿瘤细胞Michigan Cancer Foundation-7（MCF-7）细胞表面γ-氨基丁酸受体介导的磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路的影响，探讨其对乳腺癌细胞的增殖是否存在抑制作用。方法依据丙泊酚浓度分为100 μmol/L丙泊酚组、300 μmol/L丙泊酚组、1 mmol/L丙泊酚组、3 mmol/L丙泊酚组，设置无丙泊酚干预的空白对照组及不同浓度丙泊酚＋γ-氨基丁酸拮抗剂荷包牡丹碱干预组，运用全细胞膜片钳技术观察不同浓度丙泊酚干预组、对照组及丙泊酚联合γ-氨基丁酸拮抗剂组对MCF-7细胞的细胞膜表面氯离子通道的影响；用蛋白印迹法检测MCF-7细胞内PI3K/Akt信号通路中Akt蛋白的表达；噻唑蓝（MTT）法检测丙泊酚对MCF-7细胞存活率的影响，并进行比较。结果（1）随着细胞膜电位的升高，丙泊酚呈浓度依赖性刺激MCF-7细胞氯离子的电流强度，3 mmol/L丙泊酚组电流强度为（40.13±9.21） Pa，较对照组的MCF-7细胞氯离子的电流强度（19.46±8.53） Pa相差最大，差异有统计学意义（P＝0.032）；加入γ-氨基丁酸拮抗剂荷包牡丹碱后，丙泊酚对MCF-7细胞氯离子的电流强度的影响减弱，3 mmol/L丙泊酚组电流强度为（16.92±7.47） Pa其与对照组（18.61±8.19） Pa之间差异无统计学意义（P＝0.063）；（2）Western blot法检测显示丙泊酚对MCF-7细胞PI3K/Akt信号通路中Akt蛋白表达有抑制作用；（3）随着丙泊酚浓度的增高，其对MCF-7细胞的生存抑制越强。（4）经丙泊酚培养72 h的乳腺癌组织经苏木素-伊红（HE）染色观察发现肿瘤细胞数较对照组少。 结论高浓度的丙泊酚通过刺激MCF-7细胞氯离子通道的开放，加强其与乳腺癌细胞表面的γ-氨基丁酸受体的作用，从而抑制PI3K/Akt信号通路的活性，最终抑制乳腺癌细胞的增殖。

川陈皮素对非酒精性脂肪肝大鼠降肝脂作用

目的基于磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)自噬信号通路探讨川陈皮素改善大鼠的非酒精性脂肪肝作用机制。方法60只清洁级健康雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、阳性对照组(30 mg/kg凯西莱)、低、中、高剂量川陈皮素组(10、20、40 mg/kg)。除对照组外,其余组大鼠建立非酒精性脂肪肝模型,模型制备成功后连续2周给药,末次给药后麻醉取材,通过苏木素伊红(HE)染色法观察大鼠肝组织病理变化,生化法检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,免疫印迹法(WB)检测大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62及PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果对照组大鼠肝脏外形正常,呈暗红色,光镜下可见肝小叶结构完整,胞核居中,肝细胞无脂肪变性;模型组大鼠肝脏发黄,光镜下可见肝小叶结构被破坏,肝细胞大小不均,细胞核偏倚,胞浆内可见大小不一的脂滴,肝小叶内有大量炎性细胞浸润;低、中、高剂量川陈皮素组肝细胞脂滴依次减少,脂肪变性减轻。与对照组比较,模型组大鼠肝指数,血清ALT、AST、TC、TG水平,p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、mTOR水平明显升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,川陈皮素组大鼠肝指数、血清ALT、AST、TC、TG水平以及p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、mTOR水平均依次降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平升高(P<0.05)。结论川陈皮素可减轻非酒精性脂肪肝大鼠肝损伤,其机制可能与抑制PI3K/Akt通路促进自噬有关。

基因拼接型蜡状芽孢杆菌ZY12磷脂酶D的异源表达及转酯活性的研究

磷脂酶D是一类酯键水解酶,能够水解磷脂生成磷脂酸,并在某些羟基化合物存在的条件下,通过脱水缩合生成新型磷脂。利用磷脂酶D生成新型磷脂的活性,通过生物转化可以制备稀有磷脂如磷酯酰丝氨酸等。因此,磷脂酶D在食品及医疗领域应用潜力巨大。实验室前期发现的蜡状芽孢杆菌ZY12来源新型磷脂酶D具有水解活性,但检测不到转酯活性,将其与链霉菌PMF来源磷脂酶D进行基因拼接,通过pET-30b重组质粒在大肠杆菌BL21(Lyss)中异源表达。实验结果表明,通过基因拼接手段对蜡状芽孢杆菌ZY12磷脂酶D的改造,使该磷脂酶D获得转酯活性。在诱导温度为16 ℃、IPTG添加量0.5 mmol/L、诱导时间12 h,可溶性拼接型磷脂酶D活性最高87 mU/mL。转酯反应温度为45 ℃、pH为4.5、反应时间3 h,生成磷酯酰丝氨酸产量最高7.1 mg/L。