PI3K和MAPK信号通路通过FOXO1转录因子诱导A549细胞周期的阻滞和凋亡的研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK信号通路通过FOXO1转录因子对细胞周期及凋亡的调节及其分子机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及2种抑制剂联合处理细胞之后,采用Westernblot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及其下游蛋白Bim、p27kip表达的变化;流式细胞术分析对细胞周期的影响;Annexin-FITC双染方法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示:与对照组相比,FOXO1的蛋白水平未见明显变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim、p27kip的表达相应增加。与对照组相比,LY294002和UO126均可促进A549细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡。LY294002和UO126联合作用较2种药物单独作用时,A549细胞凋亡明显增加。结论抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路可共同激活FOXO1转录因子的活性,协同促进细胞周期的阻滞,诱导细胞的凋亡。

芪丹通脉片对急性缺血再灌注大鼠心肌信号转导系统PI3K/Akt和Erk1/2的影响

目的观察中药芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积、细胞凋亡和细胞信号转导系统中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)和芪丹通脉片预处理组。生理盐水或芪丹通脉片灌胃7 d后,大鼠麻醉开胸,结扎冠状动脉前降支40 min,再灌注4 h。伊文氏兰和TTC染色测定心肌梗死范围,计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值(%,IS/AAR);TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数;Westernblot测定信号蛋白的表达。结果芪丹通脉片组的心肌梗死范围明显小于模型组[(28.8±8.4)%vs.(49.1±10.3)%,P<0.01];其心肌细胞凋亡指数亦显著低于模型组[(11.6±2.3)%vs.(20.3±4.5)%,P<0.01];而其Akt和Erk1/2的磷酸化表达水平增加,与模型组比较分别增加了2.5倍和1.9倍(P<0.01,P<0.05)。结论芪丹通脉片能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞损伤,并影响生存信号通路PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。

金纳多注射液对肾缺血再灌注损伤诱导的PI3K/AKT及ASK1/p38信号通路的影响

目的研究银杏叶提取物金纳多(Ginaton)注射液防治肾脏缺血再灌注损伤及其分子机制。方法 SD大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组(肾I/R组)和药物组3个组。药物组术前连续3 d腹腔注射金纳多注射液(50 mg.kg-)1。采用双侧夹闭大鼠肾蒂的方法制备动物模型。观察肾功能、肾组织丙二醛(MDA)水平和肾脏病理改变。TUNEL及流式细胞术检测肾细胞凋亡。Western blot分析磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K/AKT),凋亡信号调节激酶1(ASK1);p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)的激活与表达。结果 (1)与假手术组相比,缺血再灌注组AKT、ASK1及p38MAPK的活性均明显增强,凋亡的细胞数量增加。(2)与缺血再灌注组相比,金纳多组大鼠的血清Scr、BUN、肾组织MDA水平、细胞凋亡百分率及凋亡细胞的数量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);金纳多组AKT的活性显著增强,ASK1、p38的活性明显低于缺血再灌注组(P<0.05)。结论金纳多能抑制肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡,减轻肾组织病理及脂质过氧化损伤,改善缺血再灌注损伤。其作用机制与上调抗凋亡信号通路(PI3K)/AKT通路的激活,负调凋亡信号通路ASK1/p38通路的激活有密切关系。

嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平

探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2信号通路抑制剂对乳腺癌细胞缺氧诱导因子-2α表达的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶/细胞信号调节激酶1/2(MEK/ERK1/2)信号通路抑制剂对缺氧诱导的乳腺癌MCF-7细胞中缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达的影响。方法乳腺癌MCF-7细胞常规培养24 h后,分为常氧组、缺氧组、缺氧+低剂量LY294002组、缺氧+高剂量LY294002组,缺氧+低剂量U0126组和缺氧+高剂量U0126组。常氧组细胞使用含生理盐水的RPMI 1640培养基,缺氧组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴的RPMI 1640培养基,缺氧+低剂量LY294002组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴和4μmol·L-1 LY294002的RPMI 1640培养基,缺氧+高剂量LY294002组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴和40μmol·L-1 LY294002的RPMI 1640培养基,缺氧+低剂量U0126组细胞使用含100μmol·L-1氯化钴和2μmol·L-1 U0126的RPMI 1640培养基,缺氧+高剂量U0126组细胞应用含8μmol·L-1 U0126的RPMI 1640培养基,继续培养3 h。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组细胞HIF-2αmRNA的表达;采用Western blot法检测各组细胞HIF-2α蛋白、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果缺氧组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量高于常氧组(P<0.05);缺氧+低剂量LY294002组、缺氧+高剂量LY294002组、缺氧+低剂量U0126组、缺氧+高剂量U0126组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量低于缺氧组(P<0.05)。缺氧+高剂量LY294002组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量低于缺氧+低剂量LY294002组(P<0.05);缺氧+高剂量U0126组细胞中HIF-2αmRNA相对表达量及HIF-2α蛋白、p-Akt蛋白和p-ERK1/2蛋白相对表达量低于缺氧+低剂量U0126组(P<0.05)。结论PI3K/Akt和MEK/ERK1/2信号通路可能是缺氧诱导HIF-2α表达的上游信号通路,在缺氧条件下对HIF-2α具有正向调节作用,在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用。

地塞米松对急性肺损伤大鼠细胞信号转导系统ERK和PI3-K的影响

目的研究地塞米松对急性肺损伤(ALI)大鼠细胞信号转导系统中细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的影响,为临床治疗提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为损伤组、地塞米松组(DEX组)和对照组,每组12只,损伤组和DEX组均在尾静脉注入油酸0.25ml/kg建立ALI模型:①DEX组在注入油酸后15min注入地塞米松1.0mg/kg;②损伤组注入油酸后15min注入等量生理盐水;③对照组2次均注入等量生理盐水,各组均在用药后2h颈总动脉放血处死。观察各组PaO2、左肺湿/干比、肺通透性指标、肺病理,免疫组化法和免疫印迹法测定肺内PI3K、ERK和磷酸化ERK(PERK)表达。结果损伤组大鼠PaO2明显降低,左肺湿/干比、肺通透性指标升高,肺病理肺水肿及透明膜形成;DEX组上述指标较损伤组有所减轻。损伤组支气管、肺泡上皮细胞,肺血管内皮细胞,肺泡巨噬细胞上表达PI3K、ERK和PERK明显增多,DEX组表达PI3K、ERK和PERK有所下降,但两组均明显高于对照组。结论PI3K和ERK信号通路参与调节ALI的早期病程,地塞米松可能通过抑制PI3K和ERK的高表达,从而对ALI有一定的改善作用。

银杏叶提取物注射液对噪音性听力损失的保护机制研究

目的研究银杏叶提取物注射液(EGB)调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对噪音性听力损失(NIHL)的保护作用及机制。方法将SD大鼠随机分为对照组(Control组)、NIHL模型组(Model组)、低剂量EGB组(EGB-L组,0.7 mg·kg^(-1))、高剂量EGB组(EGB-H组,1.4 mg·kg^(-1))和高剂量EGB+PI3K激活剂740Y-P组(EGB-H+740Y-P组,1.4 mg·kg^(-1)EGB+0.02 mg·kg^(-1)740Y-P)。听觉脑干反应(ABR)评估各组大鼠的听力;HE染色观察大鼠耳蜗组织病理学与螺旋神经节细胞数量;RT-qPCR法测定大鼠耳蜗组织PI3K、MAPK mRNA表达;免疫印迹试验(Western Blot)法检测大鼠耳蜗组织PI3K/MAPK信号通路相关蛋白表达。CCK-8法测定耳蜗毛细胞增殖活性。结果与Control组相比,Model组大鼠在2、4、8 kHz处左、右耳的听力阈值、耳蜗组织PI3K、MAPK mRNA表达、耳蜗组织PI3K、MAPK、AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),耳蜗组织螺旋神经节细胞和毛细胞数量显著减少(P<0.05);与Model组相比,EGB-H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05)。PI3K激活剂740Y-P减弱EGB对大鼠NIHL保护作用。结论EGB可能通过下调PI3K/MAPK信号通路保护大鼠NIHL。

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对急性重症胰腺炎大鼠神经元的保护作用

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠神经元的保护作用。方法 45只健康雄性大鼠随机分为对照组、模型组和抑制剂组,每组15只。模型组大鼠给予质量分数5%牛磺胆酸钠2 mg·kg^(-1),经胰胆管注入胰腺腺体内;抑制剂组大鼠在建模后立即给予腹腔注射SB203580 10 mg·kg^(-1),对照组大鼠开腹后给予等量生理盐水经胰胆管注入胰腺腺体内。术后24 h采用免疫组织化学染色和免疫印迹法观察大鼠大脑皮层神经元中磷酸化p38(p-p38)和caspase-3的表达。结果模型组大鼠大脑皮层区p-p38、caspase-3阳性神经元数(21.6±2.5、33.1±3.8)较对照组(1.1±0.6、2.0±0.5)显著增加(P<0.05);抑制剂组大鼠大脑皮层区pp38、caspase-3阳性神经元数(15.3±1.3、16.6±1.4)较模型组显著减少(P<0.05)。结论 p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580通过抑制p38信号通路下调caspase-3表达,从而对SAP大鼠神经元起到保护作用。

米扎格列净通过抑制钠-葡萄糖共转运体1的功能抑制常染色体显性多囊肾细胞增殖和纤维化

目的探究钠-葡萄糖共转运体1(SGLT1)抑制剂米扎格列净(MIZA)在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)中的作用。方法用蛋白质印迹法、qPCR、免疫荧光染色测定PKD1^(-/-)小鼠和PKD1^(+/+)小鼠肾脏组织、人肾癌旁组织和人ADPKD组织中SGLT1的表达和分布。用MIZA处理囊肿衬里上皮细胞OX161和肾小管上皮细胞UCL93,37℃孵育24、48和72 h后通过MTT实验和集落形成实验观察细胞增殖情况。以100μmol/L MIZA处理OX161细胞48 h后,通过qPCR测定细胞中α1-Ⅰ型胶原蛋白、α1-Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白1的mRNA表达量。用犬肾细胞MDCK 3D囊肿形成实验验证MIZA对囊肿形成的作用。通过mRNA-seq数据分析筛选UCL93细胞和OX161细胞、OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h后的OX161细胞的差异表达基因,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行通路富集分析。结果SGLT1在ADPKD患者和PKD1^(-/-)小鼠多囊肾组织中的表达水平较正常肾脏组织升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光染色发现SGLT1主要表达在囊肿衬里上皮细胞。在体外实验中,MIZA呈浓度和时间依赖性地抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,3D形成实验表明MIZA抑制了囊肿的形成。mRNA-seq数据分析和KEGG富集分析结果显示,OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h的OX161细胞的差异表达基因主要富集在PI3K-Akt、MAPK等信号通路,与OX161细胞和UCL93细胞的差异表达基因富集通路相同。结论SGLT1抑制剂MIZA可能通过PI3K-Akt、MAPK等通路抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,延缓多囊肾的生长,是ADPKD的一个潜在治疗靶点。

牛多形核白细胞(PMN)中P38 MAPK,PKC和PI3-K介导的NADPH氧化酶激活和吞噬作用(英文)

用血清调理的酵母聚糖（ｓｅｒｕｍ－ｏｐｓｏｎｉｚｅｄ ｚｙｍｏｓａｎ ，ｓＯＺ）刺激多性核白细胞（ＰＭＮ）引起的Ｏ２－产生受到ｐ３８ＭＡＰＫ抑制物（ＳＢ２０３５８０），ＰＩ３－Ｋ抑制物（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）和ＰＫＣ抑制物（ＧＦ１０９２０３Ｘ）的明显抑制，这些抑制物也明显引起ｓＯＺ诱导的一种ＮＡＤＰＨ氧化酶的胞浆成分 ｐ４７ｐｈｏｘ的磷酸化。可是流式细胞分析表明，ＳＢ２０３５８０和 ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ使吞噬作用减弱，而 ＧＦＩＯ９２０３Ｘ使吞噬作用增强。这些结果表明，虽然ＰＩ３－Ｋ和ｐ３８ ＭＡＰＫ都参与ＮＡＤＰＨ氧化酶激活和吞噬作用的信号传导，但ＮＡＤＰＨ氧化酶激活的信号传导途径与吞噬作用的信号传导途径不同。

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶、磷酸肌醇3-激酶和缺氧诱导因子2α表达的变化

目的探讨大鼠低氧性肺动脉高压(FPH)形成过程中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和缺氧诱导因子2α(HIF-2α)表达的变化。方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和低氧3天、7天、14天、21天组(H3、H7、H14、H21组),每组8只,低氧组复制HPH大鼠模型。测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、管壁面积与血管总面积比值(WA%)、管腔面积与血管总面积比值(LA%);免疫组织化学或Western blot检测磷酸化ERK(pERK)、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化P38(p-P38)、磷酸化Akt(p-Akt);原位杂交和免疫组织化学检测HIF-2α的表达。结果与对照组比较,H7组大鼠mPAP开始上升(P<0.05),H14组达高水平并维持于此水平。缺氧14天后出现肺血管重塑,RVH I改变。与对照组比较,p-ERK和p-Akt在H3组表达上升(P<0.05),且在H3组、H7组、H14组和H21组肺小动脉内膜、中膜表达均为阳性。而p-P38、p-JNK蛋白在对照组与低氧组表达均不明显。HIF-2αmRNA在对照组表达弱阳性,在H14组表达升高。HIF-2α蛋白在对照组表达不明显,H7组表达达高峰,H14组和H21组维持在高水平。相关分析表明p-ERK和p-Akt均与HIF-2α蛋白(内膜)和mPAP、RVHI呈正相关(P<0.01)。结论 p-ERK、p-Akt与HIF-2α均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用。p-ERK和p-Akt可能通过在蛋白表达水平上调HIF-2α,进而上调下游目标基因,从而参与HPH发生发展。

MAPK和PI3K调节缺氧诱导因子2α对慢性阻塞性肺疾病的作用

目的探讨缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的表达变化在缺氧性肺动脉高压(HPH)中的作用和意义。方法选择COPD患者(24例)和非COPD对照组(28例)患者为研究对象,行HE染色检测两组患者肺小动脉形态学改变,应用免疫组化检测肺小动脉壁内P-AKT、P-ERK、P-JNK、P-P38表达水平,应用原位杂交和免疫组化检测肺小动脉壁内HIF-2α的表达水平。结果 COPD患者管壁面积与管总面积比值及肺小血管中膜厚度均较对照组增高(P<0.01)。COPD患者肺小血管壁P-ERK以及P-AKT和HIF-2α基因表达水平较对照组患者肺血管壁内增强,而P-JNK、P-P38表达水平较对照无明显变化。结论 MAPK信号通路和磷酸肌醇3-激酶(PI3K)信号通路以及HIF-2α可能参与了COPD患者HPH的发生。

ERK1/2和PI3-K通路在蛛网膜下腔出血大鼠海马区对神经细胞自噬的调控作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)通路对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经细胞自噬的调控作用。方法:雄性SD大鼠160只,分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组和PI3-K抑制剂LY294002组。采用二次注血法制作SAH大鼠模型,HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学染色法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-II的表达实时荧光定量PCR检测海马区ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白LC3的表达。结果:SAH组海马区神经细胞存活率低于Sham组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3的表达水平高于Sham组(P<0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞存活率均高于SAH组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3表达均低于SAH组(P<0.05);U0126组和LY294002组两组间海马区神经细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),U0126组ERK1/2、Beclin-1和LC3表达水平低于LY294002组(P<0.05),PI3-K表达水平高于LY294002组(P<0.05)。结论:ERK1/2和PI3-K通路激活共同参与SAH后神经细胞自噬的调节,且以PI3-K通路更为主要。

茶多酚没食子儿茶素没食子酸酯抗肿瘤机制研究进展

绿茶的主要成分之一茶多酚由多种儿茶素组成,其中没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最多.大量研究表明,绿茶的抗肿瘤作用主要与该分子有关.EGCG具有强烈的抗肿瘤作用,其机制复杂,如抑制细胞分裂、诱导细胞凋亡、抑制血管生成等等.最近又发现了很多新的机制,如EGCG对67kDa层黏连蛋白受体及AKT信号传导系统的作用等.EGCG抗肿瘤作用机制正逐渐变得清晰起来.本文综合了最新的发现和已证实的研究结论,对EGCG抗肿瘤机制作一综述,期待可以为新一代化疗药物的进一步深入研究提供依据.

花青素防治乳腺癌研究进展

花青素是自然界分布最广泛的水溶性植物色素之一,主要存在于植物的花、叶和果实中。近年来,流行病学、动物肿瘤模型和离体细胞研究资料提示花青素对多种肿瘤具有化学防治作用。本文就花青素防治乳腺癌的研究进展及其作用机制作一综述。

胶质细胞系源性神经营养因子促进大鼠中脑多巴胺能神经元存活与分化的机制

目的探讨胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)促进中脑多巴胺(DA)能神经元存活和分化过程中,磷脂酰肌醇3激酶(P13K)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的可能作用。方法生后大鼠中脑脑片培养,并依培养基内加入的不同物质分为空白对照组、GDNF组、PI3K通路阻断组、MAPK通路阻断组。培养6 d后,进行酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,光镜观察,计算机辅助图像分析,统计学处理;同时用Westernblotting方法检测脑片中TH的表达。结果GDNF组TH表达阳性神经元的形状更趋向成熟,其TH表达阳性神经元的密度、胞体大小和TH的表达水平均显著高于空白对照组;P13K通路阻断组TH表达阳性神经元几乎消失,其TH表达水平显著低于GDNF组而与空白对照组无显著差别;MAPK通路阻断组TH表达阳性神经元的密度及TH表达水平与GDNF组无显著区别,但TH表达阳性神经元胞体显著小于GDNF组。结论P13K通路参与介导GDNF对DA能神经元的促存活作用,而MAPK通路参与介导其促形态学分化作用。

甲状腺癌相关信号通路的研究进展

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,其发生发展与多个信号转导通路有关。其中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路经BRAFV600E突变和RET/PTC重排等所导致的通路效应可促进甲状腺乳头状癌的细胞增殖和分化,磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路可由多因素激活后与甲状腺滤泡细胞癌的恶性进展和侵袭性有关,而信号传导与转录激活因子3(STAT3)以及Notch信号通路则在甲状腺癌不同的病理类型、临床分期以及淋巴结转移等条件下所产生的生物学效应不尽相同。本文就甲状腺癌相关信号通路的研究进展作一综述。

IGF-1R调控乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导通路研究

目的：使用小分子抑制物LY294002和PD98059分别抑制磷脂酰肌醇-3激酶（ PI3K）通路和有丝分裂活化蛋白激酶（MAPK）通路的信号转导，给予胰岛素样生长因子-1（IGF-1）刺激，检测乳腺癌细胞的增殖和迁移能力的变化。方法使用CCK-8法和体外迁移实验分别检测IGF-1干预下细胞的增殖能力，并以信号通路抑制剂处理后细胞作为对照组，同样使用CCK-8法和体外迁移实验检测其增殖能力。结果 IGF-1干预第2～4天，不同浓度IGF-1（20，50，100mg/L）均显著促进MDA-MB-231细胞增殖，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；当IGF-1浓度为50mg/L时促进作用最明显；使用LY294002（25μM）或PD98059（50μM）分别阻断PI3K通路和MAPK通路后，不仅抑制MDA-MB-231细胞基础水平的增殖，而且抑制IGF-1刺激下的细胞增殖能力，与DMSO对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）；在不同浓度IGF-1（20，50，100mg/L）作用下，MDA-MB-231细胞迁移能力均增强，与对照组比较，差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论 IGF-1干预后MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力明显增强，PI3K通路和MAPK通路均参与了IGF-1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导。

脑源性神经营养因子对无血清培养的神经元保护机制的研究

目的探讨在无血清培养条件下脑源性神经营养因子(BDNF)对神经元样细胞存活的影响及其作用机制。方法在无血清条件下培养具有BDNF受体TrkB表达的神经母细胞瘤细胞SY5Y-TrkB,在培养液中单独加入BDNF,或联合加入磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂进行细胞培养,利用细胞活性测定法(MTS)检测活细胞活性。结果与在10%胎牛血清(FBS)培养液中培养的细胞相比,无血清条件下培养24、48 72 h后,SY5Y-TrkB细胞的存活率分别为51%、38%、25%。若细胞在无血清条件下培养24 h,无处理因素的细胞存活率设定为100%,给予BDNF后的细胞存活率为154%;用10μmol/L PI3K抑制剂LY294002预处理1 h,再给予BDNF后的细胞存活率为100%;而应用80μmol/LMAPK抑制剂PD98059预处理1 h,再给予BDNF后的细胞存活率为158%。结论 BDNF通过PI3K信号通路保护SY5Y-TrkB细胞免受无血清培养引起的细胞死亡。

EGF调节MT1-MMP和MMP-2的表达及其信号传导机制的研究

目的:探讨表皮生长因子(EGF)在宫颈癌Si Ha细胞中对膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的调节作用,明确其相关的信号传导机制。方法:利用EGF作为干预因素,信号通路阻断剂分别阻断表皮生长因子受体(EGFR)、AKT、ERK、p38和JNK的磷酸化,来观察EGF对MT1-MMP和MMP-2表达的影响及相关信号通路。结果:EGF在mRNA和蛋白水平上诱导MT1-MMP的表达增加和抑制MMP-2的表达;MAPK和ERK激酶抑制剂在mRNA和蛋白水平上可阻断这种诱导;PI3-K抑制剂不影响EGF对MT1-MMP的诱导,但可进一步抑制MMP-2的表达。结论:EGFR通过MAPK/ERK信号通路上调MP1-MMP的表达和下调MMP-2的表达,同时还通过PI3-K/AKT的信号通路轻度上调MMP-2的表达。此外,EGF可以提高细胞培养基中MMP-2的活性。