丹参酮ⅡA对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤磷酸化NMDA受体1表达及细胞内游离钙浓度的影响

目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)脑皮质神经细胞S897位点磷酸化的NMDA受体-1亚基(phospho-NR1 S897)表达以及细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,探讨TanⅡA对HIBD的保护作用机制。方法:7日龄新生SD大鼠240只随机分为正常对照组、HIBD组及HIBD+TanⅡA组,按Rice-Vannucci方法制作HIBD动物模型,时间点选择HIDB后3,6,12和24 h(各组各时间点n=10)。TanⅡA按1μg/g每12 h腹腔注射1次。应用Fura-2 AM标记和日立F-4500型荧光扫描仪测定[Ca2+]i。应用免疫荧光组化染色方法测定phospho-NR1 S897的表达。结果:(1)与正常对照组比较,HIBD组损伤侧脑细胞[Ca2+]i绝对值和损伤侧与对侧的[Ca2+]i比值明显升高,各时间点的差异均具有统计学意义(P<0.05);与HIBD组比较,HIBD+TanⅡA组各时间点的[Ca2+]i升高的程度均有所减轻,其中24 h损伤侧与对侧的[Ca2+]i比值较HIBD组降低24.9%,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)正常对照组大脑皮质有大量均匀分布的phospho-NR1 S897染色阳性细胞。与正常对照组比较,HIBD组各时间点损伤侧脑皮质区phospho-NR1 S897阳性表达细胞数和绿色荧光强度均明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与HIBD组比较,HIBD+TanⅡA组各时间点的损伤侧脑皮质区phospho-NR1 S897阳性表达细胞数和绿色荧光强度均升高,其中HIBD后3 h和24 h的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:TanⅡA可以减轻HIBD导致的脑皮质区phospho-NR1 S897表达减弱的程度,并降低HIBD导致的[Ca2+]i升高的程度,提示TanⅡA对脑细胞的保护作用可能是通过影响NMDA受体的表达,减少细胞内游离钙聚集而达到的。

NMDA微量注射对脑皮质细胞磷酸化NMDA受体-1亚基表达的影响

目的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体激活在多种脑神经细胞损伤的病理生理过程中起重要的作用。该研究的目的是了解NMDA直接诱导的细胞毒性反应对脑皮质神经细胞S897位点磷酸化的NMDA受体-1亚基(phospho-NR1 S897)表达的影响。方法7日龄SD大鼠40只,随机分为正常对照组和NMDA微量注射组(10mmol NMDA脑皮质内注射,于注射后1h断头取材),应用TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride)染色和荧光免疫组化染色并比较各组荧光强度OD值。结果各组脑组织切片TTC染色均大致正常;免疫荧光染色显示正常对照组脑皮质phospho-NR1 S897高表达,NMDA注射侧脑皮质phospho-NR1 S897表达明显下调,各组荧光强度OD值分别为正常对照组1.364±0.268,NMDA注射对侧1.285±0.336,NMDA注射侧0.366±0.087,与前2组比较差异有显著性(P<0.01)。结论NMDA直接诱导的细胞毒性反应使脑皮质细胞S897位点的磷酸化NR1亚基的表达显著降低,与HI导致的损伤相类似,进一步证实了缺氧缺血性脑损伤中“HI-NMDA-phospho-NR1 S897去磷酸化-细胞损伤”损伤途径的重要性。