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Using the Phosphomannose Isomerase (PMI) Gene from Saccharomyces cerevisiae for Selection in Rice Transformation
1
作者 WANG Tao LIU Liang-yu TANG Yong-yan ZHANG Xiao-bo ZHANG Mei-dong ZHENG Yong-lian ZHANG Fang-dong 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2012年第9期1391-1398,共8页
The phosphomannose isomerase (PMI) gene from Saccharomyces cerevisiae acted as selectable marker and mannose acted as selective agent for the production of transgenic plants of rice (Oryza sativa L.) via Agrobacte... The phosphomannose isomerase (PMI) gene from Saccharomyces cerevisiae acted as selectable marker and mannose acted as selective agent for the production of transgenic plants of rice (Oryza sativa L.) via Agrobacterium-mediated transformation. The concentration of mannose during the selection was stepwise increased, 5 g L-1 mannose combined with 15 g L-1 sucrose and 500 mg L-1 cefotaxime was used in the initial selection stage, then the concentration of mannose was increased to 11 g L-1, the highest transformation rate was 20.0%. The integration of PMI gene was confirmed by PCR, and the result of RT-PCR assay proved that the intron of PMI gene can be excised correctly during RNA splicing. 13- Glucuronidase (GUS) activity analysis confirmed the expression of GUS gene. All those means the PMI gene from yeast can be used as a selectable marker in rice transformation. 展开更多
关键词 phosphomannose isomerase selectable marker Saccharomyces cerevisiae TRANSFORMATION RICE
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Characterization of an algal phosphomannose isomerase gene and its application as a selectable marker for genetic manipulation of tomato
2
作者 Yuanyuan Lin Junchao Huang 《Plant Diversity》 SCIE CAS CSCD 2021年第1期63-70,共8页
Establishing a transgenic plant largely relies on a selectable marker gene that can confer antibiotic or herbicide resistance to plant cells.The existence of such selectable marker genes in genetically modified foods ... Establishing a transgenic plant largely relies on a selectable marker gene that can confer antibiotic or herbicide resistance to plant cells.The existence of such selectable marker genes in genetically modified foods has long been criticized.Plant cells generally exhibit too low an activity of phosphomannose isomerase(PMI)to grow with mannose as a sole carbon source.In this study,we characterized PMI from the green microalga Chlorococcum sp.and assessed its feasibility as a selectable marker for plant biotechnology.Chlorococcum sp.PMI(ChlPMI)was shown to be closely related to higher plants but more distant to bacterial counterparts.Overexpression of ChlPMI in tomato induced callus and shoot formation in media containing mannose(6 g/L)and had an average transformation rate of 3.9%.Based on this transformation system,a polycistronic gene cluster containing crtB,HpBHY,CrBKT and SlLCYB(BBBB)was co-expressed in a different tomato cultivar.Six putative transformants were achieved with a transformation rate of 1.4%,which produced significant amounts of astaxanthin due to the expression of the BBBB genes.Taken together,these findings indicate that we have established an additional tool for plant biotechnology that may be suitable for genetically modifying foods safely. 展开更多
关键词 ALGAE TOMATO TRANSFORMATION phosphomannose isomerase ASTAXANTHIN
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PMI/甘露糖筛选体系在植物转基因中的应用 被引量:8
3
作者 杨莉 徐昌杰 陈昆松 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第3期137-141,共5页
介绍了一种可在植物转基因中应用的新型筛选方法———磷酸甘露糖异构酶(PMI)法,与传统筛选体系不同,它以甘露糖为筛选剂对转化细胞进行正筛选。PMI能将甘露糖- 6 -磷酸转化成果糖- 6 -磷酸,使转化细胞以甘露糖为唯一或主要碳源而正常生... 介绍了一种可在植物转基因中应用的新型筛选方法———磷酸甘露糖异构酶(PMI)法,与传统筛选体系不同,它以甘露糖为筛选剂对转化细胞进行正筛选。PMI能将甘露糖- 6 -磷酸转化成果糖- 6 -磷酸,使转化细胞以甘露糖为唯一或主要碳源而正常生长;非转化细胞由于不能利用甘露糖而停止生长。该筛选体系受基因型、培养基中其他糖和磷酸根离子浓度及培养条件等因素的影响。目前已应用于多种模式植物和经济作物的转基因筛选,在木本植物甜橙上也首获成功。其检测方法多样,除了常规转基因检测方法外,还可对酶活性进行检测,其中氯酚红法简单可靠,且无需昂贵试剂。安全评估结果表明PMI基因对人体健康和环境无害。PMI/甘露糖筛选体系有望成为植物转基因的又一有效筛选手段。 展开更多
关键词 磷酸甘露糖异构酶(pmi)基因 甘露糖 植物 转基因
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大肠杆菌甘露糖-6磷-酸异构酶基因(manA/pmi)的克隆及功能鉴定
4
作者 杨欣 梁爱华 +1 位作者 罗晓丽 吴家和 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期107-110,共4页
甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi/manA)是当前植物转基因工程的重要选择标记基因,在生物安全上被认为是无害的。根据同源序列从大肠杆菌DH10B基因组中克隆出pmi基因。通过诱导原核表达获得PMI目的蛋白,对粗提和经过镍柱纯化的PMI蛋白进行We... 甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi/manA)是当前植物转基因工程的重要选择标记基因,在生物安全上被认为是无害的。根据同源序列从大肠杆菌DH10B基因组中克隆出pmi基因。通过诱导原核表达获得PMI目的蛋白,对粗提和经过镍柱纯化的PMI蛋白进行Western分析和酶活反应鉴定。以上结果表明,PMI蛋白成功诱导,其分子量为46kDa,纯化过的PMI具有高的酶活性,能催化甘露糖-6-磷酸发生异构反应生成果糖-6-磷酸。同时利用pmi基因作为选择基因构建植物表达载体pCPMi,通过农杆菌介导法转化烟草获得转基因植株,PCR检测结果表明96个再生植株有72株为阳性。以上结果表明,克隆的pmi基因具有高的酶活性,并能作为转基因植物的一种选择标记,同时也为转基因植物提供安全的选择标记基因,便于转基因植物的推广。 展开更多
关键词 甘露糖-6磷-酸异构酶 大肠杆菌 果糖 选择标记
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以PMI为选择标记基因的雪柑遗传转化体系的优化
5
作者 王会全 吴少华 余志雄 《安徽农业科学》 CAS 2018年第36期83-89,共7页
[目的]以PMI为选择标记基因对雪柑的遗传转化体系进行优化。[方法]对农杆菌的菌液浓度、实生苗培养条件、甘露糖筛选压、2,4-D浓度、2,4-D预处理时间、农杆菌侵染时间、共培养时间进行梯度试验来研究转化后的再生率,并对筛选培养基中6-B... [目的]以PMI为选择标记基因对雪柑的遗传转化体系进行优化。[方法]对农杆菌的菌液浓度、实生苗培养条件、甘露糖筛选压、2,4-D浓度、2,4-D预处理时间、农杆菌侵染时间、共培养时间进行梯度试验来研究转化后的再生率,并对筛选培养基中6-BA和NAA不同浓度组合进行试验来研究抗性大苗的筛选。[结果]经过暗培养20 d光培养10 d条件的实生苗外植体在农杆菌菌液OD600为0.6,1.0 mg/L 2,4-D预处理3 h,农杆菌侵染30 min,共培养时间4 d,筛选压为甘露糖20 g/L的情况下转化后的再生率大大提高,而在筛选培养基中加入2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA有助于抗性大苗的筛选。[结论]通过对影响转化的各种因素的优化试验建立了雪柑以PMI基因/甘露糖选择标记系统的高效遗传转化体系。 展开更多
关键词 柑橘 6-磷酸甘露糖异构酶 遗传转化
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Western blot detection of PMI protein in transgenic rice 被引量:5
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作者 RONG Rui-juan WU Peng-cheng +12 位作者 LAN Jin-ping WEI Han-fu WEI Jian CHEN Hao SHI Jia-nan HAO Yu-jie LIU Li-juan DOU Shi-juan LI Li-yun WU Lin LIU Si-qi YIN Chang-cheng LIU Guo-zhen 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2016年第4期726-734,共9页
Phosphomannose isomerase (PMI) encoding gene manA is a desirable selective marker in transgenic research. Under- standing of its expression patterns in transgenic plant and establishing highly sensitive detection me... Phosphomannose isomerase (PMI) encoding gene manA is a desirable selective marker in transgenic research. Under- standing of its expression patterns in transgenic plant and establishing highly sensitive detection method based on immunoassay have great impacts on the application of PMI. In this study, PMI-specific monoclonal antibodies were generated using recombinant protein as immunogen, and could be used in Western blot to detect as little as 0.5 ng His-tagged PMI protein or rice expressed PMI protein in sample accounted for 0.4% of single rice grain (about 0.08 mg). PMI protein driven by CaMV-35S promoter was detected in dozens of tested tissues, including root, stem, leaf, panicle, and seed at all developmental stages during rice growing, and PMI protein accounted for about 0.036% of total protein in the leaves at seedling stage. The established method potentially can be used to monitor PMI protein in rice grains. 展开更多
关键词 transgenic rice protein expression CaMV-35S promoter phosphomannose isomerase (pmi Western blot
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人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建 被引量:2
7
作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 薛萍 刘秀明 王艳芳 李营 李洪志 李校堃 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第8期190-196,共7页
【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选... 【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。 展开更多
关键词 拟南芥 成纤维细胞生长因子-21 油体表达 磷酸甘露糖异构酶
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甘蔗转HC-Pro基因的研究 被引量:4
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作者 郭莺 阮妙鸿 +3 位作者 吴杨 刘佳 杨川毓 张木清 《热带作物学报》 CSCD 2010年第6期965-971,共7页
通过基因枪(PDS-1000He)轰击法将构建好的多功能蛋白HC-Pro的植物表达载体pHCFL与带PMI筛选标记基因的pZMLR14植物表达载体共转化导入易感花叶病甘蔗品种福农95-1702的胚性愈伤组织中,转化的愈伤经甘露糖筛选后获得抗性转化甘蔗幼苗。经... 通过基因枪(PDS-1000He)轰击法将构建好的多功能蛋白HC-Pro的植物表达载体pHCFL与带PMI筛选标记基因的pZMLR14植物表达载体共转化导入易感花叶病甘蔗品种福农95-1702的胚性愈伤组织中,转化的愈伤经甘露糖筛选后获得抗性转化甘蔗幼苗。经PCR检测、氯酚红显色、RT-PCR检测和DNA点杂交分析获得转HC-Pro的转基因植株,转化率为0.8%(HC-Pro基因)、1.7%(PMI基因)和0.4%(HC-Pro基因+PMI基因)。花叶病毒接种实验结果显示,未转基因植株的发病率为75%,而转基因植株均系统性发病,推测由于HC-Pro的大量表达抑制了甘蔗体内自身的RNA沉默机制而使病情加重。其它农艺性状调查结果显示,转基因与未转基因植株之间不存在显著差异,表明转HC-Pro和PMI基因对甘蔗的生长或其他农艺性状没有负面影响。 展开更多
关键词 RNA沉默 RNA沉默抑制子 HC-PRO 共转化 pmi
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大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达 被引量:3
9
作者 张倩 廖玉才 +2 位作者 陈方方 董璇 李和平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期461-464,共4页
通过PCR克隆了大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因manA,分别构建了含manA基因的原核和真核生物表达载体。在大肠杆菌中经IPTG诱导表达的GST-PMI融合蛋白,经亲和层析纯化和PreScission蛋白酶酶切,SDS-PAGE分析证实PMI蛋白为42 ku。对转manA... 通过PCR克隆了大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因manA,分别构建了含manA基因的原核和真核生物表达载体。在大肠杆菌中经IPTG诱导表达的GST-PMI融合蛋白,经亲和层析纯化和PreScission蛋白酶酶切,SDS-PAGE分析证实PMI蛋白为42 ku。对转manA基因的拟南芥进行PCR分析表明,manA基因已稳定整合到拟南芥基因组中。氯酚红显色反应证实,整合到拟南芥基因组中的manA基因能表达具有6-磷酸甘露糖异构酶活性的PMI蛋白。这些结果说明,克隆的manA基因可在细菌和高等植物中高效表达。 展开更多
关键词 manA基因 6-磷酸甘露糖异构酶活性 细菌诱导表达 拟南芥转化
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转AtMYB44基因小麦的获得和检测 被引量:2
10
作者 柳金伟 焦娇 +1 位作者 张洪滨 梁元存 《鲁东大学学报(自然科学版)》 2012年第2期150-154,共5页
为了评价拟南芥转录因子AtMYB44基因对小麦抗病能力的影响,以小麦幼胚诱导的愈伤组织为转化受体,以磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)基因作为选择标记,通过基因枪介导法将带有At-MYB44基因的表达质粒AF234296-44导入小... 为了评价拟南芥转录因子AtMYB44基因对小麦抗病能力的影响,以小麦幼胚诱导的愈伤组织为转化受体,以磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)基因作为选择标记,通过基因枪介导法将带有At-MYB44基因的表达质粒AF234296-44导入小麦品种扬麦158.经过2~3次甘露糖筛选后,获得75株再生苗.通过氯酚红(chlorophenol red,CPR)染色获得40株CPR阳性再生苗,进一步通过标记基因PMI和目的基因AtMYB44的PCR检测,获得22株PCR阳性植株,转化率为0.306%.结果初步表明AtMYB44基因已整合到小麦基因组中,获得了生物安全标记的转AtMYB44基因小麦. 展开更多
关键词 小麦 转基因 磷酸甘露糖异构酶 AtMYB44基因
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基因枪介导转hpa99基因小麦的获得和检测 被引量:1
11
作者 柳金伟 焦娇 +1 位作者 张洪滨 梁元存 《山东农业科学》 2012年第7期4-7,共4页
为了探究来源于水稻细条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)的hpa99基因改良小麦抗赤霉病的可行性,以小麦幼胚诱导的愈伤组织为转化受体,以磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)作为选择标记,通过基因枪法将带有hpa99... 为了探究来源于水稻细条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)的hpa99基因改良小麦抗赤霉病的可行性,以小麦幼胚诱导的愈伤组织为转化受体,以磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)作为选择标记,通过基因枪法将带有hpa99基因的表达质粒AF234296导入普通小麦品种山农15。2~3次PMI筛选后,获得38株再生植株。通过氯酚红(chlorophenol red,CPR)染色以及PMI基因和目的基因hpa99的PCR检测,获得7株阳性植株,转化率为0.108%。结果表明,hpa99已整合到小麦基因组中,获得了无抗生素标记基因的转基因小麦。 展开更多
关键词 小麦 磷酸甘露糖异构酶 hpa99基因 转基因
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磷酸甘露糖异构酶基因快速初筛方法的建立
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作者 贺艳 郑文杰 +4 位作者 张裕君 孟甜 牛嘉慧 柏松 刘跃庭 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2011年第8期100-102,共3页
建立磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因环介导等温扩增快速检测方法。设计了两对内引物和两对外引物,优化后的反应条件为:FIP,BIP浓度为0.8μmol/L,F3,B3浓度为0.2μmol/L,镁离子浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱浓度为1.6 mmol/L,反应时间为40 min,反... 建立磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因环介导等温扩增快速检测方法。设计了两对内引物和两对外引物,优化后的反应条件为:FIP,BIP浓度为0.8μmol/L,F3,B3浓度为0.2μmol/L,镁离子浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱浓度为1.6 mmol/L,反应时间为40 min,反应温度为62.0℃。SYBR Green法检测需2 h,电泳法检测共需2.5 h。与实时荧光和普通PCR比较特异性良好,转基因成分检测限达到0.01%。结果表明该检测方法简单且快速。 展开更多
关键词 LAMP pmi 转基因 检测
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甘露糖正向筛选体系的建立及在拟南芥遗传转化中的应用 被引量:8
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作者 杨彩云 尹伟伦 夏新莉 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第6期1120-1129,共10页
为了研究甘露糖正向筛选体系在拟南芥转化中的有效性,本研究参照GenBank上公布的PMI基因序列,通过PCR从大肠杆菌克隆了6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因,替换植物表达载体pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶(hygro... 为了研究甘露糖正向筛选体系在拟南芥转化中的有效性,本研究参照GenBank上公布的PMI基因序列,通过PCR从大肠杆菌克隆了6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因,替换植物表达载体pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶(hygromycin phosphotransferase,HPT)基因,并将以CaMV35S和AmCBL1P两种启动子调控的沙冬青AmCBL1基因成功地构建到重组载体pPMI上,并导入根癌农杆菌E-HA105中,然后通过农杆菌花序浸染法转入拟南芥。将获得的阳性植株通过GUS组织化学法鉴定、氯酚红(chlorophenol red,CPR)法及PCR检测,证明PMI基因已经转入拟南芥中。在不使用抗生素和除草剂的情况下这种筛选体系为转基因拟南芥筛选提供了更加安全有效的方法,并且为以后AmCBL1基因的功能验证及植物抗逆性的改良奠定了基础。 展开更多
关键词 磷酸甘露糖异构酶(pmi)基因 甘露糖 AmCBL1 遗传转化 拟南芥
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新型筛选标记磷酸甘露糖异构酶基因在转基因植物中的应用 被引量:4
14
作者 郭倩倩 孙熙森 +1 位作者 唐益雄 吴燕民 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2011年第6期12-19,共8页
广泛应用于植物遗传转化的抗生素和除草剂选择标记对环境生态和人类健康可能具有潜在风险,因此生物安全筛选标记已成为当前植物转基因研究的热点。磷酸甘露糖异构酶基因(PMI)是一种新型生物安全选择标记基因,全面介绍了其作用原理、生... 广泛应用于植物遗传转化的抗生素和除草剂选择标记对环境生态和人类健康可能具有潜在风险,因此生物安全筛选标记已成为当前植物转基因研究的热点。磷酸甘露糖异构酶基因(PMI)是一种新型生物安全选择标记基因,全面介绍了其作用原理、生物安全性、在植物转化中的应用与检测等,深入分析了其在植物转化中作为筛选标记存在的问题与不足,并就其发展前景进行了展望,以期为在转基因植物中的广泛应用奠定基础。 展开更多
关键词 磷酸甘露糖异构酶(pmi) 转基因植物 选择标记 生物安全性 遗传转化
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抗逆转录因子在百脉根中的功能分析 被引量:3
15
作者 陶飞 马江涛 +4 位作者 唐益雄 李京生 卢运明 徐秉良 吴燕民 《草业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期250-258,共9页
为提高豆科牧草百脉根抗旱方面的能力,从沙生植物胡杨和铃铛刺中克隆了4个抗逆转录因子基因并进行功能分析,从中筛选了2个具有抗旱特性的基因PeDREB2a和HhERF2,构建了以磷酸甘露糖异构酶为筛选标记的单、双价植物表达载体,转化百脉根Le... 为提高豆科牧草百脉根抗旱方面的能力,从沙生植物胡杨和铃铛刺中克隆了4个抗逆转录因子基因并进行功能分析,从中筛选了2个具有抗旱特性的基因PeDREB2a和HhERF2,构建了以磷酸甘露糖异构酶为筛选标记的单、双价植物表达载体,转化百脉根Leo品种,结果表明,转录因子基因明显改善了百脉根的抗旱特性,经过抗旱复水试验证明转基因百脉根成活率达到100%。 展开更多
关键词 百脉根 转录因子 磷酸甘露糖异构酶(pmi) 抗旱 转基因
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蜡状芽孢杆菌CZ磷酸甘露糖异构酶基因的克隆表达及酶学性质研究 被引量:1
16
作者 张瑶 崔堂兵 宋妍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期195-200,共6页
将蜡状芽孢杆菌CZ中的磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)进行克隆,并在大肠杆菌中进行异源表达。将PCR扩增得到的pmi基因与p ET-22b(+)表达载体进行连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建重组菌株BL21-p ET22b(+)-pmi,并成功表达了重组磷酸甘露糖... 将蜡状芽孢杆菌CZ中的磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)进行克隆,并在大肠杆菌中进行异源表达。将PCR扩增得到的pmi基因与p ET-22b(+)表达载体进行连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建重组菌株BL21-p ET22b(+)-pmi,并成功表达了重组磷酸甘露糖异构酶。结果显示:克隆得到pmi基因序列全长为948 bp,编码315个氨基酸。通过镍柱His Trap HP亲和层析法纯化得到具有活性的重组酶,其蛋白分子大小约为40.8 ku。酶学性质结果显示:该酶的最适反应温度为35℃,在30~40℃酶活力相对稳定;最适p H为7.0,在弱碱性条件下保存12 h后仍存有50%以上酶活力;不同低浓度的金属离子Ni^(2+)、Ca^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)和Mg^(2+)均对该酶表现出不同程度的激活作用,其中Mn^(2+)对该酶激活作用最显著,当其浓度为1 mmol/L时,激活作用最大,而Co^(2+)对其有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 磷酸甘露糖异构酶(pmi) 蜡状芽孢杆菌 克隆表达 酶学性质
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甘露糖正向筛选体系在巨尾桉遗传转化中的应用
17
作者 张乐 庞涛 夏新莉 《生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期64-67,89,共5页
为了研究甘露糖正向筛选体系在巨尾桉遗传转化过程中的有效性,构建了以6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)为筛选标记的pCAMBIA1301植物表达载体,并将该载体通过农杆菌介导的遗传转化转入木本植物巨尾桉中。将获得的... 为了研究甘露糖正向筛选体系在巨尾桉遗传转化过程中的有效性,构建了以6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)为筛选标记的pCAMBIA1301植物表达载体,并将该载体通过农杆菌介导的遗传转化转入木本植物巨尾桉中。将获得的阳性植株通过氯酚红(chlorophenol red,CPR)法及PCR检测,桉树遗传转化的阳性率达到26.09%。另外,通过正交试验优化法,对巨尾桉组培快繁体系建立过程中不同浓度激素配比进行了研究,建立起良好的巨尾桉组织培养再生体系,由甘露糖筛选敏感性测试,获得了巨尾桉筛选临界浓度,蔗糖与甘露糖比例为19∶11,优化了巨尾桉遗传转化体系,为今后巨尾桉组织培养与遗传转化研究提供了重要的参考依据。 展开更多
关键词 磷酸甘露糖异构酶(pmi) 正向筛选体系 遗传转化 巨尾桉
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甘露糖筛选体系及在转基因玉米商业化中的应用
18
作者 刘戬丰 王艳丽 李相敢 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期13-21,共9页
甘露糖在己糖激酶的作用下形成6-磷酸甘露糖,进一步在磷酸甘露糖异构酶(Phosphomannose isomerase,PMI)的催化下转化成植物可利用的6-磷酸果糖,从而使转化细胞在甘露糖作为主要碳源的培养基上正常生长,而非转化细胞生长受到抑制。这一... 甘露糖在己糖激酶的作用下形成6-磷酸甘露糖,进一步在磷酸甘露糖异构酶(Phosphomannose isomerase,PMI)的催化下转化成植物可利用的6-磷酸果糖,从而使转化细胞在甘露糖作为主要碳源的培养基上正常生长,而非转化细胞生长受到抑制。这一筛选体系被认为是一种正向筛选(Positive selection),已被成功地应用于重要的粮食作物和经济作物中。甘露糖筛选的植株可以通过多种方法检测,其中氯酚红检测法和试纸条检测法简单方便,适用于初步筛选。甘露糖筛选体系安全高效,已被应用于玉米商业化产品中。综述了甘露糖(mannose)筛选体系的原理、筛选特点、植株的鉴定、筛选方法的优缺点以及在商业化中的应用,列举了利用甘露糖筛选的玉米单性状转化系用于抗鳞翅目和抗鞘翅目昆虫及抗高温淀粉酶的范例及其在育种叠加中的应用。这种育种叠加使得甘露糖筛选的性状与其他性状重叠而得到更广谱的具有抗除草剂抗虫性状的商业化产品。 展开更多
关键词 磷酸甘露糖异构酶 筛选标记 安全性分析 转基因植物检测 甘露糖
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PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立
19
作者 陶如 张友灿 +4 位作者 方茜 史仁玖 李艳玲 黄璐琦 郝岗平 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1209-1213,共5页
目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系。方法:首先从大肠杆菌Esche... 目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系。方法:首先从大肠杆菌Escherichia coli DH5α中克隆PMI基因,然后以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1305中的hyg基因,构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,并用电击转化方法导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404中,用叶片浸染法转化白花丹参。结果:在白花丹参MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1固体分化培养基中附加20 g·L-1甘露糖和10 g·L-1蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1305-PMI的转化率为23.7%,对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入。结论:建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系,可应用于后续目的基因的转化奠定了基础。 展开更多
关键词 6-磷酸甘露糖异构酶(pmi)基因 甘露糖 白花丹参 转基因筛选标记
原文传递
含甘露糖异构酶基因植物表达载体的构建
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作者 孙磊 张国军 +1 位作者 闫爱玲 徐海英 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期18-21,共4页
目的:构建了以manA基因为选择标记的植物表达载体。方法:从大肠杆菌DH5α中克隆出manA基因,连接到质粒pCAMBIA1301的XhoⅠ位点,替换hpt基因,通过酶切和PCR检测了插入片段的正确性,使用XbaⅠ和HindⅢ酶切Gateway载体(pGWCBF)获得含有P35S... 目的:构建了以manA基因为选择标记的植物表达载体。方法:从大肠杆菌DH5α中克隆出manA基因,连接到质粒pCAMBIA1301的XhoⅠ位点,替换hpt基因,通过酶切和PCR检测了插入片段的正确性,使用XbaⅠ和HindⅢ酶切Gateway载体(pGWCBF)获得含有P35S-T35S-attR1-attR2-CmR-ccdB的结构域,将其插入到表达载体pCAMBIA1301的相应位点中,获得中间表达载体pCAMBIA1301-manA-GW,使用Gateway载体的BP反应与LR反应,将转录因子CBF基因片段整合到载体中。结果:酶切结果表明以甘露糖异构酶基因(manA)为选择标记的植物表达载体pCAMBIA1301-manA-CBF已经构建完成。结论:将构建好的载体用液氮冻融法转化到农杆菌中,可以用于葡萄的遗传转化研究,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础。 展开更多
关键词 甘露糖异构酶基因 标记基因 植物表达载体 克隆
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