印楝素对SL-1的细胞凋亡诱导作用

本文以喜树碱（camptothecin）作对比,以二甲基亚砜（DMSO）作对照,系统研究了印楝素（azadirachtin）对斜纹夜蛾Spodoptera litura离体细胞系（SL-1）的凋亡诱导作用。印楝素0.75μg/mL处理后SL-1细胞后12-72h,倒置显微镜观察可见大量细胞皱缩,体积变小,胞膜气泡化,与邻周细胞脱落,胞浆浓缩,胞膜突起,细胞器密集,核染色质浓缩并凝聚在核膜周边,出现大量凋亡小体;AO染色荧光显微镜观察可见细胞核内致密明亮黄绿色荧光和亮绿色或橘黄色的凋亡小体;透射电镜观察可见细胞皱缩、微绒毛消失、染色质浓缩和边缘化、核膜皱缩界限模糊、部分线粒体嵴结构消失和数量明显增加的吞噬泡等细胞凋亡典型形态学特征;TUNEL实验可见大量被标记为小圆形或环形黄绿色或绿色荧光的阳性凋亡细胞。流式细胞仪测定表明,印楝素0.75μg/mL处理后48h凋亡率最高达11.45%,比对照提高381.3倍;而喜树碱以1.72μg/mL处理亦对SL-1具有相似的诱导作用,处理后36h凋亡率最高达到17.42%。扫描电镜观察表明,印楝素和喜树碱处理后,SL-1细胞表面没有形成明显的“孔”、“洞”、“门”之类的结构破坏。推测印楝素与喜树碱对SL-1的凋亡信号转导方式和途径不同,导致细胞凋亡时序性不同。

中药复方便可通片对烫伤大鼠肠黏膜屏障保护作用的实验研究

目的:了解和揭示便可通对SD大鼠烫伤后1周内血浆肿瘤坏死因子、内毒素、肠组织细胞凋亡的影响,观察烫伤大鼠小肠上皮细胞超微结构的变化,探讨本药对肠黏膜屏障保护作用机制。方法:将SD大鼠70只随机分成3组,第1组为中药治疗组(便可通组)30只;第2组为对照组(单纯烫伤组)30只,制备成烫伤模型,给予生理盐水灌胃;第3组为正常组10只。治疗组和对照组在给药后第1、3、7天各处死10只,均检测血浆肿瘤坏死因子、内毒素的含量,观察大鼠肠组织细胞凋亡的变化,给药后第7天观察大鼠小肠上皮细胞超微结构变化。结果:便可通可明显抑制烫伤大鼠内毒素易位,减少肿瘤坏死因子的产生,抑制肠组织细胞凋亡,明显修复和改善烫伤大鼠肠黏膜细胞超微结构的损伤。结论:中医复方便可通有较理想的肠道屏障保护作用,是预防和治疗肠道屏障功能障碍引发的多器官、多系统功能衰竭的有效的药物。

川芎嗪对视网膜色素变性小鼠干预作用的机制

目的观察川芎嗪对视网膜色素变性rds小鼠的干预作用和机制。方法rds新生小鼠84只,随机分为实验组和对照组,每组42只小鼠。实验组小鼠从出生时开始,腹腔注射盐酸川芎嗪80mg/kg,2次/d,直至生后35d;对照组同时注射等量生理盐水。分别在用药后0、3、7、14、21、28、35d取实验组和对照组小鼠眼球,立即经10%中性甲醛固定,常规病理切片。另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定,电子显微镜观察。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术（TUNEL）方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组织化学方法测定bcl-2在视网膜的表达。结果病理观察结果显示,经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28、35d,rds小鼠光感受器细胞核层数与未用药的对照组相比较,明显增加（P〈0.01）。电子显微镜观察结果显示,川芎嗪可减缓rds小鼠光感受器细胞和视网膜外段盘膜部位线粒体的病变,减少盘膜和外界膜的破坏。rds小鼠经盐酸川芎嗪治疗后3、7、14、21、28、35d,光感受器细胞凋亡率比对照组明显减少（P〈0.01）;治疗后3、7、14、21、28、35d时,bcl-2在视网膜光感受器细胞及光感受器细胞内外段的表达明显增强（P〈0.05）。结论盐酸川芎嗪可延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的减少,其作用机制可能是通过上调视网膜外核层及光感受器细胞内外段bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。

内质网应激参与实验性视网膜脱离后细胞凋亡的研究

目的研究内质网应激介导凋亡途径的标志物生长停滞及DNA损伤基因153（GADD153）在大鼠实验性视网膜脱离后不同时期的基因与蛋白表达水平并探讨内质网应激与视网膜脱离后细胞凋亡发生的关系。方法对照实验研究。Wistar大鼠88只（88只眼），采用计算机随机数字表法，分为正常对照组和实验组，实验组包括视网膜脱离后1／2、1、2、4、8、16及32d组；每组各11只鼠（11只眼），通过在视网膜下注射透明质酸钠的方法，建立视网膜脱离模型。在视网膜脱离后1／2、1、2、4、8、16及32d分别摘除眼球。应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL），检测视网膜细胞凋亡情况；采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法，检测GADD153 mRNA的表达水平；应用免疫印迹法，检测视网膜组织中GADD153蛋白表达水平；采用免疫荧光和激光共焦显微镜技术，观察GADD153蛋白在视网膜各层细胞的分布。应用SPSS10．0统计学软件进行数据分析。对各组鼠视网膜凋亡细胞百分比和GADD153 mRNA表达水平的比较，采用Kruskal Wallis检验；GADD153蛋白表达水平的比较，采用One-Way ANOVA检验，以P〈0．05作为差异有统计学意义。结果大鼠视网膜脱离后凋亡细胞主要集中在光感受器细胞层，凋亡高峰出现在视网膜脱离后2—4d，8d后显著减少，组间视网膜细胞凋亡百分比差异有统计学意义（x^2=22．423，P〈0．05）；视网膜脱离后1／2、1、2及4d，视网膜GADD153 mRNA表达水平显著升高（x^2=27．223，P〈0．05）；GADD153蛋白表达水平亦显著升高（F=16．052，P〈0．05），主要表达部位在光感受器细胞层。结论视网膜脱离后内质网应激标志物GADD153被激活，并在视网膜组织表达水平增高，其表达状态与视网膜细胞的凋亡时间和发生位置相一致；内质网应激介导的凋亡途径参与了视网膜脱离后光感受器细胞凋亡的发牛。

锂对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞凋亡的保护作用

目的研究锂在视网膜色素变性小鼠模型上对光感受器细胞凋亡的神经保护作用。方法实验研究。FVB／NJ视网膜色素变性小鼠出生后立刻用含锂的食物喂养，7和14d时摘除眼球做视网膜冰冻切片，同时取血测血清锂浓度。HE、TUNEL和视杆细胞免疫荧光染色进行视网膜组织形态、光感受器细胞凋亡分析。结果光镜下可见，对照组外核层可见TUNEL阳性细胞，出生后14d外核层厚度和细胞层数（3或4层）明显低于7d时的厚度（9或10层），而锂喂养组出生后14d外核层的厚度和细胞层数明显高于对照组，与出生7d时的外核层厚度及细胞层数无明显差异。结论锂能够保护视网膜色素变性小鼠光感受器细胞免于凋亡。