UPLC-qTOF-MS/MS法测定透骨草中有效成分

建立了超高效液相色谱(UPLC)与电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-qTOF-MS)相结合的方法用于快速分离和鉴定透骨草中的成分。样品在ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)上以0.1%甲酸(溶剂A)和乙腈(溶剂B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min。通过UPLC-qTOF-MS/MS对透骨草进行色谱分析,确定了47个化合物的特征,其中15个化合物通过与参考标准的比较得到了明确的鉴定。为了进行定量分析,使用UPLC-DAD在210,260和326 nm的波长下同时检测了来自12个批次透骨草样品的15种主要化合物。该方法在精密度、重复性、稳定性、准确度等方面进行了验证。本研究为透骨草的整体质量控制提供了潜在的方法。

透骨草提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其相关机制研究

目的:探讨透骨草提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其相关机制。方法:荧光显微镜观察Hela细胞形态,透射电镜观察Hela细胞超微结构,流式细胞术检测Hela细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达水平。结果:100μg/ml透骨草提取物处理的Hela细胞后,荧光显微镜显示Hela细胞皱缩,细胞核浓缩呈新月状边集。透射电镜可见Hella细胞表面突起和微绒毛减少,核断裂、染色质凝聚且边缘化,有"出芽"现象。流式细胞术显示透骨草提取物处理的Hela细胞凋亡率为(25.90±1.13)%,明显高于对照组(P<0.01)。Western blot结果显示透骨草提取物处理的Hela细胞Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达达明显低于与对照组(P<0.05)。结论:透骨草提取物可诱导Hela细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达有关。

透骨草提取物对人宫颈癌Hela细胞PI3k、Akt、mTOR蛋白表达的影响

目的:观察透骨草提取物对人宫颈癌Hela细胞PI3k、Akt、mTOR蛋白表达的影响,探讨透骨草提取物诱导Hela细胞凋亡的分子机制。方法:Western blot方法检测Hela细胞PI3k、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果:Western blot结果显示100μg/ml透骨草提取物处理的Hela细胞PI3k、Akt、mTOR蛋白水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论:PI3k/Akt/mTOR通路可能在透骨草提取物诱导Hela细胞凋亡中起作用。

透骨草提取物对人结肠癌SWⅢ-C细胞增殖及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的：观察透骨草提取物对人结肠癌SWⅢ-C细胞增殖的影响,探讨透骨革提取物对SWⅢ-C细胞增殖影响的分子机制.方法：MTT法检测透骨草提取物对SWⅢ-C细胞增殖的影响,荧光显微镜观察透骨草提取物对SWⅢ-C细胞形态的影响,免疫组化方法检测SWⅢ-C细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果：6.25～100μg/mL透骨草提取物处理的SWⅢ-C细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加（P＜0.05）,而且随透骨草浓度的增加,抑制率逐渐增加。透骨萆提取物对SWⅢ-C细胞的半数抑制浓度（IC50）为38.36μg/mL。荧光显微镜下可见,38.36μg/mL透骨革提取物处理的SWⅢ-C细胞,体积缩小,细胞核固缩、呈新月状且边集.38.36μg/mL透骨草提取物处理的SWⅢ-C细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组（P＜0.05）,而Bax蛋白表达明显高于对照组（P＜0.05）。结论：透骨苹提取物可以抑制人结肠癌SWⅢ-C细胞增殖,诱导SWⅢ-C细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。

透骨草含药血清与血浆对产ESBLs大肠杆菌的抑菌效果比较研究

采用微量肉汤稀释法药敏实验来探究透骨草含药血清与血浆对产ESBLs大肠杆菌的抑菌作用之间是否存在差异,为做中药血清药理学实验时是选择血清还是血浆提供理论依据,同时,我们也对中药含药血清与血浆药理学的差异进行了探讨。结果显示,透骨草含药血清与血浆的最小抑菌浓度(MIC)均为500 mg/mL,血清、血浆空白对照组均无明显抑菌作用,透骨草含药血清与含药血浆抑菌作用之间对比无明显差异。由于血浆更真实的反应体内血液实际情况及其制作过程的简便性等多方面优点,建议在进行中药半体实验时优先选择含药血浆。

透骨草提取物对人肺癌A549细胞凋亡及其PUMA/Bcl-2/Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察透骨草提取物对人肺癌A549细胞PUMA(P53上调凋亡调空因子)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Caspase-3(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3)蛋白表达的影响,从凋亡诱导的角度探讨透骨草提取物抑制A549细胞增殖的作用机制。方法:将A549细胞分为实验组和对照组;吖啶橙染色观察透骨草提取物对A549细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对A549细胞PUMA、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果:吖啶橙染色结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞皱缩,胞核固缩、呈边集,出现凋亡小体。免疫组化检测结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞PUMA蛋白显著高于对照组(P<0.05),而Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。结论:透骨草提取物对A549细胞具有凋亡诱导作用,机制与促进A549细胞PUMA蛋白表达、抑制Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关。

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。方法荧光显微镜观察透骨草提取物对SMMC-7721细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果荧光显微镜可见,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞,细胞皱缩,细胞核固缩,呈新月状且边集,呈现凋亡现象。免疫组化结果显示40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),而Bax蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。结论透骨草提取物可能通过下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达诱导SMMC-7721细胞凋亡。

透骨草提取物对H22细胞β-catenin和cyclin D_1表达的影响

目的 :观察透骨草提取物对小鼠肝癌22(H22)细胞生长的抑制作用,进一步探讨透骨草提取物对H22细胞生长抑制的机制。方法:通过皮下接种H22细胞建立荷瘤H22模型,15 d后称取瘤组织重量并按公式计算抑瘤率,免疫组化方法检测H22细胞β-连环蛋白(β-catenin,β-cat)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1,Cyc D1)的表达。结果:透骨草提取物对H22细胞的抑瘤率为43.16%,明显高于对照组(P<0.05)。透骨草提取物处理的H22细胞β-cat和Cyc D1的表达明显低于对照组(P<0.05)。结论:透骨草提取物对H22细胞的生长有抑制作用,其机制可能与下调β-cat和Cyc D1的蛋白表达有关。

透骨草提取物对肿瘤细胞体外增殖的影响

目的:探讨透骨草提取物对人卵巢癌SK-OV-3细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人宫颈癌Hela细胞、人肝癌HepG-2细胞、人肺癌A549细胞体外增殖的影响。方法:用不同浓度的透骨草提取物分别处理肿瘤细胞,采用MTT法和集落形成试验观察透骨草提取物对肿瘤细胞体外增殖的影响。结果:3.125～100μg/mL透骨草提取物处理的肿瘤细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加(P<0.05)。3.125～100μg/mL透骨草提取物处理的肿瘤细胞集落形成率与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:透骨草提取物对人卵巢癌SK-OV-3细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人宫颈癌胞Hela细、人肝癌HepG-2细胞、人肺癌A549细胞增殖有显著的抑制作用,且呈一定的剂量依赖性。

叶面处理除草剂对防风等中药材的药害症状观察

试验研究了芳氧苯氧丙酸类等7类15种除草剂对防风、何首乌、地黄、透骨草的药害情况,通过药害症状观察,筛选可以安全使用的除草剂及剂量。结果表明:在试验剂量处理范围内,防风田施用骠马、收乐通、高效盖草能、精喹禾灵、喹禾灵、苯磺隆、烟嘧磺隆的1～4剂量处理,世玛1和2剂量处理较为安全。何首乌田施用骠马、收乐通、精喹禾灵、喹禾灵的1～5剂量处理,烟嘧磺隆的1～4剂量处理,高效盖草能的1～3剂量处理较为安全。地黄田施用骠马、收乐通、高效盖草能、精喹禾灵、喹禾灵、烟嘧磺隆的1～5剂量处理,苯磺隆的1～3剂量处理较为安全。透骨草田施用骠马、精喹禾灵、收乐通、高效盖草能、喹禾灵、乙羧氟草醚,各剂量处理均较为安全。百草枯和草甘膦在供试药材田均不安全,不能施用。

透骨草提取物的抑菌效果研究

透骨草分别以水和乙醇为溶剂进行提取,再将提取液浓缩后,配成不同浓度的溶液,选择纸片法对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、表面葡萄球菌、福氏杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎球菌、大肠杆菌等进行抑菌试验,结果表明,透骨草不同浓度的水和乙醇提取物上述菌种均有较强的抑制作用。

透骨草杀虫活性成分分离鉴定及其生物活性研究

采用柱层析分离、高效液相色谱切分和生物活性追踪法,从透骨草Phryma leptostachya L.石油醚提取物中分离出2个具有杀虫活性的化合物(B1和B2),采用质谱、核磁共振氢谱和碳谱,并结合相关文献对其结构进行鉴定,发现其分别为双氧木脂素A和E。首次以粘虫Mythimnaseparata、槐尺蠖Semiothisa cinerearia、小菜蛾Plutella xylostella、小地老虎Agrotis ypsilon和家蝇Musca domestica为试虫,测定了这2个化合物的杀虫活性。结果表明:化合物B1和B2对3龄粘虫24 h的胃毒致死中浓度(LC50值)分别为34.9和52.8μg/mL,24 h触杀致死中量(LD50值)分别为0.09和0.26μg/头;对3龄槐尺蠖24 h的胃毒LC50值分别为66.1和1 675μg/mL,触杀LD50值分别为0.049和1.33μg/头;对家蝇成虫24 h的胃毒LC50值分别为39.2和969μg/mL,触杀LD50值分别为0.047和1.12μg/头。

透骨草不同极性成分抗氧化活性研究

研究透骨草不同极性成分的抗氧化活性,探讨作为天然食用抗氧化剂开发的可行性。采用ABTS、DPPH自由基及还原性反应体系,利用分光光度法测定透骨草的总提物、乙酸乙酯层、正丁醇层及水层提取物在不同浓度下的抗氧化能力。透骨草的不同极性成分对DPPH、ABTS+自由基均具有较强的清除能力及还原能力,其中正丁醇层提取物的抗氧化能力最强。还原性测定中,在浓度为3.2mg/mL时,正丁醇层提取物的吸光度值为2.537,表明正丁醇层提取物的还原能力强,抗氧化作用好。DPPH法测定中,正丁醇层提取物对DPPH自由基的最大清除率为97.37%。ABTS法测定中,正丁醇层提取物对ABTS+自由基的最大清除率为99.56%,与同浓度Vc的清除率接近。结论:透骨草具有较好的抗氧化能力,可进一步研究开发成天然食用抗氧化剂。

亚洲产透骨草属植物的修订

对PhrymaleptostachyaL .的亚洲产亚种 ,即ssp .asiatica (Hara)Kitamura作了分类修订 ,列出了显示两个亚种本质区别的检索表 ,并提供了ssp .asiatica的详细的地理分布资料。

彝药透骨草化学成分研究

目的:研究彝药透骨草的化学成分,为探究其活性物质奠定基础。方法:反复运用正相硅胶柱色谱、重结晶、制备高效液相等手段,从透骨草的乙醇提取物中分离纯化单体化合物,并运用MS、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR等波谱方法鉴定所分离化合物的结构。结果:从透骨草的乙醇提取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为:熊果酸(1)、槲皮素(2)、异香草酸(3)、对羟基苯甲酸(4)、阿糖腺苷(5)。结论:其中,化合物2～5均为首次从该属植物中分离得到。

透骨草的解剖学研究

透骨草(Phryma leptostachya L.)别名疥草、毒蛆草、毒蛆草、接生草。属于,透骨草科的多年生草本植物,本科为单属种。分布于我国东北、华北、华东、西南各地,也分布于欧亚、北美各国,为广布种。透骨草科的特征与马鞭草科、唇形科很相似,即皆为唇形花冠,二强雄蕊。

透骨草水提物与抗菌药对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的体外联合抑菌作用研究

为了探究透骨草水提物与抗菌药联合对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的体外抑菌作用。采用二倍微量肉汤稀释法与微量方阵棋盘法来测定各抗菌药与透骨草的最低抑菌浓度(MIC)及二者联合作用后的分级抑菌浓度指数(FICI)。结果显示,透骨草水提物与头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻肟钠、头孢噻呋钠、阿莫西林、阿米卡星、阿奇霉素、磷霉素、黏杆菌素、磺胺间甲氧嘧啶、利福平、环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、痢菌净、林可霉素联合作用后的FICI分别为0.75、0.75、1.00、0.75、0.53、0.51、0.75、4.5、4.5、4.5、4.5、2.5。结果表明,透骨草水提物与头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻肟钠、头孢噻呋钠、阿莫西林、阿米卡星、阿奇霉素、磷霉素、黏杆菌素、磺胺间甲氧嘧啶、利福平联合作用时有相加作用;与环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、痢菌净、林可霉素联合作用时有颉颃作用。

透骨草抑菌活性成分提取及抑菌机理研究

通过优化透骨草提取工艺,再经有机溶剂萃取,得到透骨草有效抑菌活性成分(PAI)。结果表明,在乙醇体积分数80%,温度60℃,料液比1∶30(g∶mL),时间4 h的条件下提取效果较优,经氯仿萃取后剩余水相有较强抑菌作用,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别为(24.32±0.65)和(25.44±1.10)mm,其最小抑菌浓度(MIC)分别为6.25和3.12 g/L。此外,还通过细菌生长抑制曲线、细胞膜通透性以及细胞形貌观察等手段,研究PAI对细菌的抑制机理。结果表明,PAI在细菌繁殖的对数生长期起主要抑制作用,同时破坏细胞膜的通透性和细胞壁的结构,通过栅栏效应达到抑菌作用。

透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞Caspases蛋白表达的影响

目的:研究透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞凋亡的影响及其机制。方法:吖啶橙染色法观察透骨草提取物对SKOV-3细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SKOV-3细胞Caspases蛋白表达的影响。结果:37.8μg/ml透骨草提取物作用于SKOV-3细胞24h后,SKOV-3细胞形态不规则,细胞核固缩、呈月牙形紧贴在核膜周围。SKOV-3细胞Caspase-9、Caspase-3、Caspase-7蛋白表达明显低于与对照组(P<0.05),表明透骨草提取物可下调SKOV-3细胞Caspase-9、Caspase-3、Caspase-7蛋白的表达。结论:透骨草提取物可以通过Caspases依赖途径诱导SKOV-3细胞凋亡。

透骨草组织培养的研究

以透骨草的嫩茎为材料,进行了愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽生根、试管苗的移栽、试管苗扦插、试管苗移植的研究,成功的建立起透骨草的嫩茎无性系。结果证明：1/2MS＋BA0.5mg/L＋2,4-D1.2 mg/L＋NAA0.2-0.8 mg/L为嫩茎愈伤组织的的理想培养基;1/2MS＋AgNO31.2 mg/L＋BA0.6 mg/L＋NAA0.1 mg/L为愈伤组织和不定芽分化的理想培养基;1/3MS＋IAA0.4 mg/L为不定芽生根培养和生根继代培养的理想培养基;炉灰渣是试管苗移栽和扦插的理想基质。移植试管苗后期出现生长旺盛、长势整齐的性状,翌年春季出现萌发早5d、根系相当于野生植株2倍的性状。