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湖北海棠植物络合素合酶MhPCS基因克隆及表达分析 被引量:3
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作者 姜倩倩 孙晓莉 +2 位作者 曹慧 邹岩梅 束怀瑞 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期341-347,共7页
【目的】为了探明植物络合素酶参与植物解毒重金属的作用,【方法】以湖北海棠(Malus hupehensis)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(MhPCS)编码区序列,并研究该基因的表达特点。【结果】结果表明MhPCS基因编码区全长为1 494 bp,编码497... 【目的】为了探明植物络合素酶参与植物解毒重金属的作用,【方法】以湖北海棠(Malus hupehensis)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(MhPCS)编码区序列,并研究该基因的表达特点。【结果】结果表明MhPCS基因编码区全长为1 494 bp,编码497个氨基酸。序列分析表明,MhPCS编码的氨基酸序列由2个典型的植物络合素合酶亚家族结构域组成,具有3个相邻的Cys-Cys元件(331-332、351-352和369-370位氨基酸)和植物络合素合酶蛋白的特征位点(Cys-56、Cys-90/91和Cys-109)。【结论】湖北海棠MhPCS与杜梨PbPCS蛋白同源性最高(94%),属于系统发生树的同一分支。MhPCS基因为组成型表达,各器官表达水平存在差异,其中根的表达量最高;100μmol.L-1CdSO4处理48 h内,MhPCS基因的表达量迅速上升;不同金属离子对其上调表达的诱导能力为:Cd2+>Cu2+>Pb2+。这为揭示重金属胁迫下湖北海棠环境适应的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 湖北海棠 植物络合素合酶基因(mhpcs) 克隆 表达
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大蒜植物络合素合酶基因转化对酵母重金属抗性的提高(英文) 被引量:16
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作者 姜瑛楠 冯保民 +1 位作者 张海燕 麻密 《植物生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期659-664,共6页
重金属污染是全球面临的亟待解决的生态问题。利用植物对重金属的富集作用来清除环境重金属污染即植物修复已成为重要的环境生物技术之一。这一技术的长远发展有赖于在重金属富集或耐受中起关键作用的基因的克隆和应用。植物络合素是植... 重金属污染是全球面临的亟待解决的生态问题。利用植物对重金属的富集作用来清除环境重金属污染即植物修复已成为重要的环境生物技术之一。这一技术的长远发展有赖于在重金属富集或耐受中起关键作用的基因的克隆和应用。植物络合素是植物体内一类重要的对重金属起螯合作用的多肽, 其合成受植物络合素合酶的催化。该文取得了如下研究结果:1)通过原子吸收测定表明,在大蒜(Allium sativum)的根部可以积累3 000 mg·kg-1的重金属镉;2)将克隆的大蒜植物络合素合酶基因(AsPCS)置于酵母表达启动子之下,构建酵母表达载体,并将其分别转入了因CUP1和acr3基因缺失而对重金属镉和砷敏感的酵母突变体菌株后,发现来自大蒜的AsPCS基因的表达使酵母CUP1缺失菌株对镉的耐受性提高了4倍, acr3缺失菌株对砷的耐受性提高了两倍;3)表达AsPCS基因酵母的生长模式证实了AsPCS基因的表达是酵母对重金属耐受性提高的原因。这些结果暗示, 大蒜植物络合素合酶基因在大蒜对重金属的抗性及大蒜根部对镉的积累中起关键作用,可作为重要的基因元件应用到修复污染的植物基因工程中。 展开更多
关键词 重金属污染 大蒜 植物络合素合酶 基因转化 酵母 植物修复
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毛白杨植物络合素合酶(PtPCS)基因克隆及其表达研究 被引量:7
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作者 柳玉霞 王晓桐 +3 位作者 苏旭东 代亮 张志毅 徐吉臣 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期174-183,共10页
植物络合素(PCs)是植物细胞中一类螯合重金属离子的多肽,对细胞解毒和重金属的富集有重要的作用。植物络合素合酶(PCS)是合成PCs途径中的关键酶。本研究克隆了毛白杨的植物络合素合酶基因PtPCS,该基因cDNA序列全长1512bp,可编码503个氨... 植物络合素(PCs)是植物细胞中一类螯合重金属离子的多肽,对细胞解毒和重金属的富集有重要的作用。植物络合素合酶(PCS)是合成PCs途径中的关键酶。本研究克隆了毛白杨的植物络合素合酶基因PtPCS,该基因cDNA序列全长1512bp,可编码503个氨基酸;与其它8种植物同源基因比对显示,它们的氨基酸序列相似性在67%~74.1%之间;构建进化树发现,这9种植物明显的分为两大分支,并且两大分支PCS蛋白的高级结构显示出明显的差异,一种呈月牙状,一种为伞状,重金属超富集植物均为月牙状结构。对毛白杨在不同镉浓度处理下PtPCS基因的表达情况分析发现,毛白杨根、茎、叶中PtPCS基因均表现出先升高后缓慢降低的表达趋势,并且在同一镉浓度处理下,毛白杨不同器官PtPCS基因的表达具有规律性,即根表达量最强,茎次之,叶片最弱。研究结果不仅为植物育种提供了重要的基因资源,也为剖析毛白杨的镉抗性和富集特性的研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 毛白杨 植物络合素合酶(PCS) 基因克隆 基因结构 基因表达
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番茄植物络合素合酶基因全长cDNA的克隆及其表达特点 被引量:10
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作者 李慧 丛郁 常有宏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期136-142,共7页
为从分子水平上揭示PCS基因在番茄重金属螯合解毒过程中的作用机制,该研究以番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)品种苏红2003幼苗eDNA为模板,根据NCBI上登录的其他植物的植物络合素合酶基因保守区设计简并引物,利用RT—PCR和RAC... 为从分子水平上揭示PCS基因在番茄重金属螯合解毒过程中的作用机制,该研究以番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)品种苏红2003幼苗eDNA为模板,根据NCBI上登录的其他植物的植物络合素合酶基因保守区设计简并引物,利用RT—PCR和RACE技术,克隆番茄植物络合素合酶基因cDNA全长,进一步利用半定量RT—PCR,探讨不同重金属处理后该基因在番茄不同器官中的表达情况。结果显示:番茄植物络合素合酶基因(LePCSl)的eDNA序列长度为1878bp,5’非编码区长113bp,3’非编码区长256bp。推导该基因编码503个氨基酸组成的蛋白,其相对分子质量为55600,等电点6.66。NCBI蛋白质比对结果显示:LePCS1由2个典型的植物络合素亚家族结构域组成,并具有19个可与金属离子结合的半胱氨酸(Cys)残基位点,其中包括4个相邻的Cys—Cys元件(90~91位、350~351位、368~369位和416~417位氨基酸)和11个单一Cys残基(56位、109位、113位、138位、144位、231位、332位、393位、396位、424位和489位氨基酸)。进化树分析表明,LePCS1与马铃薯、烟草、粉蓝烟草等茄科植物的PCS蛋白处于系统发生树的同一分支,且与马铃薯StPCS1蛋白的同源性最高(98.01%)。用含有不同浓度CdCl2·2.5H2O或CuSO4·5H2O的1/2Hoagland营养液[pH(5.8+0.1)]处理番茄幼苗12h,结果表明:随着CdCI2·2.5H2O浓度的提高,LePCS1基因表达量迅速上升,且其在根中的表达量高于叶片,但CuSO4·5H2O对其表达并无明显促进作用。因此认为LePCS1为番茄植物络合素合酶基因,其表达受Cd^2+诱导而上升,但不受Cu^2+影响,并且该基因在根中的表达量高于叶片。 展开更多
关键词 番茄 植物络合素合酶 基因克隆 表达特点
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植物络合素合酶及其基因研究进展 被引量:3
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作者 梅磊 朱晔 +2 位作者 肖钦之 陈进红 祝水金 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期530-538,共9页
植物络合素(phytochelatin, PC)能与重金属产生络合反应,在植物解除重金属毒害过程中起关键作用,其在生物体内的合成受植物络合素合酶(phytochelatin synthase, PCS)控制。深入研究植物络合素合酶对理解植物对抗重金属胁迫的机制,以及... 植物络合素(phytochelatin, PC)能与重金属产生络合反应,在植物解除重金属毒害过程中起关键作用,其在生物体内的合成受植物络合素合酶(phytochelatin synthase, PCS)控制。深入研究植物络合素合酶对理解植物对抗重金属胁迫的机制,以及运用基因工程手段创造工程植物来修复重金属污染环境具有重要意义。本文从PCS的双功能酶特性、基因表达和酶学特征、物种分布和亲缘关系、催化活性中心及激活模式5个方面作简要评述。PCS的主要功能为催化合成植物络合素,同时具有肽酶的副功能;PCS基因的表达是组成型的,在少数物种中,其表达也受Cd^(2+)等重金属离子诱导,而酶的活性受部分金属离子调控,其中以Cd^(2+)效果最为明显。PCS分布广泛,不是植物所独有的,在酵母、线虫等物种中同时存在,然而该酶在植物中同源性较高,在其他物种中较低,暗示其在植物对环境适应过程中具有某些重要作用。PCS的催化中心位于N-基端,其中与藻青菌中Cys70、His183和Asp201相对应的3个氨基酸在所有物种中为严格保守;PCS的重金属活化被认为与其含半胱氨酸有关,包含重金属直接接触活化和形成间接中间物活化2种假说。最后对PCS的多功能性、基因表达特性、酶激活机制及此基因的利用进行了展望,旨在为与PCS相关的研究提供参考。 展开更多
关键词 植物络合素合酶 双功能酶 亲缘关系 基因表达特征 活化机制
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普陀山苔草植物络合素合成酶CpPCS基因克隆及其在叶中的表达分析
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作者 谭家郎 胡永霖 +2 位作者 王成龙 杨占彪 朱雪梅 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2503-2510,共8页
以超富集植物普陀山苔草(Carex putuoshan)为材料,克隆其植物络合素合酶基因CpPCS的cDNA全长序列。同时,对其进行重金属胁迫处理,研究该基因在叶中的表达特点。结果表明,该基因cDNA序列全长1 461bp,可编码486个氨基酸;与其它植物同源基... 以超富集植物普陀山苔草(Carex putuoshan)为材料,克隆其植物络合素合酶基因CpPCS的cDNA全长序列。同时,对其进行重金属胁迫处理,研究该基因在叶中的表达特点。结果表明,该基因cDNA序列全长1 461bp,可编码486个氨基酸;与其它植物同源基因对比显示,它们的氨基酸序列相似性在63%左右;通过构建进化树发现,普陀山苔草CpPCS与小麦(Triticum aestivum)、水稻(Oryza sativa)及芦苇(Phragmites australis)等单子叶植物亲缘关系最近;荧光定量RT-PCR分析结果显示,CpPCS基因及CePCS基因受重金属铅锌胁迫上调表达,其中在叶中的表达量显著增加(P<0.05)。通过普陀山苔草植物络合素合酶蛋白基因进行了克隆鉴定,探讨该基因的结构、进化关系及其参与普陀山苔草重金属胁迫的应答模式,为进一步培育重金属污染土壤修复的植物奠定基础。 展开更多
关键词 普陀山苔草 植物络合素合成酶(PCS) 基因克隆 序列分析
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Root cell walls and phytochelatins in low-cadmium cultivar of Brassica parachinensis
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作者 Yan SUN Hui YE +2 位作者 Zebin WEI Xuhui KONG Qitang WU 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2020年第3期426-432,共7页
‘Lvbao-701’ is a cultivar of Chinese flowering cabbage(Brassica parachinensis) that exhibits low cadmium(Cd) accumulation and high Cd tolerance.In this study, this cultivar was compared with a high-Cd accumulating c... ‘Lvbao-701’ is a cultivar of Chinese flowering cabbage(Brassica parachinensis) that exhibits low cadmium(Cd) accumulation and high Cd tolerance.In this study, this cultivar was compared with a high-Cd accumulating cultivar, ‘Chixin-4’, to characterize the mechanisms influencing Cd accumulation in B. parachinensis. Root cell walls were isolated by dissolving the cytoplasm with an organic solvent, and root Cd and phytochelatin(PC) contents were analyzed. In addition, a PC synthase gene fragment was cloned and expressed under Cd stress conditions. The proportions of Cd bound to root cell walls were higher in the ‘Lvbao-701’ plants(68.32%–76.80%) than in the ‘Chixin-4’ plants(35.36%–54.18%) after exposure to Cd stress. The proportions of Cd bound to root cell walls measured using cell walls isolated with a non-destructive method were higher than those obtained using a conventional method that required grinding and centrifugation. Exposure to Cd stress induced the PC production and resulted in higher PC contents in the ‘Lvbao-701’ plants than in the ‘Chixin-4’ plants. Cloning and expression analysis of a B. parachinensis PC synthase cDNA fragment indicated that PC synthase gene expression was induced by Cd and occurred mainly in the roots of both ‘Lvbao-701’ and ‘Chixin-4’ plants. However, the PC synthase gene expression level was higher in the‘Lvbao-701’ roots than in the ‘Chixin-4’ roots. Therefore, a higher abundance of Cd in the root cell walls of ‘Lvbao-701’ and up-regulated PC production in the roots are probably the main reasons why ‘Lvbao-701’ exhibits lower Cd translocation to the shoots and higher tolerance to Cd than ‘Chixin-4’. 展开更多
关键词 cadmium accumulation cadmium stress cadmium tolerance cadmium translocation gene expression Lvbao-701 phytochelatin synthase
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豆梨植物络合素合酶PcPCS1基因克隆及其表达分析 被引量:12
8
作者 李慧 丛郁 +3 位作者 王宏伟 盛宝龙 蔺经 常有宏 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期880-890,共11页
以梨砧木豆梨(Pyrus calleryana Dcne.)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(PcPCS1)的cDNA全长序列,并研究该基因的表达特点。结果表明PcPCS1 cDNA序列长度为1970bp,编码497个氨基酸,推导的氨基酸序列由两个典型的植物络合素亚家族结构域... 以梨砧木豆梨(Pyrus calleryana Dcne.)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(PcPCS1)的cDNA全长序列,并研究该基因的表达特点。结果表明PcPCS1 cDNA序列长度为1970bp,编码497个氨基酸,推导的氨基酸序列由两个典型的植物络合素亚家族结构域组成,具有3个相邻的Cys-Cys元件(331-332、351-352和369-370位氨基酸)和植物络合素合酶蛋白的特征位点(Cys-56、Cys-90/91和Cys-109)。它与豆科植物的PCS1蛋白处于系统发生树的同一分支,且与百脉根LjPCS1蛋白的同源性最高(84%)。荧光定量RT-PCR分析结果显示:PcPCS1基因为组成型表达,各器官表达量存在差异,在20μmol·L-1CdSO4胁迫条件下,其表达量迅速上升,并且在豆梨叶中的表达量高于根;不同重金属离子对其上调表达的诱导能力为Cd2+>Zn2+>Cu2+。200μmol·L-1γ–谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁胱亚磺酰亚胺能够显著抑制该基因的表达,补充200μmol·L-1谷胱甘肽后,其相对表达量恢复或超过单一重金属离子处理的表达水平,即豆梨植物络合素以谷胱甘肽为底物,通过γ–谷氨酰半胱氨酸合成酶途经合成。 展开更多
关键词 豆梨 植物络合素合酶 基因 克隆 丁胱亚磺酰亚胺 表达特点
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植物螯合肽合成酶的研究进展 被引量:6
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作者 李安明 李德华 +1 位作者 邓青云 汪宜宇 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-36,共10页
植物螯合肽(phytochelatins,PCs)在植物解除重金属的毒性方面具有重要作用,其结构为(γ-Glu-Cys)n-Gly(n=2~11),它不是基因的编码产物,而是在植物螯合肽合成酶(phytochelatin synthase,PCS)的催化下以谷胱甘肽(glutathione,GSH)为底物... 植物螯合肽(phytochelatins,PCs)在植物解除重金属的毒性方面具有重要作用,其结构为(γ-Glu-Cys)n-Gly(n=2~11),它不是基因的编码产物,而是在植物螯合肽合成酶(phytochelatin synthase,PCS)的催化下以谷胱甘肽(glutathione,GSH)为底物合成的。PCS能够被金属离子激活,高度保守的N-端是催化结构域,而其C-端则是多变的。本文就PCS的结构,功能与催化机制以及PCS的最新研究进行了介绍。 展开更多
关键词 植物螯合肽 植物螯合肽合成酶 植物螯合肽合成酶基因
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刚毛柽柳ThPCS1基因克隆与镉胁迫应答分析 被引量:1
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作者 王培龙 杨妮 +3 位作者 张傲然 唐努尔·塞力克 李爽 高彩球 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期71-78,共8页
【目的】探究刚毛柽柳(Tamarix hispida)植物络合素合酶(phytochelatin synthase,PCS)基因ThPCS1的镉胁迫应答功能。【方法】通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对刚毛柽柳ThPCS1基因进行克隆;通过BioEdit、MEGA 5.0等软件对ThPCS1蛋白... 【目的】探究刚毛柽柳(Tamarix hispida)植物络合素合酶(phytochelatin synthase,PCS)基因ThPCS1的镉胁迫应答功能。【方法】通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对刚毛柽柳ThPCS1基因进行克隆;通过BioEdit、MEGA 5.0等软件对ThPCS1蛋白进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析镉(Cd)胁迫条件下ThPCS1基因在柽柳根和叶中的表达水平;构建pROKII-ThPCS1过表达载体,通过瞬时侵染技术获得转ThPCS1基因柽柳,分析比较转基因和对照柽柳Cd胁迫应答相关生理指标和生理染色情况。【结果】从刚毛柽柳转录组数据中分离出ThPCS1基因的全长转录组序列,预测该基因的开放阅读框为1581 bp,编码526个氨基酸,编码蛋白质的分子质量为130.75 ku,理论等电点pI为5.0。保守结构域的多重比对分析结果均显示ThPCS1蛋白在N端具有PCS结构域。RT-qPCR结果显示在镉胁迫条件下,ThPCS1基因在柽柳根中被诱导表达,且呈现出组织特异性的表达模式。对镉胁迫处理后的刚毛柽柳ThPCS1转基因植株和对照植株相关生理指标进行测定,结果显示,同对照植株相比,转基因植株的活性氧和镉离子含量降低,细胞膜损伤减小。【结论】刚毛柽柳ThPCS1基因在根中的表达明显受到镉胁迫诱导,可能参与了刚毛柽柳对镉胁迫的应答。本研究初步证明刚毛柽柳ThPCS1基因可能提高了转基因植物的耐镉能力,是一个耐镉分子育种的候选基因。 展开更多
关键词 刚毛柽柳 植物络合素合酶 镉胁迫 基因表达 实时荧光定量PCR
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