Phytophthora palmi分泌的10.6kD蛋白激发烟草的过敏反应

从疫霉菌PhytophthorapalmivoraButler的培养滤液中分离出分子量为10．6kD的不含糖基的耐热蛋白。这种10．6kD蛋白能诱导烟草（NicotianatabacumL．）叶片发生过敏性坏死反应。而疫霉菌另一种P．melonisKatsura的培养滤液中不含这种类似蛋白，不能诱导烟草叶片发生过敏反应。利用共聚焦激光扫描显微镜，以荧光探剂FDA（fluoresceindiacetate）指示细胞活性，DCFDA（2’，7’－dichlorodihydrofluoresceindiacetate）指示H2Q2的生成，结果表明用该蛋白处理的烟草叶片的叶肉、表皮和保卫细胞，以及悬浮培养细胞在产生过敏性坏死反应之前，均有H2Q2的大量生成。推测这种10．6kD蛋白属于elicitin类激发子。

柠檬苗期一种新病害的病原鉴定及防治药剂的室内筛选

近年,在云南省瑞丽市柠檬上发生一种严重的苗期新病害,该病害主要危害柠檬苗的嫩叶、嫩梢和茎,症状表现为褐色叶斑,枝梢枯,严重时植株叶片全部脱落,甚至整株干枯而死。本研究从柠檬苗的病叶和茎上分离得到23株菌株。对病原菌的培养性状、形态特征的观察表明,这些菌株都属于疫霉属棕榈疫霉。致病性测定证明,该菌为柠檬苗疫病的病原菌。采用生长速率抑制法测定了7种杀菌剂对该病菌的菌丝生长抑制作用,并测定其中4种杀菌剂对该病菌的毒力。结果表明:68%精甲霜.锰锌水分散粒剂、50%烯酰吗啉可湿性粉剂和68.75%氟吡菌胺.霜霉威悬浮剂3种杀菌剂对病菌菌丝生长的抑制效果较好,抑菌率在90%左右。毒力测定结果表明,68%精甲霜.锰锌水分散粒剂、68.75%氟吡菌胺.霜霉威悬浮剂、50%烯酰吗啉可湿性粉剂和64%噁霜.锰锌可湿性粉剂的有效中浓度(EC50)分别为121.372、133.392、133.833mg/L和814.071mg/L,其中68%精甲霜.锰锌水分散粒剂有效中浓度最低,相对抑制效果最好。4种药剂的相关系数均在0.92以上,表明药剂浓度与抑制作用呈现较高的相关性。

32份木薯种质对疫霉根腐病的抗性评价和农艺性状分析

通过田间自然发病和室内离体接种方法对32份木薯种质进行了棕榈疫霉根腐病抗病性评价,结果表明,供试的32份木薯种质中,高抗种质7份,抗病种质7份,中感种质8份,感病种质7份,高感种质3份。其中高抗种质为‘H360’、‘华南11号’、‘华南8号’、‘H588’、‘桂热3号’、‘H873’和‘H971’;抗病种质为:‘F556’、‘H502’、‘GR911’、‘C-4’、‘F10’、‘南植188’和‘H47’。对其中14份抗棕榈疫霉根腐病木薯种质的农艺性状进行了鉴定和评价,结果表明‘华南8号’、‘GR911’、‘F556’、‘C-4’、‘H360’可以进一步加以利用。

木薯根腐病棕榈疫霉病菌的分子检测

由棕榈疫霉引起的根腐病是木薯生产中的重要病害之一。通过比对分析棕榈疫霉与其它疫霉菌ITS序列差异,设计1对特异引物PF1/PR1。结果表明:在优化的反应体系和扩增条件下,利用该引物可从棕榈疫霉菌基因组DNA中特异扩增到1条约540 bp片段,序列测定验证了其准确性,检测灵敏度达到pg级。该对引物可有效用于植物组织和土壤中木薯根腐病棕榈疫霉病菌的特异性检测。此结果将对木薯根腐病的早期快速准确诊断和检测具有重要意义。

由棕榈疫霉引起的木薯根腐病防控药剂的筛选

采用菌丝生长速率法对由棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)引起的木薯(Manihot esculenta)根腐病进行了15种药剂的筛选。结果表明,杀毒矾(56%代森锰锌.8%恶霜灵WP)、氟吗.乙铝(5%氟吗啉.45%三乙膦酸铝WP)和甲霜.霜霉威(15%甲霜灵.10%霜霉威盐酸盐)的EC50最小,抑菌效果最好;霜霉威盐酸盐(72.2%霜霉威盐酸盐EC)的EC50最大,抑菌效果最差。建议生产上使用杀毒矾、氟吗.乙铝和甲霜.霜霉威来防治木薯根腐病。

等温扩增技术快速检测棕榈疫霉

【目的】棕榈疫霉是农林业生产上的一种危害严重的病原菌,建立棕榈疫霉的快速分子检测技术对于预测疫病发生情况、及时采取有效的防治方法控制疫病的传播和流行、减少经济损失具有重要意义。【方法】采用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了以基因间隔区(intergenic spacer,IGS)为靶标的快速、简单、特异和灵敏的棕榈疫霉菌的检测方法。以IGS基因为靶序列,利用环介导等温核酸扩增技术,设计了多组LAMP引物,同时建立并优化了LAMP反应体系与条件,最终筛选出1组扩增反应结果较好的LAMP引物,采用该组引物进行特异性、灵敏度和实际应用的验证。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定反应结果。【结果】整个检测过程在等温64℃条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。在特异性试验中,通过HNB显色只有在棕榈疫霉菌株中能观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌的供试菌株仍为紫色的阴性反应;在灵敏度试验中,PpIGS-LAMP技术检测灵敏度达到10fg.μL^(-1)目标菌纯DNA;在实际应用中,PpIGS-LAMP技术能够快速检测出采自田间的木薯根部土壤中目标菌和人工接种发病木薯组织样品的目标菌。【结论】本研究在国内外首次采用环介导等温扩增技术检测棕榈疫霉,建立了1种快速、高灵敏度、高特异性、可视化的棕榈疫霉的LAMP检测方法。建立的棕榈疫霉菌的LAMP检测方法在80 min内可完成待检样品的检测过程,显著缩短检测时间,降低基层部门的检测成本,为棕榈疫霉引起疫病的检疫和所致病害的快速诊断提供了新的检测技术。

木薯疫霉根腐病病原初步鉴定及其生物学特性测定

2010年11月,在对海南省儋州市的木薯病害调查中发现一种根腐病。经致病性评价,分离获得病原菌。显微观察发现,菌丝无分隔,孢囊梗呈简单合轴分枝,孢子囊多顶生,倒梨形,厚垣孢子大量产生,球形、顶生。形态观察结果初步表明,其为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。ITS序列分析表明,其和几株棕榈疫霉(HQ237481,HQ237478和HQ237477)的序列同源性为99%。生物学特性研究表明,OA或CMA培养基、26~30℃、p H 5、D-木糖醇、乙酸铵、光暗交替是病菌生长最适条件,菌丝致死温度为50℃,10 min。

番木瓜棕榈疫霉菌的生物学特性研究

对番木瓜疫病菌棕榈疫霉的生物学特性研究结果表明,最适宜棕榈疫霉菌落生长的培养基是V8汁和番茄汁,其次是玉米培养基,较差的是PDA培养基。适宜棕榈疫霉的pH值为4.0～9.0、最适pH值为5.5～7.2;适宜生长的温度范围为15～35℃、最适生长温度为20～28℃,致死温度为45℃,棕榈疫霉对光照不敏感。通过替换碳源的试验得知,最适合棕榈疫霉生长的碳源是蔗糖和淀粉,甘油则较差;添加氮源的试验结果表明,最适合棕榈疫霉生长的是蛋白胨,牛肉膏较差,而硫酸铵会抑制棕榈疫霉的生长。

番木瓜棕榈疫霉核糖体DNA-ITS序列分析

采用真菌核糖体转录间隔区通用引物ITS1和ITS4,PCR扩增了2株分离自广州的番木瓜疫霉菌(Phytoph-thorasp.)的核糖体基因ITS序列,并对PCR产物进行了克隆测序.供试菌株C0506071、C0506072分别克隆出814 bp、830 bp的序列,两菌株ITS序列间的相似同源率为99.62%.将供试菌株的ITS序列与GenBank中登陆的20株疫霉菌株的ITS序列进行聚类分析,结果表明,供试菌株与GenBank注册的AF467093、AJ517463聚在同一分枝上,均为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora),其他不同的疫霉种聚在不同的分支上,系统学关系较远.这表明分离自广州的2株番木瓜疫霉菌为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora).

橡胶籽苗茎腐病原菌鉴定

对云南景洪橡胶籽苗出现的茎腐病进行病原分离鉴定,确定病原为棕榈疫霉Phytophthora palmivora,就病害防治给出相关建议。

四川省无花果疫霉病病原鉴定

为明确四川省无花果爆发的疫霉病病原菌种类,对四川省无花果种植区的无花果疫霉病的发生进行调查,并采集发病果实。采用组织分离法对无花果疫霉病的病原菌进行分离培养,并通过形态与分子鉴定相结合对该病原菌进行鉴定。结果表明,病原菌菌丝为白色;卵孢子球形;孢子囊椭圆形或卵形,顶端有乳突。分子生物学鉴定结果显示:四川省无花果疫霉病病原菌与棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)序列同源性高达99%。根据形态学和分子鉴定,将四川省无花果疫霉病病原菌鉴定为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。

广东柑橘疫霉研究

从广东省柑橘栽培老区的苗圃和果园采集的罹病柑橘组织样本中分离获得36个疫霉菌株,鉴定出6个种,其中柑橘褐腐疫霉Phytophthoracitrophthora11株,烟草疫霉P.nicotianae9株,棕榈疫霉P.palmivora7株,辣椒疫霉P.capsici和掘氏疫霉P.drechsleri各4株,柑橘生疫霉P.citricola1株.

福建大花蕙兰疫病病原菌生长特性研究

对引起福建地区大花蕙兰疫病的棕榈疫霉菌进行生长特性的研究.结果表明：不同培养基对该菌生长影响不同,菌丝在V8汁培养基上生长最快,在清水琼脂培养基上生长最慢,不同培养基上菌落平均直径依次是：V8汁〉大花蕙兰叶煎汁＂番茄汁〉PDA=PSA〉 玉米粉〉 清水琼脂,最大与最小菌落平均直径差为3.23cm,且菌落形态有差异;碳源和氮源以甘露醇和牛肉膏最佳;病原菌在15～35℃,pH3～10 的条件下均能生长,最适的生长温度为30℃,最适的pH 值为6;菌丝的致死温度为50℃;光暗交替有利于该菌的生长.

7种杀菌剂对金钱树疫病病原菌的室内毒力测定

采用室内生长速率法测定了7种杀菌剂对金钱树疫病病原菌棕榈疫霉(Phytophthora palmivora Butler)的抑制作用。结果表明:0.15%四霉素水剂的抑制效果最好,EC50值为0.0457μg/mL,EC90值为0.2174μg/mL;其次为6.25%精甲.咯菌腈悬浮种衣剂和50%烯酰吗啉水分散粒剂,抑菌效果显著,前者的EC50值为0.0758μg/mL,EC90值为2.4683μg/mL,后者的EC50值为0.3407μg/mL,EC90值为2.0794μg/mL;22.7%二氰蒽醌悬浮剂、80%代森锰锌可湿性粉剂和50%氟码.乙铝可湿性粉剂对菌丝生长也有一定的抑制作用,其EC50值分别为0.1382μg/mL、2.3796μg/mL和5.4602μg/mL;72.2%霜霉威盐酸盐水剂的抑制效果最差,EC50值为498μg/mL。在供试的7种杀菌剂中,性价比以80%代森锰锌可湿性粉剂最高,其次为50%烯酰吗啉水分散粒剂。

广州地区观赏植物疫霉种的鉴定及交配型研究

近年广州地区观赏植物疫病发生普遍。１９８７～１９９２年，从九重葛、长春花、忍冬、白兰、五彩椒、米兰及云南黄素馨等观赏植物上分离获得３９个疫霉菌株。根据孢子囊形态、脱落性、有性器官的形成、生长温度及致病性等，将其鉴定为寄生疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａＤａｓｔ，），辣椒疫霉（Ｐ．ｃａｐｓｉｃｉＬｃｏｎｉａｎ．）和棕榈疫霉（Ｐ．ｐａｌｍｉｖｏｒａ（Ｂｕｔｌ．）Ｂｕｔｌｃｒ．）。对这３种疫霉分别作了种的描述。试验结果表明，甲霜灵（瑞毒霉）及甲霜灵锰锌（瑞毒霉锰锌）防病效果比较显著。

大花蕙兰疫病病原鉴定及防治药剂筛选

对福州地区感病大花蕙兰疫病的病原菌进行鉴定并进行接种试验,采用菌丝生长速率法测定7种药剂对该病菌的抑制效果。试验结果表明:大花蕙兰疫病的病原为棕榈疫霉;大花蕙兰新叶和受伤的老叶易感病,接种后的发病率为100.0%和53.3%,无刺伤的老叶则不发病;高浓度的四霉素和烯酰吗啉对病原菌的抑制效果最好,平均抑菌率达到95.0%以上,各药剂的抑菌效果随着稀释浓度的升高而下降。

马拉巴栗疫病病原的分离与鉴定

2008—2009年,从广东省湛江等地采集疑似疫病的马拉巴栗病株,经病原菌分离及柯赫氏法则验证,证明其病原菌是疫霉菌。通过致病性、寄主范围测定,菌体形态,培养特性及rDNA-ITS序列分析等,将该病原菌初步鉴定为棕榈疫霉(Phytophthora palmivora)。

油梨苗期黑茎病病原菌的鉴定

油梨(Persea americana Mill.)又名鳄梨、牛油果和樟梨等,为樟科、鳄梨属,原产中美洲,属热带、亚热带名贵果树之一[1],具有营养价值高、风味好,其消费遍及全球,经济潜力巨大[2]。目前关于国内外病害的报道,主要有根腐病、炭疽病[3]、蒂腐病[4]和褐斑病[5]等。2017年5月,作者在海南省儋州市附近的苗圃中发现一种为害油梨苗茎基部的病害,发病率在15%~20%,严重时导致整株植物死亡。