甘肃白兰瓜、西瓜疫霉种的鉴定研究

从甘肃白兰瓜、西瓜上分离出15株疫霉,鉴定出两个种:掘氏疫霉Phytophthoradrechsleri Tuckcr,辣椒疫霉P.capsici Lconian。分离物经过配对培养,均可产生性器官,10株掘氏疫霉为A_1交配型,5株辣椒疫霉为A_2交配型。

广西黑皮冬瓜疫病的病原菌鉴定及其生物学特性

Isolate PD1 of Phytophthora was isolated from diseased black pericarp wax gourd in Guangxi in 2005. The morphological and biological characters of the isolate were examined, and its sequence of ribosomal DNA-ITS was analyzed. The range of growth temperature of the isolate was 10-37℃ and the optimal one was 31℃. The pathogen was sensitive to 10 mg/kg of malachite green, and its ability for starch utilization was weak. A wide host range of the pathogen was confirmed by artificial inoculation. The sizes of sporangia were (37.5-71.7) μm×(20.8-47.5) μm (av. 55.0 μm×30.4 μm ). Microcycle conidiation of the pathogen was observed. The pathogen was identified as Phytophthora drechsleri Tucker based on its morphological and biological characters as well as ribosomal DNA-ITS sequence.

木霉（TR－5）对病原真菌的拮抗机制和防病效果研究

从土壤中分离获得一株木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐ．）菌株（ＴＲ－５），用对峙法和系列稀释法测定其对立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ），禾谷丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｃｅｒｅａｌｉｓ），西瓜枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ∫ｎｉｖｅｕｍ），油菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ），昆明腐霉（Ｐｙｈｔｉｕｍｋｕｎｍｉｎｇｅｎｓ）和寄生疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａＰａｒａｓｉｔｉｃａ）的拮抗作问。结果表明，ＴＲ－５菌株对６种病原真菌都具有极强的拮抗作用，主要表现为缠绕、附着在病原真菌菌丝上，同时产生吸器侵入病原真菌的菌丝，使菌丝断裂。还能分泌有毒或抗生物质抑制其生长，并具有很强的生长竞争能力。ＴＲ－５菌株对立枯丝核菌，禾谷丝核菌和西瓜枯萎病菌的有效抑制浓度为１０６～１０７个孢子／ｍｌ；对油菜菌核病菌和昆明腐霉菌为１０４～１０５个孢子／ｍｌ；而对寄生疫霉为１０５～１０６个孢子／ｍｌ。用ＴＲ－５木霉的分生孢子制剂在温室条件下对黄瓜猝倒病（Ｐｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）和黄瓜疫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ）进行防治试验，效果分别?

凝结芽孢杆菌TQ33产抗疫霉物质特性研究

凝结芽孢杆菌TQ33是从脱脂奶粉中分离出来的,发现其发酵液中活性代谢产物对甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)、灰葡萄孢霉菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜枯萎病菌(Fusarium ox-ysporum)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulate)植物致病真菌有很好的抑制作用,其中对甜瓜疫霉菌具有较强的抑制作用,同时对抗甜瓜疫霉物质特性进行了研究,将具有抑菌活性的发酵液分别经过调节pH、加热、蛋白酶处理后发现,凝结芽孢杆菌TQ33发酵液具有一定的热稳定性;在pH,5～6时具有最大抑菌活性,发酵液经胰蛋白酶、中性蛋白、蛋白酶K处理后失去部分抑菌活性,初步分离纯化实验表明其中一种抗菌物质可能是苯乳酸,这表明凝结芽孢杆菌TQ33发酵液中可能含有苯乳酸,以及其他蛋白类抑菌物质.

烟草黑胫病抗性鉴定方法比较及其相关性分析

为明确烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var.nicotianae Tucker)抗性鉴定方法,采用粗毒素浸种法、粗毒素浸根法、孢子悬浮液浸根法及田间病圃接种法,研究烟草革新3号(抗病品种,R)、G28(R)、金星6007(中抗品种,MR)、小黄金1025(感病品种,S)、红花大金元(S)等对烟草黑胫病的抗性,并对其抗性鉴定效果进行相关性分析。结果表明,孢子悬浮液浸根法的鉴定结果与粗毒素浸种法的鉴定结果呈显著负相关,与田间病圃接种法的鉴定结果呈显著正相关。粗毒素浸种法不受季节限制,可以对烟草材料黑胫病的抗性进行大批量筛选。粗毒素浸根法和田间病圃接种法有一定的缺陷,可以作为粗毒素浸种法和孢子悬浮液浸根法的辅助鉴定方法。在整个抗性鉴定过程中,孢子悬浮液浸根法可观测到烟株病情指数和发病率的动态变化,较其他3种方法更能准确、合理地评价品种抗性。

解淀粉芽孢杆菌IMAUB1034抗真菌活性物质的初步研究

对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)IMAUB1034活性物质的理化性质和盆栽实验中对甜瓜疫霉菌引起的病害的防治效果进行研究.结果显示,解淀粉芽孢杆菌发酵液对由甜瓜疫霉菌引起的病害具有一定防病效果,病情指数为40.22,生防效果达到35.9%.另外,其发酵液还能抑制甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰葡萄孢霉菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulate)的生长.无菌上清液中的活性物质能耐高温、耐酸碱,在pH,2～10仍然能检测到很高的抑菌活性.但经过酶处理后抑菌活性降低程度不同.

掘氏疫霉有性生殖后代交配型和致病力遗传研究

规定了掘氏疫霉有性后代单卵孢株的交配型及其遗传稳定性和致病力分化．结果表明，Ａ２和Ａ１Ａ２；型在遗传上不稳定，在单卵孢株保藏过程中可以发生变异，部分Ａ２菌株改变为Ａ１Ａ２型，而Ａ１Ａ２菌株改变为Ａ２交配型，但有部分Ａ１Ａ２菌株可以稳定保持其自孕能力．掘氏疫霉有性生殖后代发生明显的致病力分化现象，来自同一亲本的单卵孢后代对黄瓜、瓠子、笋瓜的致病力有明显差异，说明有性生殖对掘氏疫霉致病力变异可能起主要作用．

在试管中筛选烟草抗黑胫病突变体

用烟草体细胞愈伤组织与烟草黑胫病菌共同培养,在209块G_(140)烟草体细胞愈伤组织中有1块长出抗菌突变系,离开选择压力后经3次140天继代培养仍能表达抗性。用烟草黑胫病菌接种在单倍体试管苗上,从546株八大香单倍体试管苗中筛选到1株(代号RB_1)、从2431株小黄金1025单倍体试管苗中筛选到2株(代号RS_(1.3))抗病突变系。初步鉴定RB_1、RS_(1.3)、的抗病性均超过其亲本和高抗品种G_(140);取RB_1、RS_(1.3)叶片培养,其体细胞无性系植株群体仍具抗病性。

德雷疫霉侵染甜瓜叶片过程的研究

接德雷疫霉Phytophthora drechsleri游动孢子于甜瓜(Cucumis mel L.)叶片上,24℃下培养,侵入前形成静止胞,萌发产生压力胞,经由气孔保卫细胞间隙侵入。侵染菌丝在叶肉细胞间和细胞内扩展,也有从气孔抻出在叶面蔓延的。菌丝状孢子囊梗由气孔抻出或在抻出的菌丝上长出孢子囊梗,在顶端形成孢子囊。24℃下孢囊直接萌发出芽管。用德雷疫霉A_1型和辣椒疫霉A_2型的游动孢子悬浮液等量混合,接于白兰瓜叶片上能产生大量藏卵器、卵孢子。接菌后72h整个叶片呈水浸状暗褐色病变。

来源于酸马奶的植物乳杆菌Bx6-2抑制甜瓜疫霉菌的研究

采用生长速率法测定植物乳杆菌Bx6-2的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝生长的影响,并对抑菌活性物质的理化性质进行了研究.结果表明,该菌的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝的生长有抑制作用.发酵液中的活性物质有较好的热稳定性,在pH 6.0时抑菌效果较好,对酸性蛋白酶敏感,对中性蛋白酶不敏感,常温下10 d的稳定性较好.通过调节pH、酶处理和加热处理实验,说明其抑菌活性物质不是乳酸,蛋白质类物质起了一定的抑菌作用,但其抑菌现象可能是与其他物质共同作用的结果.

掘氏疫霉双标记配对组合的筛选

以对药物的抗性和敏感性为遗传标记,筛选掘氏疫霉(Phytophthora drechsleri Tucker)双标记菌株为配对亲本.测定了采集自我国江苏、广东、上海及来自美国菌种保藏委员会的28个掘氏疫霉野生型菌株对36种药物的抗性,筛选出2个双标记配对组合:Phy607×Phy112、Phy115×Phy64,其中,菌株Phy607(A_1)、Phy64(A_2)抗放线菌酮对新霉索敏感,Phy115(A-1)、Phy112(A_2)抗新霉素对放线菌酮敏感.上述配对组合可用于掘氏疫霉有性生殖行为的研究.上述菌株对放线菌酮和新霉素的抗性由细胞核杂合基因控制,抗性为显性遗传.测定结果还表明,掘氏疫霉种内菌株间对甲霜灵、恶霉灵、乙磷铝、金霉素、稻瘟索等5种药物的抗性存在明显差异,可能作为该种遗传研究的标记性状.

影响黑胫病菌侵染试管烟苗的几个因素分析

黑胫病或赤星病菌接种到试管烟苗基部进行培养，定期观察病情，结果表明：（１）高抗黑胫病而高感赤星病品种Ｇ１４０的幼嫩试管苗能被黑胫病菌侵染，接种病原菌３０天病指１００；但赤星病却与烟苗共生，病指为０。（２）接种黑胫病菌后，高感品种小黄金１０２５较Ｇ１４０凋萎死亡迅速，二者差７～１０天；同一品种内单倍体较二倍体凋萎死亡迅速。（３）试管烟苗继代后７天内，极易遭黑胫病菌侵染，抗感品种间无差异；继代后１０天，抗感品种间差异显著；继代后时间继续延长，烟苗抗病性有增加趋势。（４）２８℃左右黑胫病菌侵染能力强而稳定，１５℃能够侵染，８℃以下失去侵染能力。

掘氏疫霉抗土菌灵突变体的诱导及其特性研究

掘氏疫霉Phytophthora drechsleri是引起黄瓜疫病的主要病原菌。采用紫外线诱导获得了20株掘氏疫霉抗土菌灵的突变体，并对其生物学特性进行了研究。结果表明，掘氏疫霉对土菌灵的抗性突变频率高于对甲霜灵的抗性突变频率，但其抗性水平低于抗甲霜灵突变体，在1．3—4．3倍之间；掘氏疫霉对土菌灵的抗性在继代培养和常温保存过程中稳定，突变体的生长速率与亲本敏感菌株相比发生了不同程度的变化；此外，掘氏疫霉抗土菌灵突变体对甲霜灵和烯酰吗啉无交互抗性。

广东柑橘疫霉研究

从广东省柑橘栽培老区的苗圃和果园采集的罹病柑橘组织样本中分离获得36个疫霉菌株,鉴定出6个种,其中柑橘褐腐疫霉Phytophthoracitrophthora11株,烟草疫霉P.nicotianae9株,棕榈疫霉P.palmivora7株,辣椒疫霉P.capsici和掘氏疫霉P.drechsleri各4株,柑橘生疫霉P.citricola1株.

黄瓜疫霉菌拮抗内生细菌的筛选与鉴定

【目的】从黄瓜叶片中筛选抗疫霉菌效果好的内生细菌并进行鉴定,为进一步研究黄瓜疫病的理论探索及防治应用提供实验材料。【方法】以黄瓜叶片为实验材料筛选内生细菌,根据待检菌株的镜检特征、革兰氏染色反应、菌落排列方式和菌落形态特征等进行初步筛选。采用平板对峙法和发酵液拮抗法实验对目标内生细菌进行拮抗作用测定。通过16S rDNA序列测定及同源性分析,并构建系统发育树确定目标菌株种属。【结果】初步筛选出32株内生细菌将其编号为CL1~CL32,其中革兰氏阴性杆菌10株、革兰氏阳性杆菌13株、革兰氏阳性球菌9株,利用平板对峙法发现8株对掘氏疫霉菌有较强抑制作用的拮抗菌株,菌丝抑制率为10.3%~54.3%,抑菌半径为1~7 mm,对其中抑菌效果较好的3株菌株(CL7、CL9、CL15)进行发酵液拮抗实验,结果显示其抑菌率分别为54.4%、72.2%、63.3%。【结论】对掘氏疫霉菌具有较强抑制作用的3株内生细菌(CL7,CL9、CL15)分别属于泛菌属Pantoea sp.、假单胞菌属Pseudomonas sp.和葡萄球菌属Staphylococcus sp.,其中抑制效果最明显的为CL9,即假单胞菌属Pseudomonas sp.。

河北大花蕙兰疫病病原鉴定及其生物学特性分析

为了明确大花蕙兰疫病的发生机制,对河北地区引起大花蕙兰疫病的病原菌进行分离、纯化、鉴定和接种试验,并对大花蕙兰疫病的病原菌进行生物学特性分析。结果表明,河北大花蕙兰疫病的病原菌为掘氏疫霉(Phytophthora drechsleri),有伤接种3 d后即可以产生典型疫病症状。病原菌的适应能力较强,在24~32℃和pH值4.0~10.0条件下均能正常生长,其最适生长温度为28℃,最适pH值为7.0。在V8培养基、查氏培养基和CA培养基上均生长良好,但在PDA培养基上生长较差。在无菌水中连续光照培养2 d即可诱导产生大量孢子囊和孢囊孢子。孢囊孢子保湿12.0 h萌芽率即可达90.0%以上,适宜萌芽温度为20~40℃,最适萌芽温度为30℃,适宜萌芽pH值为4.0~9.0,最适pH值为7.0。以上研究表明,河北地区大花蕙兰疫病病原菌具有较强的致病力和环境适应能力。

新疆哈密瓜疫病掘氏疫霉及寄主范围的初步研究

据1981～1983年9个哈密瓜生产基地根颈部病害的病原成份调查表明,哈密瓜疫病的优势种为掘氏疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker.)。为澄清在新疆掘氏疫霉的寄主范围,1989～1990年用1981年采自鄯善县哈密瓜上分离的单孢(Phy-6)菌株,在温室平均温度25～28℃条件下对5科25种自然根颈感病的栽培作物作接种试验。结果表明,本菌是葫芦科大多数作物的重要致病菌,并可侵染棉花和红花;在有伤口条件下可以侵染南瓜、西葫芦和茄株;对苦瓜、丝瓜,豆科作物的豇豆、四季豆、菊科的向日葵、茄科的蕃茄、辣椒、烟草、马铃薯、蔷薇科草莓(植株)等均不能致病。

掘氏疫霉有性生殖行为的研究

以抗药性为标记,采用双标记菌株为亲本,研究了掘氏疫霉有性生殖行为。配对亲本 Phy607(A_1)、Phy64(A_2)抗放线菌酮对新霉素敏感,Phy115(A_1)、Phy112(A_2)抗新霉素对放线菌酮敏感。在配对组合 Phy607x Phy112、Phy115x Phy64 F_1代单卵孢株群体中,均出现同时抗放线菌酮和新霉素的个体,分别占群体的37%和50%.这种双重抗药性在单游动孢子无性系后代可稳定遗传,在自交后代发生分离。上述4个亲本在相对交配型产生的激素刺激下均可自交产生卵孢子。因此认为,掘氏疫霉种内菌株配对有性生殖可能以配对亲本杂交和各自自交等3种方式产生卵孢子,以双亲杂交为主要方式.

掘氏疫霉遗传学研究 Ⅰ.自交后代(S_1)生物学性状的遗传与变异

测定了掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker生长速率、菌落形态、菌体形态、产孢能力、耐35℃高温生长、致病力等生物学性状在自交S_1代的遗传与变异。2个掘氏疫霉野生型菌株(A_1、A_2各1株)经聚碳膜间隔配对诱导自交产生的卵孢子(保存110天左右)在S+L培养基上萌发,分别获得30和35个单卵孢株(萌发率10%左右)。测定结果表明,上述生物学性状在2个亲本自交后代均发生变异,部分单卵孢株生长速度减慢、菌落形态明显改变、孢子囊和菌丝畸形、产孢能力增强、在35℃中弱生长或不生长,或致病力减弱直至无致病力。在亲本的单游动孢子无性系后代未观察到上述变异,说明上述生物学性状变异主要因亲本遗传因子的杂合性所致。从遗传学角度探讨了在自然条件下掘氏疫霉生物学性状的变异性以及某些分类依据不稳定的原因,指出有性生殖过程中的基因重组可能是引起掘氏疫霉生物学性状变异的主要原因之一。

掘氏疫霉遗传学研究——Ⅱ.交配型遗传与变异的研究

本研究以掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker野生型菌株的单游动孢子无性系为亲本,测定了自交、杂交后代交配型的遗传,经KMnO_4处理引起的交配型变异以及F_1代可自孕单卵孢株有性生殖后代交配型的遗传与变异。聚碳膜间隔配对诱导A_1和A_2菌株自交产生的卵孢子经H_2O_2处理刺激萌发(萌发率12～16％)获得单卵孢株。交配型测定结果表明,A_1和A_2亲本自交S_1代单卵孢株均保持与亲本一致的交配型。用KMnO_4处理上述卵孢子导致A_1和A_2亲本的部分S_1代单卵孢株出现自孕现象,少数A_1亲本自交后代改变为A_2交配型;从A_1交配型亲本的S_1代可自孕菌株产生的卵孢子萌发所建立的单卵孢株中,同时获得A_1和A_2交配型菌株。上述结果不支持Sansome关于疫霉菌A_1、A_2交配型分别由纯合、杂合基因控制的假说,进一步证明了Ko关于交配型抑制因子控制交配型表达的假说的合理性。掘氏疫霉种内菌株直接配对产生的卵孢子用H_O_2刺激萌发获得F_1代单卵孢株。测定结果表明,在F_1代出现A_1、A_2、A_1A_2、A^04种交配型的单卵孢株,其比例因不同亲本组合而有较大差异。 F_1代出现的A_1A_2菌株自孕产生的卵孢子经H_2O_2处理刺激萌发建立自交系,观察到A_1A_2交配型在有性生殖后代发生分离,各交配型比例因亲本不同而异。A_1A_2菌株的自孕能力在单游动孢子无性系后代可稳定遗传,认为F_1代出现的A_1A_2个体来自亲本的杂交。A_1A_2单卵孢株保藏4～6个月后大多仍具自孕能力,少数改变为A_2交配型。