水稻抗瘟基因Pi-b与Pi-5的分子检测及外引抗源的利用评价

为了解2个广谱抗稻瘟病基因Pi-b、Pi-5在东北三省水稻品种中的分布以及部分外引材料在黑龙江省的应用价值,以68份水稻品种(52份东北三省材料、16份外引材料)和31份带有不同抗性基因的水稻单基因系为试验材料,利用基于水稻抗稻瘟病基因Pi-b、Pi-5设计的功能标记对其进行检测,同时采用黑龙江省稻瘟病优势生理小种进行混合接种鉴定。结果表明,供试材料中阳性对照BL1和沈农265、辽粳371、辽粳9号、辽星1号、中辽9052、吉粳53、吉粳94、垦稻19、垦糯2号含有抗性基因Pi-b;阳性对照Tetep和盐粳68、吉粳53、关东107、吉玉粳、九稻44、空育163、龙粳37、中156含有Pi-5基因,其中吉粳53同时含有这2个基因。接菌鉴定表明Pi-b、Pi-5 2个基因的抗性在黑龙江省无效。16份外引材料及31份水稻单基因系的接菌鉴定表明,目前对黑龙江省利用价值较高的抗瘟基因有Pi-3、Pi-7(t)、Pi-9(t)、Pi-12(t)、Pi-20、Pi-ta^2、Pi-z^t、Pi-24、Pi-25、Pi-gm。本研究对东北水稻生产中抗稻瘟病品种的选择以及抗稻瘟病育种实践具有重要意义。

黑龙江省水稻品种抗稻瘟病基因Pi-5的分子鉴定

以48份黑龙江省主栽水稻品种为实验材料,利用基于水稻抗稻瘟病基因Pi-5本身设计的三对分子标记JJ113-T3、JJ80-T3、JJ81-T3筛选含有该抗稻瘟病基因的水稻品种,同时采用黑龙江省稻瘟病主要生理小种进行混合接种鉴定。结果表明,供试材料中龙粳香1号、龙交06-192、龙粳20、龙粳25、合江19、绥粳9、龙稻5和松粳3共8个品种含有Pi-5基因。实验结果明确抗稻瘟病基因Pi-5在黑龙江省主栽品种中的分布情况并评价其分子标记在黑龙江省抗病育种的应用价值,同时对于寒地水稻生产中抗稻瘟病品种的选择以及抗稻瘟病育种实践具有重要意义。

健脾化湿颗粒对实验性IBS-D大鼠结肠黏膜5-HT表达的影响

目的观察健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠结肠黏膜5-羟色胺(5-HT)表达的影响。方法 60只清洁级Wistar大鼠,分为6组,每组10只。采用番泻叶灌胃配合束缚应激造模。造模成功后,健脾化湿颗粒低、中、高剂量组给药浓度分别为1.5、2.5、4.0g/mL(生药),得舒特组给药浓度3mg/mL灌胃给药。每日1次,连续2周,另外两组为不经任何处理的正常组和造模成功的模型组。实验结束免疫组织化学观察结肠标本5-HT水平的变化。结果 IBS-D模型大鼠结肠组织5-HT的水平显著高于正常组(P<0.01);除健脾化湿低剂量组外,各治疗组大鼠结肠组织中5-HT的水平显著低于模型组(P<0.01)。其中,健脾化湿颗粒高剂量组效果明显,与得舒特组差异无统计学意义(P>0.05)。结论健脾化湿颗粒可抑制IBS-D模型大鼠结肠黏膜5-HT过高表达,明显改善IBS-D模型大鼠胃肠功能。

铍针术对神经末梢张力性疼痛模型家兔局部5-羟色胺含量的影响

目的:探讨铍针对神经末梢张力性疼痛模型家兔5-羟色胺(5-HT)的影响。方法:实验用健康3月龄雄性大耳白兔42只,按照完全随机方法分为正常组、模型组、药物组、毫针组、铍针组,制作家兔神经末梢张力性疼痛模型,各组的家兔均需要在第5、10、20、30、40、50、60 min时使用1 mL的注射器向造模部位的浅、深筋膜之间注入1 mL生理盐水进行冲洗并抽出溶液,ELISA免疫学检测方法对提取液中的5-HT进行检测。结果:铍针干预能够降低5-HT含量,随着时间延长5-HT含量逐渐减少,与模型组相比,治疗组5-HT含量在不同时间点均显著降低(P<0.01);甚至铍针组5 min时显著高于正常组(P<0.01);与药物组相比,5、10、20、30、40 min时毫针组、铍针组5-HT含量显著升高(P<0.01);与正常组相比,铍针组在40、50、60 min时5-HT含量明显降低(P<0.05);与毫针组相比,20、30、40、50、60 min时5-HT含量显著降低(P<0.01)。其余时间点组间比较无明显差异。结论:铍针可以通过减低局部软组织张力、减少了机体内5-HT的释放并促进其降解等方面发挥镇痛作用。

啤饲兼用型大麦鄂皮5号的选育

啤饲兼用型大麦鄂皮５号系浙立１子为母本，沪麦６号为父本杂交育成。其选育是根据市场需求制定的育种目标，选配亲本；采用改良系谱法进行这择，增强选择压力；利用标记性状进行目的性状的选择，以扩大积累效应；异地夏繁加代结合选择；并采取边选择、过试验、边示范、边繁殖的四结合的方式，加速了选育进程。

鄂皮5号大麦高产栽培配套技术的研究

多年大面积栽培和专项试验研究表明，鄂皮５号高产基础的主效应来自有效穗数，在争总穗数的前提下，减小穗粒数和粒重的间接负效应，是取得高产的途径。由此，总结出了中群体，争足穗，争大穗的促－控－争高产栽培配套措施。

Impact of SNP-SNP interactions of DNA repair gene ERCC5 and metabolic gene GSTP1 on gastric cancer/atrophic gastritis risk in a Chinese population

AIM To investigate the interactions of the DNA repair gene excision repair cross complementing group 5(ERCC5) and the metabolic gene glutathione S-transferase pi 1(GSTP1) and their effects on atrophic gastritis(AG) and gastric cancer(GC) risk.METHODS Seven ERCC5 single nucleotide polymorphisms(SNPs)(rs1047768, rs2094258, rs2228959, rs4150291, rs4150383, rs751402, and rs873601) and GSTP1 SNP rs1695 were detected using the Sequenom MassA RRAY platform in 450 GC patients, 634 AG cases, and 621 healthy control subjects in a Chinese population.RESULTS Two pairwise combinations(ERCC5 rs2094258 and rs873601 with GSTP1 rs1695) influenced AG risk(P_(interaction) = 0.008 and 0.043, respectively), and the ERCC5 rs2094258-GSTP1 rs1695 SNP pair demonstrated an antagonistic effect, while ERCC5 rs873601-GSTP1 rs1695 showed a synergistic effect on AG risk OR = 0.51 and 1.79, respectively). No pairwise combinations were observed in relation to GC risk. There were no cumulative effects among the pairwise interactions(ERCC5 rs2094258 and rs873601 with GSTP1 rs1695) on AG susceptibility(P_(trend) > 0.05). When the modification effect of Helicobacter pylori(H. pylori) infection was evaluated, the cumulative effect of one of the aforementioned pairwise interactions(ERCC5 rs873601-GSTP1 rs1695) was associated with an increased AG risk in the case of negative H. pylori status(P_(trend)= 0.043).CONCLUSION There is a multifarious interaction between the DNA repair gene ERCC5 SNPs(rs2094258 and rs873601) and the metabolic gene GSTP1 rs1695, which may form the basis for various inter-individual susceptibilities to AG.

创伤后应激障碍精神生物学机制研究进展

综述了创伤后应激障碍在5-羟色胺、去甲肾上腺素、下丘脑-脑垂体-肾上腺轴等精神生物学机制方面的研究进展。

GSTP1、MTHFR基因多态性与PF方案治疗食管癌疗效相关性研究

目的：了解食管癌患者谷胱甘肽S转移酶P1（glutathione S-transferase Pi-1,GSTP1）,亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因多态性分布频率,探讨GSTP1、MTHFR基因多态性与食管癌患者PF方案（顺铂联合5-氟尿嘧啶）化疗疗效相关性。方法：从168例接受PF方案化疗的食管癌病例中采外周血提取DNA,采用PCR法扩增目的基因片段,直接测序法分析GSTP1、MTHFR基因多态性,每两周期化疗后评价疗效一次,按照实体瘤的疗效评价标准进行评价。结果：168例食管癌患者PF方案化疗疗效评价（实体瘤的疗效评价标准RECIST 3.0）,CR 19例（11.3%）,PR 60例（35.7%）,SD 48例（28.6%）,PD 41例（24.4）,食管癌患者GSTP1基因野生型（AA）有效率为22.0%,杂合型（AG）＋纯合型（GG）有效率为25.0%,MTHFR C667T基因野生型（CC）有效率为14.3%,杂合型（CT）＋纯合型（TT）有效率为32.7%,MTHFR A1298C基因野生型（AA）有效率为17.3%,杂合型（AC）＋纯合型（CC）有效率为29.8%,其中GSTP1基因野生型（AA）与杂合型（AG）＋纯合型（GG）的OR=2.520,95%CI：11.237-25.191,P=0.012,MTHFR C6 6 7 T基因野生型（CC）与杂合型（CT）＋纯合型（TT）的OR=1.933,95%CI：5.987-16.354,P=0.032,MTHFR A1298C基因野生型（AA）与杂合型（AC）＋纯合型（CC）的OR=3.514,95%CI：19.018-27.332,P=0.511。结果显示食管癌患者GSTP1基因及MTHFR C667T基因多态性与PF方案化疗后疗效相关,且杂合型及纯合型疗效优于野生型。结论：GSTP1及MTHFR-C677T基因多态性与5-氟尿嘧啶的疗效具有相关性,而MTHFR-A1298C基因多态性与5-氟尿嘧啶的疗效无明显相关性,故检测GSTP1及MTHFR-C677T基因多态性可预测PF方案化疗疗效。

p15蛋白在低分化鼻咽癌中的表达

目的:探讨p15蛋白在低分化鼻咽癌(NPC)的发生发展过程中的作用。方法:用免疫组化技术检测低分化NPC组织中p15蛋白的表达。结果:p15蛋白在鼻咽部正常组织和低分化NPC中表达阳性率分别为100％,70.91％,两组间差异有显著性意义(P<0.05)。低分化NPC中p15蛋白表达阳性率与局部浸润程度、临床分期有关(P<0.05),与有无颈淋巴结转移和5年生存率无关(P>0.05)。结论:p15蛋白丢失在低分化NPC发生发展过程中有重要意义,p15蛋白表达可能与低分化NPC的预后无关。

扶阳疏肝健脾方对抑郁症患者血清5-羟色胺影响的临床研究

目的:观察扶阳疏肝健脾方治疗抑郁症的疗效,探讨其作用机制。方法:将80例抑郁症患者随机分为研究组和对照组各40例,研究组给予中药扶阳疏肝健脾方;对照组给予西药盐酸氟西汀胶囊治疗,疗程均为6周。采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)对两组患者治疗前后进行评分,并检测两组治疗前后血清5-HT的改变情况。结果:两组治疗后HAMD分值较治疗前均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组血清5-HT含量分别与治疗前比较,均有显著提高,差异有统计学意义(P<0.05),但两组治疗后组间疗效比较无统计学意义(P>0.05)。结论:扶阳疏肝健脾方对抑郁症患者有一定的疗效。

柑橘青霉菌CYP51B基因和上游调控区克隆及生物信息学分析

【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用NNPP分析软件预测转录起始位点,并利用TFSEARCH1.3软件分析转录因子结合位点。利用SWISS-MODEL在线软件对蛋白进行同源模建。【结果】克隆得到了意大利青霉菌CYP51的同源基因,命名为Pi CYP51B。获得的Pi CYP51B及上下游调控区序列总长为3 496 bp,包括上游910 bp和下游834 bp的序列。Pi CYP51B基因的开放阅读框全长1 575 bp,编码524个氨基酸。该基因含有3个分别为74、51、52 bp的内含子,分别位于247 bp与320 bp之间,519 bp与569 bp之间,1 635 bp与1 686 bp之间。Pi CYP51B 5′上游调控区序列的总长为579 bp。生物信息学分析结果显示:转录起始位点位于上游458 bp处;上游调控区不仅包含启动子的核心结构序列TATA盒(位于-25 bp处),也包含多个转录因子结合位点,如Abd-B、ADR1、AP-4、GATA-1、Cdx A、Clox和Oct-1等。在上游调控序列中嘌呤含量高,而且从+387 bp处开始存在4个连续高嘌呤含量的热激转录因子特异性结合位点(HSF);在+106 bp处开始存在3个连续的Cdx A转录因子结合位点。选用人CYP51晶体结构(PDB ID:3LD6)为模板,利用SWISS-MODEL在线软件构建了意大利青霉菌CYP51B蛋白的结构模型。【结论】克隆了意大利青霉Pi CYP51B基因,其上游含有多个热激应答转录因子特异性结合位点(HSF)表明其参与逆境应答。该基因作为意大利青霉菌CYP51的同源基因,可能与青霉菌对真菌药物的抗药性密切相关。

疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征大鼠5-羟色胺相关的结肠黏膜上皮分泌功能的影响

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠及疏肝健脾方干预后IBS-D大鼠结肠黏膜上皮分泌功能的影响。方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、疏肝健脾组,模型组及疏肝健脾组采用乙酸灌肠加束缚应激进行造模,造模成功后,正常组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃,疏肝健脾组予疏肝健脾方灌胃。采用恒温灌流装置体外测量跨上皮电流为短路电流。观察5-HT、去甲肾上腺素(NE)对各组大鼠结肠上皮短路电流的影响。结果:模型组大鼠基础电流较正常组及疏肝健脾组高,但是差异无统计学意义;5-HT引起的模型组大鼠结肠黏膜上皮产生的短路电流较正常组及疏肝健脾组大鼠降低(P<0.05);去甲肾上腺素引起的模型组大鼠结肠黏膜上皮产生的短路电流降低幅度较正常组及疏肝健脾组低。结论:5-HT引起的IBS-D大鼠结肠黏膜上皮的分泌活动较正常大鼠弱,疏肝健脾方通过改善IBS-D大鼠对5-HT的反应性达到治疗目的。

健脾清热活血类方药对溃疡性结肠炎肠黏膜功能障碍及claudin-2、claudin-5的影响

[目的]基于检测溃疡性结肠炎结肠黏膜组织形态、超微结构、上皮紧密连接,及紧密连接蛋白claduin-2、claudin-5表达的变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的可能机制。[方法]72只雄性Balb-c小鼠按体重随机分为6组,即正常组、模型组、对照组、治疗组(低、中、高剂量),每组12只。除正常组外,其余各组小鼠均采用自由饮用3%DSS 6周法制备溃疡性结肠炎模型,自第7周起分组给药,模型组予等剂量生理盐水,对照组予艾迪莎,治疗组予不同剂量健脾清热活血方,连续给药4周,第11周末处死全部小鼠。应用光镜、透射电镜及免疫组织化学观察结肠黏膜组织形态、超微结构及黏蛋白变化;应用荧光定量PCR技术检测紧密连接蛋白claudin-2、claduin-5表达变化。[结果]模型组光镜下见结肠黏膜不同程度缺损、溃疡形成,表面可见坏死组织,以及隐窝脓肿形成;电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,线粒体肿胀,结构不清或呈空泡变,部分可见核固缩,并见凋亡小体;结肠黏蛋白分泌下降。治疗组光镜下见结肠黏膜充血肿胀、少量炎性细胞浸润,可见隐窝脓肿,未见明显溃疡;电镜下见肠上皮细胞表面绒毛排列尚整齐,可见线粒体肿胀,核固缩及凋亡小体;结肠黏蛋白分泌增加,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05)。模型组claudin-2表达呈上升趋势、claudin-5表达呈下降趋势;治疗组claudin-2表达下降及claudin-5表达上升,经比较有统计学意义(P<0.05)。[结论]健脾清热活血方药可能通过降低claudin-2表达、上升claudin-5表达,促进黏膜修复,达到缓解溃疡性结肠炎的效用。

溶酶体与过氧化物酶体形成膜接触介导胆固醇转运

胆固醇是真核细胞中含量非常丰富的一类脂质小分子,其主要生物学功能是掺入到磷脂双分子层中,调节膜的性质。胆固醇在细胞内不同膜上的分布极不均匀而且高度动态运输,这对维持细胞的正常生命活动至关重要。然而,细胞内胆固醇运输的机制一直不清楚。针对这一胆固醇代谢领域的重要问题,同时也是一个基本的细胞生物学问题,通过巧妙设计、全基因组筛选,鉴定出341个参与细胞内胆固醇转运的候选基因,其中,过氧化物酶体相关基因被显著富集。进而发现溶酶体通过和过氧化物酶体相互接触,将胆固醇转移给后者。而介导该接触的分子分别是溶酶体上的Synaptotagmin VII(Syt7)和过氧化物酶体膜上的PI(4,5)P2磷脂。将这种新发现的溶酶体–过氧化物酶体膜接触命名为LPMC(lysosome-peroxisome membrane contacts)。过氧化物酶体功能缺失会导致一大类相关疾病—过氧化物酶体紊乱疾病,表现为发育和神经系统功能障碍,目前还没有有效的治疗手段。该工作第一次揭示在这些病人和小鼠模型的细胞中有大量胆固醇堆积,且该现象的出现大大早于神经症状,提示胆固醇堆积是过氧化物酶体紊乱疾病的发病原因之一。这项研究工作的意义在于:(1)发现了细胞内胆固醇运输的新途径;(2)揭示了过氧化物酶体这一细胞器的新功能;(3)证明胆固醇运输异常是导致过氧化物酶体紊乱疾病的病因之一,为治疗该类疾病提供了全新的思路。