慢性胃炎脾气虚证与脾胃湿热证的差异表达基因比较

目的:比较慢性胃炎脾气虚证与脾胃湿热证患者差异表达基因。方法:分别提取慢性胃炎脾气虚和脾胃湿热患者胃黏膜组织RNA各4例,逆转录荧光探针标记后杂交制作BiostarH-140 s基因芯片。采用荧光值ratio、生物信息学、t检验等方法分析结果,实时荧光定量PCR检测部分相关基因。结果:获得差异表达基因245条,主要为营养物质消化吸收运输、物质能量合成代谢、细胞周期增殖分化、免疫反应等相关基因;有显著意义的差异表达基因77条;实时定量PCR检测10条基因,6条与芯片结果一致。结论:慢性胃炎脾气虚和脾胃湿热2个证型基因表达存在明显差异,提示中医的临床辨证分型与基因差异表达有一定关系。

不同证型慢性胃炎患者外周血淋巴细胞HSP70、NF-~κB的表达研究

目的探讨脾胃湿热、脾气虚证外周血淋巴细胞热休克蛋白70(HSP70)和核因子-κB(NF-κB)的表达及其与Hp感染的关系。方法选择86例2008年6月—2009年2月就诊于广州中医药大学第一附属医院脾胃科门诊的慢性胃炎患者。其中脾胃湿热证67例(湿重于热30例,湿热并重27例,热重于湿10例)、脾气虚证19例,另选择广州中医药大学健康教职工和学生志愿者12名作为对照组。采集各组外周血,采用安速幽门螺旋杆菌(Hp)血清快速法检测Hp感染;采用流式细胞仪检测HSP70、NF-κB表达。结果脾胃湿热与脾气虚证Hp感染率分别为37.31%和36.84%(P>0.05)。与对照组比较,脾胃湿热证热重于湿组淋巴细胞HSP70表达降低,脾胃湿热证热重于湿组及脾气虚证组NF-κB表达升高(P<0.05)。脾胃湿热、脾气虚证Hp阳性组NF-κB表达均高于对照组(P<0.05);脾气虚证Hp阳性组HSP70表达高于同证型Hp阴性组(P<0.05)。此外,HSP70、NF-κB表达与Hp感染相关系数分别为-0.023和0.027(P>0.05)。结论慢性胃炎患者外周血淋巴细胞NF-κB在脾胃湿热证热重于湿、脾气虚证表达的升高可能反映了中医理论中"内邪"的致病作用;HSP70在脾气虚证HP阳性表达的升高,及在脾胃湿热证热重于湿表达的降低可能反映了"正气抗邪"、"邪盛正虚"的作用;Hp可能并非引起脾胃湿热证、脾气虚证发生的唯一"外邪"因素。

慢性浅表性胃炎脾虚与脾胃湿热证患者物质能量代谢基因差异表达研究

目的分析慢性浅表性胃炎脾虚证与脾胃湿热证患者体内脂类、蛋白质、核酸、糖类、微量元素和能量代谢情况,从物质能量代谢的角度探讨脾虚证病理发生机制。方法选择2004年6月—2005年3月就诊于广州中医药大学第一附属医院和广东省中医院慢性浅表性胃炎患者8例,其中脾虚证和脾胃湿热证患者各4例,取两组胃黏膜进行DNA芯片实验,利用BRBArrayTools和IPA软件对DNA芯片双通道数据进行数据挖掘和生物信息学分析。结果获得与物质能量代谢相关且表达倍数>2的显著差异表达基因56个,其中上调基因11个,下调基因45个。其中与脂类代谢相关的基因有CRLS1、LRP11、FUT9、GPCPD1、PIGL、SULT1A4、B3GNT1、ST8SIA4和ACADVL,主要涉及脂肪酸、胆固醇、磷脂和糖脂的代谢;与蛋白质代谢相关的基因有ASR-GL1、AARSD1、EBNA1BP2、PUM2、MRPL52、C120RF65、PSMB8、PSME2、UBA7、RNF11、FBXO44、ZFYVE26、CHMP2A、SSR4、SNX4、RAB3B、RABL2A、GOLGA2、KDELR1、PHPT1、ACPP、PTPRF、CRKL、HDAC7、ADPRHL2、B3GNT1、ST8SIA4、DDOST和FUT9,主要涉及到蛋白质的生物合成、蛋白质泛素化、靶向输送和翻译后修饰过程;与核酸代谢相关的基因有DFFB、FLJ35220、TOP2A、SF3A3、CREB3、CRTC2、NR1D2、MED6、GTF2IRD1、C1ORF83、ZNF773和ZMYND11,主要涉及DNA复制与修复,转录调节等;与糖类代谢相关的基因有AGL、B3GNT1、FUT9、ST8SIA4、SULT1A4、DDOST和PIGL,主要涉及糖原的分解和糖复合物的合成;与微量元素代谢相关的基因有COMMD1、SLC39A6、FTL、CHRFAM7A、SCGN和S100A6,主要涉及铜离子、锌离子、铁离子和钙离子代谢;与能量代谢相关的基因有AK3和COX7B,涉及线粒体结构和氧化磷酸化过程。结论脾虚证患者体内脂类、蛋白质、核酸、糖类、微量元素和能量代谢水平明显降低,这可能是导致脾虚证疾病发生的重要机制。

幽门螺杆菌相关胃病脾胃湿热证患者热休克蛋白70和白细胞介素-8的表达

目的通过检测幽门螺杆菌(Hp)相关胃病脾胃湿热证患者白细胞介素-8(IL-8)及热休克蛋白70(HSP70)的表达,探讨Hp相关胃病脾胃湿热证发生的病理机制。方法选择脾胃湿热证和脾气虚证的慢性胃炎、消化性溃疡患者75例,招募健康志愿者10例作为正常对照。采用免疫组织化学标记法、荧光定量PCR法检测各组胃黏膜HSP70、IL-8蛋白及m RNA的表达。结果 HSP70、IL-8蛋白和m RNA表达水平呈现脾胃湿热证患者>脾气虚证患者>正常对照者的趋势。Hp感染者HSP70、IL-8蛋白和m RNA表达水平较非感染者有偏高趋势。结论 HSP70、IL-8的表达与证型及Hp感染可能存在一定的相关性,HSP70表达水平与Hp感染的关系可能部分体现脾胃湿热证的"正邪交争"状态,IL-8的高表达可能为脾胃湿热证Hp作用于胃黏膜的机制之一。

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠热休克蛋白70和水通道蛋白4的影响

目的观察灭幽汤对幽门螺杆菌(Hp)相关性胃炎脾胃湿热小鼠热休克蛋白70(HSP70)及水通道蛋白4(AQP4)的影响,探讨其作用机制。方法将小鼠随机分为灭幽汤高、低剂量组(灭高组、灭低组)和胃三联组、模型组、对照组,采用复合因素建立BALB/c小鼠Hp相关性胃炎脾胃湿热证模型,造模成功后连续给药14 d,灭高组、灭低组、胃三联组给药剂量分别为12.4、6.2 g/kg和0.279 8 mg/kg;采用Western Blot检测HSP70、免疫组化法检测AQP4的表达情况。结果与对照组比较,模型组HSP70、AQP4蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,灭高组、灭低组、胃三联组小鼠HSP70蛋白表达显著增加、AQP4蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论灭幽汤可能通过上调HSP70、下调AQP4蛋白表达而发挥治疗Hp相关性胃炎脾胃湿热证的作用。

清肝利湿汤治疗肝胆湿热型慢性乙肝的疗效观察

目的探讨清肝利湿汤治疗肝胆湿热型慢性乙肝的疗效及机理。方法将肝胆湿热型慢性乙肝患者60例随机分为2组,分别予中药清肝利湿汤和西药拉米夫定治疗,用药1个月后观察临床疗效。结果中药清肝利湿汤治疗肝胆湿热型慢性乙肝其临床疗效和西药拉米夫定无显著差异(P>0.05),在证候改善方面优于西药组(P<0.05)。结论中药清肝利湿汤治疗肝胆湿热型慢性乙肝有效,值得临床推广。

慢性浅表性胃炎脾胃湿热证胃黏膜G、D细胞变化及胃泌素、生长抑素的表达

目的:探讨慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者胃黏膜G、D细胞的变化及胃泌素和生长抑素表达的意义.方法:2004-05/2005-03北京市东直门医院消化科门诊或住院的慢性浅表性胃炎患者70例,其中脾胃湿热证38例,脾胃虚弱证32例.用免疫组化的方法检测患者胃黏膜中G、D细胞的数目和胃泌素和生长抑素表达的量值.结果:与脾虚组比较,湿热组胃黏膜G细胞数目,D细胞数目,G、D细胞比值,G细胞总面积即Gas表达量,D细胞总面积即SS的表达量有显著性差异(130.54±35.62vs111.13±23.79,54.98±19.63vs67.01±21.56,2.74±1.36vs1.87±1.36,34.72±17.24vs27.72±14.23,13.90±7.22vs19.23±7.96,P<0.05或0.01).结论:G细胞增多,胃黏膜Gas增多,D细胞减少,胃黏膜SS减少,可能是湿热证的病理基础;而D细胞增多,胃黏膜SS分泌亢进,G细胞减少,胃黏膜Gas水平低下,可能是脾虚证的病理基础.

胃康舒对实验性慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜前列腺素E_2含量的影响

目的：观察胃康舒对实验性慢性胃炎脾胃湿热证大鼠胃黏膜前列腺素E2（PGE2）含量的影响。方法：实验分设正常对照组、模型组、胃复春组、胃康舒低剂量组、胃康舒高剂量组。除正常对照组外，其余各组均采用脱氧胆酸钠结合湿热环境、饮食不节等综合因素诱发“病证结合”大鼠慢性胃炎脾胃湿热证模型。灌胃法给药，实验结束后采用放射免疫法分别检测各组胃黏膜PGE2的含量。结果：模型组大鼠胃黏膜PGE2含量低于正常组（P〈0．01），各给药组均高于模型组（P〈0．05～0．01），尤以胃康舒高剂量组更显著，但各给药组间差异无显著性（P〉0．05）。结论：胃康舒可促进胃黏膜PGE，合成，对胃黏膜细胞具有保护作用。

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证模型小鼠TLR4/NF-κB65信号通路的影响

[目的]观察灭幽汤对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)相关性胃炎脾胃湿热证模型小鼠TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、TNF-α、IL-8表达的影响,探讨灭幽汤治疗Hp相关性胃炎脾胃湿热证的机制。[方法]将70只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、高浓度灭幽汤组(高灭组)、低浓度灭幽汤组(低灭组)、胃三联组(替硝唑+克拉霉素+枸橼酸铋钾颗粒),每组14只;采用复合因素(肥甘食物+湿热环境+幽门螺杆菌)建立BALB/c小鼠Hp相关性胃炎脾胃湿热证模型;造模成功后连续给药14d,而后分别采用免疫组化检测TLR4、NF-κB65蛋白,qPCR检测TLR4mRNA、NF-κB65mRNA的表达情况,采用ELISA检测血清TNF-α、IL-8的表达。[结果]模型组TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、血清TNF-α、IL-8含量表达均高于对照组,差异有统计学意义;通过药物治疗后,低灭组、高灭组、胃三联组TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、血清TNF-α、IL-8含量表达均低于模型组,差异有统计学意义;高灭组TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、血清TNF-α、IL-8含量表达虽低于胃三联组,但差异无统计学意义。[结论]灭幽汤可能通过干预TLR4/NF-κB65信号通路,抑制TLR4、NF-κB65及下游因子的表达以达到治疗Hp相关性胃炎脾胃湿热证的目的。

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型环氧合酶-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型的建立。方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎湿热证组、清浊安中汤高、低剂量防治组,不同组用不同药物灌胃,连续20 d。采用"病证结合"方法,以2%水杨酸钠+高脂高糖+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型,并用清浊安中汤对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、免疫组化(SABC)法检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,COX-2蛋白表达为0.289±0.036;脾胃湿热证大鼠模型表现出的症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,COX-2蛋白表达大于脾虚组与正常组(P<0.05),COX-2蛋白表达与炎症程度呈正相关,相关系数为0.662,P<0.01,清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用。结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节COX-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一。

清热退黄口服液治疗黄疸型病毒性肝炎肝胆湿热证临床研究

目的:观察清热退黄口服液治疗黄疸型病毒性肝炎肝胆湿热证的临床疗效。方法:将113例慢性病毒性肝炎患者随机分为治疗组55例和对照组58例,对照组采用还原型谷胱甘肽和复方甘草酸苷治疗;治疗组在对照组治疗基础上给予清热退黄口服液治疗。共治疗四周。结果:两组患者临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素比较,治疗组均显著下降至正常范围,差异有统计学意义(P<0.05);清热退黄口服液对胆红素代谢的主要调节因子血红素加氧酶-1、胆绿素还原酶有一定的改善作用,治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:清热退黄口服液可快速减轻肝脏炎症,修复受损的肝细胞,改善肝功能,具有显著疗效。

慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与热休克蛋白70表达的关系

[目的]探讨慢性浅表性胃炎(CSG)脾胃湿热证与热休克蛋白70(HSP70)表达的关系。[方法]CSG患者38例,其中脾胃湿热证22例、脾气虚证16例,另10例正常人为对照。胃镜下取胃窦黏膜,采用免疫组织化学检测HSP70蛋白表达情况。[结果]脾胃湿热证组和脾虚证组HSP70蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);脾胃湿热证组各亚型中,HSP70表达水平呈热重于湿>湿热并重>湿重于热的趋势。[结论]HSP70属于人体"阳气"范畴,HSP70以热证表达最为明显,具有证的特异性;"热"与"湿"在脾胃湿热证中的比分会影响HSP70在脾胃湿热证型中的表达:热邪提高HSP70表达,湿邪抑制HSP70表达。

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型建立。方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎脾胃湿热证组、清浊安中汤高、低剂量组,以2%水杨酸钠、番泻叶100%水煎液10 mL.kg-1.d-1灌胃,连续20 d,复制胃炎脾虚证。采用"病证结合"方法,以2%水杨酸钠(10 mL.kg-1.d-1灌胃)+高脂(20%蜂蜜水)高糖(10g.kg-1.d-1)+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型并用清浊安中汤(2,1 g.kg-1.d-1)对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、TUNEL(原位末端标记法)检测细胞凋亡、SABC(免疫组化)法检测Bcl-2蛋白表达。结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,细胞凋亡指数0.236±0.021,Bcl-2蛋白表达0.247±0.041;脾胃湿热证大鼠模型表现出症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,细胞凋亡较脾虚组轻而Bcl-2蛋白表达大于脾虚组(P<0.05),清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用。结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一。

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠NF-κB65、HSP70的影响

[目的]研究灭幽汤对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)相关性胃炎脾胃湿热证小鼠核因子-κB65(NF-κB65)及热休克蛋白70(HSP70)的相关性,探讨Hp相关性胃炎脾胃湿热证的发病机制及灭幽汤治疗慢性胃炎的作用机制。[方法]将70只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、高浓度灭幽汤组(高灭组)、低浓度灭幽汤组(低灭组)、胃三联组(替硝唑+克拉霉素+枸橼酸铋钾颗粒),每组14只;采用复合因素(肥甘食物+湿热环境+幽门螺杆菌)建立BALB/c小鼠Hp相关性胃炎脾胃湿热证模型;造模成功并连续给药14d后,分别采用免疫组织化学、Western Blot检测NF-κB65蛋白、HSP70蛋白,qRT-PCR检测NF-κB65mRNA、HSP70mRNA的表达情况。[结果]HSP70蛋白及其mRNA的表达:与对照组比较,模型组HSP70蛋白及其mRNA表达均显著增加(P<0.01);与模型组比较,高灭组、低灭组、胃三联组小鼠HSP70蛋白及其mRNA表达均增加(P<0.01);高灭组HSP70及其mRNA表达高于低灭组(P<0.05);胃三联组、高灭组HSP70蛋白及其mRNA表达均增加,但2组间比较差异无统计学意义。NF-κB65蛋白及其mRNA的表达:与对照组比较,模型组NF-κB65蛋白及其mRNA表达增加(P<0.01);与模型组比较,高灭组、胃三联组小鼠NF-κB65蛋白及其mRNA表达均明显降低(P<0.01);高灭组NF-κB65蛋白及其mRNA表达低于低灭组(P<0.05);高灭组、胃三联组NF-κB65蛋白及其mRNA均降低,但2组间比较差异无统计学意义。[结论]灭幽汤可能通过上调HSP70、下调NF-κB65表达而发挥治疗Hp相关性胃炎脾胃湿热证的作用。

连朴清胃胶囊对脾胃湿热证慢性胃炎模型大鼠血清HSP-70及SIgA表达的影响

[目的]观察连朴清胃胶囊对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠血清的热休克蛋白70(HSP-70)及分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影响,以探讨连朴清胃胶囊治疗慢性胃炎脾胃湿热证的治疗机理。[方法]70只SD大鼠,除正常组10只外,其余60只以2%水杨酸钠10ml/(kg·d)灌胃,同时饲以高脂高糖高热饮食(20%蜂蜜水自由饮用,隔日灌服油脂10g·kg-1·d-1,并与油脂隔日灌服白酒2ml/200g)并放在湿热环境中,连续20d,制作慢性胃炎脾胃湿热证模型,将造模成功的60只大鼠按照随机数字表法分为模型组、连朴清胃胶囊高、中、低组、三九胃泰组、雷尼替丁组,灌胃给药10d,末次给药后禁食16h后,心脏取血,运用ELISA法检测大鼠血清HSP-70及SIgA含量的变化。[结果]模型组HSP-70、SIgA水平高于正常组(P<0.05),连朴清胃胶囊高组、中组、低组、三九胃泰组、雷尼替丁组大鼠血清HSP-70、SIgA水平均高于模型组(P<0.05),且连朴清胃胶囊高、中、低组、三九胃泰组、雷尼替丁组大鼠一般情况较模型组明显改善,其中连朴清胃胶囊高、中组HSP-70、SIgA高表达及一般情况改善最为明显。[结论]连朴清胃胶囊可能通过诱导HSP-70及SIgA的高表达从而发挥对脾胃湿热型慢性胃炎的改善和治疗作用。