基于PI3KAkt-Bcl-2通路探讨TSG-6对人瘢痕疙瘩凋亡机制的影响

目的基于PI3KAkt-Bcl-2通路探讨肿瘤坏死因子-α刺激基因(TSG)-6对人瘢痕疙瘩凋亡机制的影响。方法以本院2017年8月—2018年8月通过手术治疗的56例瘢痕疙瘩患者为对象,收集其手术标本,对TSG-6过度表达细胞株(过度表达组)、TSG-6干扰细胞株(干扰组)、TSG-6过度表达对照细胞株(过度表达对照组)、TSG-6干扰对照细胞株(干扰对照组)进行构建,测定以上4组及瘢痕疙瘩成纤维细胞中PI3K、Akt、Bcl-2表达情况。结果过度表达组细胞凋亡率是36.67%,分别较过度表达干扰组的16.67%、干扰组的13.33%、干扰对照组的6.67%、瘢痕疙瘩成纤维细胞的10.00%高,差异有统计学意义(P<0.05);过度表达组细胞增殖速度较瘢痕疙瘩成纤维细胞慢,干扰组细胞增殖效应显著较其余组别高,差异有统计学意义(P<0.05),过度表达对照组、干扰对照组、瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡对比则差异无统计学意义(P>0.05);过度表达组PI3K、Akt、Bcl-2基因mRNA与蛋白表达均显著较干扰组、过度表达对照组、干扰对照组、瘢痕疙瘩成纤维细胞低,干扰组PI3K、Akt、Bcl-2基因mRNA与蛋白表达均较过度表达组、过度表达对照组、干扰对照组、瘢痕疙瘩成纤维细胞高,差异有统计学意义(P<0.05),过度表达对照组、干扰对照组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对比则差异无统计学意义(P>0.05)。结论TSG-6过度表达可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中PI3K、Akt、Bcl-2表达,表明TSG-6可对PI3KAkt-Bcl-2通路产生负向调控作用,促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,进而达到抑制瘢痕疙瘩增生的效果。

芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路影响的研究

目的:观察芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路的影响。方法:分别运用MTT法检测含药血清对A549细胞增殖的影响;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测含药血清对A549细胞凋亡的影响;Western-blot法检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响;RT-PCR法检测含药血清对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为24.26%,16.44%和10.89%,含药血清浓度越大,对细胞的抑制作用越显著。与空白组相比,芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组细胞凋亡率显著升高,且含药血清浓度越大,对细胞凋亡的作用越显著。芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因相对表达量与空白组相比,表达量降低,且含药血清浓度越大,对A549细胞凋亡相关蛋白和基因表达的影响越显著。结论:芪杉胶囊通过影响A549细胞凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因表达,从而抑制细胞增值、促进细胞凋亡。

miR-155靶向PTEN-PI3KAKT通路促进鼻咽癌细胞增殖并抑制其凋亡的实验研究

目的:研究miR-155靶向PTEN-PI3KAKT通路促进鼻咽癌细胞增殖并抑制其凋亡的作用机制。方法:选取105只成年健康SD雄性大鼠作为研究对象,将其以随机抽签法等分成观察组、对照组、试验组,每组35只。所有大鼠通过诱癌剂二甲硝基哌嗪腋部皮下注射以及促癌剂佛波醇酯皮下注射进行鼻咽癌大鼠模型的建立。观察组大鼠予以miR-155抑制剂干预,试验组予以PI3K抑制剂干预,对照组不予以任何干预。以实时荧光定量PCR法检测miR-155相对表达量,采用免疫组化法检测PTEN、PI3K、P-AKT表达情况,通过Western blot法检测Bcl-2、Bax、Ezrin蛋白表达水平。比较三组大鼠上述相关指标水平,并作相关性分析。结果:试验组、观察组、对照组大鼠的miR-155相对表达量分别为(34.88±1.32)、(29.72±1.23)、(35.01±1.34),观察组显著低于试验组和对照组,差异明显(F=23.105,P=0.000)。试验组、观察组、对照组大鼠PTEN表达率逐渐升高,而PI3K、P-AKT表达率逐渐降低(均P<0.05)。经Pearson相关性分析可得:鼻咽癌大鼠miR-155相对表达量与PTEN表达率呈正相关关系,而与PI3K、P-AKT表达率呈负相关关系(均P<0.05)。试验组、观察组、对照组Bcl-2、Ezrin蛋白表达水平呈逐渐升高趋势,而Bax蛋白表达水平呈逐渐减低趋势,且经单因素方差分析发现:各组间对比差异显著(均P<0.05)。结论:miR-155可能是通过靶向作用于PTEN-PI3KAKT信号通路,继而发挥促进鼻咽癌细胞增殖以及抑制鼻咽癌细胞凋亡的作用。临床工作中可能将其作为鼻咽癌治疗的新靶点。

银杏内酯B对体外培养神经干细胞内HIF-1α及PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨银杏内酯B(GKB)对体外培养神经干细胞(NSCs)内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt信号通路表达的影响。方法在建立谷氨酸对神经干细胞损伤的模型基础上,给予银杏内酯B、PI3K/Akt特异性抑制剂wortmannin进行干预,将实验分为两大组:即正常细胞组、谷氨酸损伤组,各组下又分为4个小组:(1)GKB组;(2)对照组;(3)wortmannin+GKB组;(4)wortmannin组。采用Western blot印迹来检测各组NSCs中HIF-1α、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平的表达。结果无论正常细胞组还是谷氨酸损伤细胞组,NSCs经GKB处理后HIF-1α、p-Akt表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);经wortmannin处理后HIF-1α、p-Akt蛋白表达受抑制,较对照组明显减弱(P<0.05);wortmannin+GKB组和wortmannin组比较,HIF-1α、p-Akt表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCs经谷氨酸处理后,HIF-1α、p-Akt表达较未受损的NSCs表达增强(P<0.05)。结论银杏内酯B是神经干细胞保护作用机制之一,可能与激活PI3K/Akt信号通路、进一步上调HIF-1α表达有关。

淫羊藿素通过PI3K/AKT信号通路抑制非小细胞肺癌H460细胞增殖

目的:探讨淫羊藿素(icaritin)通过PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌H460细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色实验检测,不同浓度(0、5、10、20、40、80μmol/L)淫羊藿素处理H460细胞24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞凋亡的影响,Western blot实验检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞中PI3K、AKT、p-AKT、Cleaved-Caspase-9蛋白质表达水平的影响。结果:淫羊藿素可抑制非小细胞肺癌H460细胞的增殖,并表现为剂量和时间依赖性(P<0.05)。0、5、10、20μmol/L淫羊藿素处理H460细胞24 h后,H460细胞凋亡率分别为(4.90±1.20)%、(13.5±2.32)%、(16.47±1.90)%和(27.43±3.15)%,P<0.05。淫羊藿素可下调PI3K、AKT的表达水平,降低AKT的磷酸化(p-AKT)水平,上调Cleaved-Caspase-9表达水平(P<0.05)。结论:淫羊藿素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制H460细胞增殖。

金属镉促进甲状腺未分化癌FRO细胞增殖的作用及机制

目的探讨金属镉对甲状腺未分化癌FRO细胞增殖的影响及其作用机制。方法Western blot法检测FRO、MCF-7和MAD-MB-231细胞中G蛋白偶联受体1(G protein-coupled estrogen receptor,GPER1)表达水平。不同浓度(0、0.25、0.50、0.75、1.00 mmol/L)镉(Cd Cl2)处理FRO、MCF-7及MAD-MB-231细胞48 h后,MTT法检测细胞增殖率。0.5 mmol/L镉分别处理FRO细胞0、5、10、15、30 min,Western blot法检测ERK1/2和Akt的磷酸化水平。GPER1抑制剂G15处理FRO细胞后,设计合成针对GPER1的小干扰RNA(GPER-siRNA)并转染FRO细胞,采用Western blot再次检测ERK1/2和Akt磷酸化水平。分别用GPER1抑制剂G15、ERK1/2抑制剂(PD98059)和PI3K-Akt抑制剂(LY294002)、GPER-siRNA处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率。结果 GPER1在MAD-MB-231细胞中表达水平明显低于MCF-7、FRO细胞。不同浓度Cd Cl2处理FRO、MCF-7及MAD-MB-231细胞48 h后,低浓度Cd Cl2促进FRO、MCF-7细胞增殖,对MAD-MB-231细胞增殖无显著影响;高浓度Cd Cl2对细胞均具有抑制作用。0.5 mmol/L Cd Cl2处理FRO细胞不同时间后,ERK1/2与Akt的磷酸化水平在15 min达最大值。GPER1抑制剂G15处理FRO细胞,ERK1/2与Akt的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。GPER1的小干扰RNA干扰后,ERK1/2与Akt的磷酸化水平明显降低(P<0.05)。G15、PD、LY和GPER-siRNA处理FRO细胞,细胞增殖率均显著下降。结论金属镉通过GPER1-ERK/Akt信号通路促进FRO细胞的增殖。

消瘀泄浊饮对急性肾损伤小鼠自噬水平的影响

目的:探讨消瘀泄浊饮对急性肾损伤(AKI)小鼠肾组织自噬水平的影响。方法:30只清洁级C57BL/6小鼠按随机数字表法分为5组:假手术组,模型组,消瘀泄浊饮低、中、高剂量组,每组6只,采用肾脏缺血再灌注法构建AKI模型。药物干预14天后,测定小鼠体重、肾重并计算其肾脏指数,测定小鼠血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、尿素(UREA)、尿酸(UA)、总胆固醇(CHO)及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合成酶(NOS)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)的含量。HE观察肾组织病理变化,PAS观察肾间质基质沉积情况,免疫组化和Western Blot检测肾组织中相关蛋白表达情况。结果:与假手术组相比,模型组小鼠肾脏指数,血清中CRE、BUN、UREA、UA、CHO及肾组织NOS和MDA的含量均显著上升(P<0.01),SOD、GSH-PX和CAT的含量显著性降低(P<0.01)。与模型组相比,用药后肾组织中SOD、GSH-PX和CAT的含量显著性上升(P<0.05或P<0.01),NOS和MDA的含量显著性降低(P<0.05或P<0.01)。病理染色结果显示,给药组可改善肾小管扩张情况,减少炎性细胞浸润。Western Blot检测显示消瘀泄浊饮可上调LC3Ⅱ/Ⅰ、BECLIN1的蛋白表达,下调P62、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-MTOR/MTOR的蛋白表达。结论:消瘀泄浊饮能够改善AKI小鼠肾损伤情况,其可能是通过调节PI3KAKT/MTOR通路来改善自噬作用实现的。

星形孢菌素通过PI3K/Akt信号途径影响人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(STS)对人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的影响,并初步探讨其信号机制。方法培养人宫颈癌细胞Hela细胞株,建立STS组与空白对照组。采用MTT法观察各组细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,以Real-time PCR与Western Blot检测细胞PKCα、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)在mRNA水平与蛋白水平表达量以及对PI3K磷酸化的作用。结果 MTT实验中,0.5μmol/L STS组24 h后吸光度A值显著低于空白对照组,而增殖抑制率显著高于空白对照组(P<0.05);Transwell实验STS组穿越细胞数少于空白对照组[(77.3±9.4)个vs.(127.3±6.8)个],差异有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR结果显示STS组PKCα、PI3K、Akt mRNA表达量分别为空白对照组的43.4%、65.8%、55.6%,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blot检测STS组PKCα、PI3K、Akt、P-PI3K蛋白表达量为空白对照组的34.7%、38.8%、80.6%,75.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 STS可以有效抑制人宫颈癌细胞Hela的增殖与侵袭能力,其机制可能与降低PKCα的表达后抑制了下游PI3K/Akt信号的激活有关。

转录组测序揭示不同生长速度番鸭胸肌组织的基因表达差异

【目的】利用转录组测序技术分析不同生长速度番鸭的基因表达差异,挖掘影响番鸭生长性能的基因与信号通路,为阐明生长性能差异的遗传机制提供理论基础。【方法】选取不同生长速度两尾样番鸭的胸肌组织进行转录组测序,采用无参考基因组的分析手段对测序结果进行分析,获得差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)。利用Blast2 GO软件对DEGs进行功能富集分析,利用KAAS网站进行DEGs的通路富集分析。【结果】转录组测序分析结果显示,快速生长型番鸭与缓慢生长型番鸭相比共有186个显著DEGs,其中49个表达量上调,137个表达量下调。这些DEGs主要富集在磷脂酰肌醇三激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路。【结论】PI3K-AKT、MAPK、AMPK这3条信号通路是控制番鸭机体生长发育的重要调节信号通路。

Toll样受体4通过Akt/FoxO3a/Bim信号通路参与海马神经元凋亡

为了探讨海马神经元中是否有Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)介导的Akt/FoxO3a/Bim信号通路,及该通路在海马神经元凋亡中的作用和机制,本实验运用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用于原代培养的大鼠海马神经元,利用不同的工具药,以减弱或加强TLR4/Akt/FoxO3a/Bim通路的作用。应用CCK-8法检测细胞活力,Western blot法检测神经元p-Akt(Ser473)、Akt、p-FoxO3a(Thr32)、FoxO3a、Bim、活化的Caspase-3蛋白的表达变化,real-time PCR法检测海马神经元Bim的mRNA表达变化,免疫荧光法观察FoxO3a核易位情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示:LPS作用于海马神经元不同时间后,各组细胞活力均下降(P<0.05),且具有一定的时间依赖性;LPS作用后p-Akt(Ser473)、p-FoxO3a(Thr32)表达减少,FoxO3a易位进入胞核,而促凋亡蛋白Bim及活化的Caspase-3表达增加,且海马神经元的凋亡率也增加(P<0.05);PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后p-Akt(Ser473)、p-FoxO3a(Thr32)表达较LPS组降低,而促凋亡蛋白Bim及活化的Caspase-3表达升高,细胞凋亡率也明显升高(P<0.05);TLR4抗体预处理后p-Akt(Ser473)、p-FoxO3a(Thr32)较LPS组增多,FoxO3a易位进入胞核的活动减弱,而促凋亡蛋白Bim、活化的Caspase-3及细胞的凋亡率均减少(P<0.05)。以上结果表明,海马神经元中有TLR4介导的Akt/FoxO3a/Bim通路;神经元可通过该通路引起自身的凋亡。

种植牙早期感染危险因素及其炎症因子水平

目的 探究早期感染对种植牙周围骨丧失、磷脂酰肌醇(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路及相关炎症因子水平影响。方法 选择2018年3月-2021年3月于海口市第三人民医院进行植牙手术患者为研究对象,植牙术后1周牙周感染患者54例为感染组,未出现牙周感染患者76例为非感染组,比较两组患者植牙术后1周种植牙周围骨丧失情况和PI3K/AKT信号通路及相关炎症因子水平变化。单因素及多因素回归分析种植牙术后早期感染的影响因素。结果 两组患者种植牙周围骨丧失发生率(7.41%vs 3.95%),比较差异无统计学意义(Z=0.218,P=0.640)。感染组患者PI3K mRNA、AKT mRNA、NF-kB mRNA、IL-6、TGF-β1水平均高于非感染组(P<0.05),NF-kB mRNA、IL-6及吸烟史是种植牙术后早期感染的危险因素(P<0.05)。结论 早期感染不会导致种植牙周围骨丧失发生率升高,但是会诱使PI3K/AKT信号通路激活,上调炎症因子水平,NF-kB mRNA、IL-6及吸烟史是种植牙术后早期感染的危险因素。

趋化素样因子超家族成员5对前列腺癌侵袭行为的影响

目的探讨趋化素样因子超家族成员5（CMTM5）对前列腺癌细胞的作用及机制。方法利用划痕实验观察CMTM5对前列腺癌、DU145细胞迁移的影响；蛋白质印迹法检测P13K—AKT信号通路相关蛋白的表达；建立18只裸鼠皮下前列腺癌移植瘤模型，实验组肿瘤局部注射CMTM5腺病毒，检测CMTM5过表达对裸鼠前列腺肿瘤生长的影响，应用免疫组织化学方法检测裸鼠肿瘤组织中Ki-67的表达。结果过表达CMTM5抑制前列腺癌DU145细胞迁移，减少了P13K—AKT信号通路中的关键分子pAKT、NF．KB等蛋白的表达。裸鼠体内实验结果显示，CMTM5组肿瘤体积及质量分别为（573．39±175．24）mm’及（0．55±0．11）g，对照组分另Ij为（1482．50±327．86）mm。及（1．31±0．29）g，2组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。CMTM5组肿瘤组织Ki-67表达明显低于对照组。结论过表达CMTM5抑制前列腺肿瘤的增殖及迁移能力，其机制与P13K—AKT信号通路有关。

芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响

目的观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响。方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血。分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(Western blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响。结果芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20%(P<0.01),28.52%(P<0.01)和51.25%(P<0.01)。芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、m TOR及PI3K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P<0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响最显著(P<0.01)。结论芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、m TOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡。

基于RNA-seq研究鹅掌草三萜皂苷抗肝癌作用初步机制

目的通过RNA-seq分析鹅掌草三萜皂苷对H22肝癌细胞构建的裸鼠皮下移植瘤转录组的影响,初步阐明鹅掌草三萜皂苷对肝癌抑制作用机制,为推广鹅掌草三萜皂苷治疗肝癌提供理论基础。方法建立H22细胞裸鼠皮下移植瘤模型,实验分为模型组及鹅掌草三萜皂苷高、中、低剂量(15,10,5mg/kg)组,给药干预21d后收集模型组及高剂量组肿瘤组织进行RNA-seq分析;根据RNA-seq结果,利用qRT-PCR检测差异基因磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3激酶催化亚单位伽马亚型(Pik3cg)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt1),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Mtor)等基因的表达水平。结果不同浓度(15,10,5mg/kg)的鹅掌草三萜皂苷干预21d后,与模型组(0mg/kg)比较,均能抑制肝癌H22肿瘤组织增殖,其中高剂量组抑制肿瘤增殖效果最显著。通过RNA-seq分析,高剂量组与模型组比较,共导致202个基因表达发生显著变化,其中197个基因显著下调(P<0.01)。这些差异基因被富集于Hematopoietic cell lineage、Cytokine-cytokine receptor interaction、MAPK signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、PPAR signaling pathway、Chemokine signaling pathway等通路,影响肝癌细胞的增殖、免疫;通过qRT-PCR检测发现鹅掌草三萜皂苷能够显著降低P3ikcg、Akt1、Mtor的转录水平,提高磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸三磷酸酶和双特异性蛋白磷酸酶(Pten)的转录水平。结论通过RNA-seq检测及分析,PI3K/AKT mTOR信号通路的抑制可能在鹅掌草三萜皂苷抑制肝癌细胞增殖中发挥作用。