猪脾铁蛋白电子隧道特性及释放铁途径的研究

维生素Ｃ和连二亚硫酸钠混合后只能加速猪脾铁蛋白释放铁的速率，并不能使铁蛋白释放铁的动力学途径由复杂转化为简单．而单独维生素Ｃ却能利用蛋白壳上的电子隧道传递电子，迫使铁蛋白以二分之一的反应级数方式释放整体铁核的铁并起着抗磷酸盐阻遏释放铁速率的作用，简化释放铁的途径．对维生素Ｃ参与铁蛋白释放铁的机理进行了讨论．

猪脾转移因子增强禽白血病病毒A/B亚群抗体阳性鸡群免疫水平的研究

为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡血样,并从中选出各60羽份(ALV-A/B抗体阳性、阴性鸡各半,ALV p27抗原均为阴性),将4个品种的ALV-A/B抗体阳性蛋鸡均分为实验组(联合接种TF 0.02 mL+NDV La Sota疫苗1羽份/羽,TF多肽含量为3.5 mg/mL,核糖含量为72.0μg/mL,脱E受体法效力检验活力为15%)和对照组(单独接种NDV La Sota疫苗1羽份/羽),于接种后21 d采血检测。结果显示,ALV-A/B抗体阳性鸡群(120羽份)的ND HI抗体效价均值(6.1±1.3)与阴性鸡群(120羽份)均值(6.2±1.3)差异不显著,但其SI均值(1.20±0.10)显著低于阴性鸡群(1.35±0.10)(p<0.05);实验组(60羽份)的ND HI抗体效价和SI均值(9.0±1.3,1.73±0.15)显著高于对照组(60羽份)均值(7.8±1.2,1.39±0.16)(p<0.05)。研究结果表明,ALV-A/B抗体阳性与鸡ND HI抗体效价相关性不大,而对SI具有抑制作用;TF具有增强ALV-A/B抗体阳性鸡群免疫水平的作用。

猪脾和马脾铁蛋白理化特性的比较

Ｈ＋、ＯＨ－均能参与猪脾和马脾铁蛋白铁核组成，迫使它们分别释放铁核中对酸碱不稳定的铁组份。在可见光谱中，猪脾和马脾铁蛋白表现出既相似又可区分的光谱特性，两者铁蛋白释放铁的动力学过程可分为一级快速反应和零级慢速反应，但猪脾铁蛋白释放铁的一级反应速率明显大于马脾铁蛋白释放铁的一级反应的速率，推测这些现象均与各自蛋白的蛋白壳自身调节能力有着密切联系。

猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫猪脾脏转移因子的制备及其活性分析

从猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗免疫猪脾制备转移因子(TF),检测其免疫活性,为开发新型免疫增强剂和有效防制PRRS提供科学依据。用PRRSV弱毒活疫苗免疫健康育成猪,无菌采集脾,通过透析法从脾提取TF。应用磺基水杨酸法、茚三酮反应和硝酸-钼酸铵试验等方法检测TF的主要成分,经高效液相色谱法测定TF中氨基酸种类及其含量;通过鸡红细胞吞噬试验和MTT法,检测TF对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血淋巴细胞增殖活性的调节作用。进而将9头4周龄健康仔猪随机分为A、B和C组,每组3头。A组每头猪左、右侧耳后分别肌内注射1头份PRRSV疫苗和1mL TF;B组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL TF的混合液;C组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL生理盐水混合液。免疫后20d,通过MTT法检测每组猪外周血淋巴细胞(PBLC)的增殖活性。制备的TF内无蛋白质成分,含有核酸和18种氨基酸,每毫升TF含核酸21.5μg、总氨基酸3.479mg。TF能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力和PBLC增殖活性。当TF与PRRSV疫苗分开或混合注射给4周龄仔猪后,能够显著提高仔猪PBLC的增殖能力。从PRRS弱毒活疫苗免疫猪的脾制备了TF,其能显著提高巨噬细胞的吞噬功能和外周血淋巴细胞的增殖活性。

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子(TF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量(10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份)LaSota疫苗株单独(单独免疫组)、LaSota疫苗株与TF联合(联合免疫组)免疫SPF鸡,14 d后以NDV F 48 E 9强毒攻毒,同时设立对照组(非免疫攻毒)和空白组(非免疫非攻毒),并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量(PD_(50))如下:单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.0008羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.0005羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^(-3)羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著(P<0.01);攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著(P<0.01)。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD_(50);在抵抗NDV F 48 E 9强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。

转移因子口服液制备方法的研究

目的研究以猪脾为材料制备转移因子口服液的方法。方法将猪脾去脂肪细胞破碎,离心澄清、超滤、除菌,按国家药品监督管理局国家药品标准用Folin酚法进行全面检定。结果用上述工艺提取的转移因子口服液,多肽8.04 mg/ml,核糖459.2μg/ml,E玫瑰花15.8%;经检验质量稳定,3批试制品其理化性质和生物学活性均符合转移因子的制备要求;无菌试验,免疫活性测定均达到国家的药品标准。结论使用该生产工艺制备的转移因子口服液,具有周期短、质量稳定、产量高、含量高、生产成本低等优点,可大规模生产。

三种转移因子的部分理化性质比较

以人脾、猪脾和牛脾的3种不同的转移因子,通过紫外光谱分析,人脾和猪脾的转移因子的E260/E280≥2,与转移因子的质量控制标准一致,紫外最高吸收峰在波长250±2nm处。而牛脾转移因子的E260/E280≥1,最高吸收峰在波长268=2nm处。通过高效反向液相色谱和水解氨基酸成分分析进一步证明,人脾和猪脾转移因子组成成分相似,牛脾转移因子与前两者有一定差异。

三氯乙烯对豚鼠脾和外周血淋巴细胞凋亡基因表达水平的影响

目的:探讨三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对豚鼠脾和外周血淋巴细胞凋亡基因Bcl-2、BAX、BAD mRNA表达的影响。方法:采用豚鼠最大值法(guinea pig maximizationtest,GPMT)将18只豚鼠随机分为TCE实验组、阴性对照组、阳性对照组,共3组,每组6只。实验采用皮内注射的方式致敏,TCE实验组注射5%TCE(TCE∶橄榄油=5∶95),阳性对照组注射0.125%2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)和福氏完全佐剂(Freund's adjuvant complete,FCA)等量混合物,阴性对照组注射橄榄油。各组于第1天皮内注射受试物致敏,第8天用受试物涂皮诱导,第15天涂皮激发。于第15天激发后24h,抽取豚鼠外周血,并处死豚鼠摘取脾脏。用荧光定量PCR检测脾和外周血淋巴细胞凋亡基因Bcl-2、BAX和BAD的mRNA表达水平。结果:阳性对照组和TCE实验组动物均出现明显皮肤损害,TCE致豚鼠皮肤变态反应动物模型建立成功。TCE实验组和阳性对照组豚鼠脾淋巴细胞Bcl-2、BAX和BAD的mRNA表达水平均较阴性对照组显著升高(P<0.01);但TCE实验组和阳性对照组豚鼠外周血淋巴细胞Bcl-2、BAX和BAD的mRNA表达水平与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三氯乙烯可诱导豚鼠产生明显的皮肤变态反应,对豚鼠脾淋巴细胞凋亡基因表达水平有一定影响。

Ro、La的组成和相互关系

本文证明,猪脾Ro和La不仅分布在细胞质中,也存在于细胞核内。Ro的抗原性多肽为60kD,La为45—47kD(二条)、26—29kD(三条)、Ro和La在细胞质中以复合形式存在,而在细胞核内则相互独立。

人脾、猪脾细胞核ENA抗原性质的对比分析

本文对人脾、猪脾ENA进行对比分析,结果表明:两者的紫外吸收光谱相似;猪脾ENA中所含的蛋白量比人脾ENA为高;SDS-PAGE显示猪脾、人脾ENA分别含有一条27KD、22KD浓染蛋白;ELISA曲线显示猪脾ENA比人脾ENA具有更强的抗原活性。这些结果提示:用来源方便的猪脾提取ENA,用于临床诊断是切实可行的。

R0(SS-A)抗原的纯化

本文以猪脾细胞浆为原料,采用制备电泳方法纯化了RO抗原。纯化的样品在PAGE上呈现单条区带,通过凝胶过渡测定分子量约为80KD,在SDS-PAGE上主要表现为60KD多肽带,Western blotting证明此60KD即为RO抗原的活性多肽。

不同蛋白酶的猪、兔骨酶解液对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的比较

以鲜猪骨、鲜兔骨为原料,采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶分别进行酶解制备猪、兔骨胶原蛋白肽。以小鼠脾淋巴细胞的增殖率为指标,通过单因素实验及正交实验得到最佳的酶解条件。结果表明:酶解猪骨的最佳酶为Alcalase碱性蛋白酶,酶解条件为时间4 h、pH 9.5、酶与底物比6 000 U/g、温度45℃、底物蛋白质量分数6%,其酶解液的脾细胞增殖率为83.41%;酶解兔骨的最佳酶为木瓜蛋白酶,酶解条件为4 h、pH 5.5、酶与底物比7 000 U/g、温度65℃、底物蛋白质量分数6%,其酶解液的脾细胞增殖率为80.70%。

小型猪脾虚痰浊证模型评价量表研制与考评

目的：编制小型猪脾虚痰浊证模型评价量表,并对其进行信度和效度考评。方法：依据中医证候理论,以小型猪粪便性状、划痕、等待喂食行为、皮毛光泽、鼻盘颜色为条目,建立量表,并对其信度（包括内部一致性信度、重测信度）、效度（包括内容效度、结构效度和区分效度）进行考评。结果：信度方面,便溏维度克朗巴赫α系数为0.742,总表克朗巴赫α系数为0.523;重测信度除等待喂食行为外,其他条目相关系数均〉0.7（0.745~1）。效度方面,除鼻盘颜色条目外,其他条目之间相关系数在0.137~0.608,其他条目与量表总分相关系数均〉0.4（0.479~0.727）;量表提取3个公因子,累计贡献率为80.165%;量表对脾虚痰浊证模型小型猪评测总分为（3.26±1.65）分,明显高于正常组（1.17±0.76）分,能够很好区分出脾虚痰浊证模型小型猪（P〈0.05）。结论：小型猪脾虚痰浊证模型评价量表的信度和效度都达到了量表标准,可用于小型猪脾虚痰浊证模型评价。

银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态、上皮淋巴细胞和杯状细胞数量的影响

为研究银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态、上皮淋巴细胞和杯状细胞数量的影响,试验选择25日龄健康断奶仔猪30头,随机分成3组,即银杏叶复方组、脾虚模型组和对照组,每组5个重复,每个重复2头。颈部注射利血平加饥饱失常法建立脾虚性腹泻模型,银杏叶复方进行治疗。预试7 d后进行正式试验,试验期为30 d。结果表明:银杏叶复方组回肠绒毛高度显著高于脾虚模型组(P<0.05),十二指肠、回肠隐窝深度显著低于脾虚模型组(P<0.05);银杏叶复方组十二指肠绒毛高度/隐窝深度(V/C)显著高于脾虚模型组(P<0.05),回肠V/C极显著高于脾虚模型组(P<0.01);银杏叶复方组十二指肠杯状细胞数、空肠和回肠上皮内淋巴细胞数目显著高于模型组(P<0.05)。可知,银杏叶复方有修复脾虚性断奶仔猪的小肠组织的作用。

免疫组织化学法定位猪脾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

利用免疫组织化学法研究了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)在猪脾脏分布定位,为DON体内残留及DON对免疫系统影响进一步研究提供依据。选用10头健康阉公猪,随机分为二组,一组经乳静脉注射DON标准品,注射剂量为75μg/kg体重,另一组经乳静脉注射相当体积生理盐水。注射完成后开始计时,并观察记录猪的反应情况,待30min后放血宰杀,并迅速取脾脏,4%多聚甲醛固定,经脱水、包埋及切片后,采用免疫组化法定位脾脏中DON的分布情况。免疫组化法定位结果显示,在75μg/kg体重给药组中,脾组织中的血管壁周围见有DON阳性反应颗粒,而对照组未见阳性反应颗粒。

鸡和猪脾转移因子活性组分的提取及免疫活性研究

采用Sephadex G-25柱层析法分离提取鸡、猪脾转移因子(Transfer Factor,TF)各组分。利用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,通过MTT法比较鸡脾TF各组分及TF原液对免疫抑制小鼠和正常小鼠的淋巴细胞转化的作用,同时比较了不同来源的鸡脾和猪脾TF各组分及原液对正常小鼠淋巴细胞转化的作用。结果表明鸡脾和猪脾TF均由三大组分构成,其中鸡脾TF三大组分及原液均对免疫抑制小鼠的外周血淋巴细胞转化具有明显的免疫增强作用,与对照组相比均表现差异显著(P<0.01),其中组分Ⅲ的淋巴细胞转化最佳,组分Ⅰ与组分Ⅱ接近,但均优于原液。而对正常小鼠的外周血淋巴细胞转化却表现不同的结果,其中组分Ⅰ和原液具有显著的免疫增强作用(P<0.05),组分Ⅱ作用不显著,组分Ⅲ则起到极显著的抑制作用(P<0.01)。而不同来源的猪脾和鸡脾TF各组分及原液对正常小鼠的淋巴细胞均表现出一致的免疫活性。

猪脾细胞干扰素在细胞中对疱疹病毒的抑制作用

目的:体外评价猪脾细胞干扰素抗疱疹病毒的活性,为疱疹病毒感染寻找新的治疗手段。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率来评价猪脾细胞干扰素体外对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)的抑制作用。结果:猪脾细胞干扰素对HeLa细胞的半数毒性浓度(TC50)为535.3 IU/ml,对HSV-1和HSV-2的半数有效浓度(IC50)分别为24.6×103IU/L和25.9×103IU/L,治疗指数(TI)为21.8和20.7;其抗病毒效果与人白细胞干扰素及喷昔洛韦一致。结论:猪脾细胞干扰素具有很好的体外抗疱疹病毒作用。

注射用转移因子不同生产方法比较

比较从猪脾中提取活性转移因子的不同生产方法,以建立适合产业化的制造工艺。将猪脾匀浆后,分别冻融0、3、5次,再以超滤法或Lawence法提取转移因子。与lawrence法相比,经5次冻融并超滤制备的产品收率高,符合国家标准。匀浆冻融次数对转移因子的收率和质量有一定的影响,超滤法适合于转移因子的大规模生产。

ZBED 6基因敲除猪脾脏转录组测序数据分析

ZBED 6基因作为一个重要的瘦肉型猪育种分子靶点已经在基因编辑育种工作中获得了一定效果,但基因编辑猪免疫机能是否存在缺陷尚需科学研究支持。该研究收集了ZBED 6-SKO和WT猪脾脏组织并结合转录组测序技术,发掘差异表达基因,对差异表达基因进行生物信息学相关分析。结果表明:通过转录组测序获得了每个样本超过6 Gb的数据,数据比对显示比对率均高于90%,能够满足后续分析需要。以TPM为单位,获得表达具有显著差异的基因集(FDR<0.05,FC>2),发现在ZBED6-SKO组和WT组之间仅存在9个差异表达基因,其中5个基因上调,4个基因下调,分别为IL4R、DCAKD、FAM91A1、ZNF140、ATP6V1D、ENDOV、ZNF333、PLOD2、R-SSC-211859。同时在GO聚类、KEGG聚类和KOG聚类当中均未获得显著富集的相关基因集。数据表明在进行基因编辑操作之后,ZBED 6-SKO猪的脾脏免疫功能没有发生明显变化。该研究首次通过对ZBED 6基因敲除猪脾脏组织进行基因表达水平的探究,发现在基因编辑操作后获得的动物体在脾脏免疫机能上与野生型不存在较高水平的差异,并未发现ZBED 6基因敲除猪脾脏免疫缺陷相关证据,关于基因编辑猪免疫缺陷的背后机制仍有待进一步探明。

猪脾浸液透析物(PS—DLE)对肿瘤患者红细胞C_3b受体活性的影响

用酵母菌花环试验,检测健康成人和肿瘤患者红细胞C_3b受体免疫粘附活性.结果发现PS—DLE对26例健康成人红细胞C_3b受体活性具有激活作用(P<0.01),检测17例肿瘤患者红细胞C_3b受体酵母菌花环率与健康人相比,明显偏低(P<0.01),经PS—DLE(4单位/日)治疗1周后,其红细胞C_3b受体活性明显提高,与治疗前比较相差非常显著(P<0.01).本实验结果表明,肿瘤患者的红细胞免疫功能是处于抑制状态,而PS—DLE可以提高红细胞的免疫功能.