人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞Pim-3及Bad凋亡蛋白表达的影响

背景与目的:人参皂苷Rg3是一种抗肿瘤中药单体,有研究表明人参皂苷Rg3对肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌等肿瘤细胞的浸润具有明显抑制作用。本实验目的是研究人参皂苷Rg3对人胰腺癌细胞株PANC-1中原癌基因Pim-3及磷酸化Bad蛋白pBad(Ser112)、Bad(Ser136)表达的影响。方法:用浓度为0、10、20、40和80μmol/L的人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制作用;用倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对PANC-1细胞凋亡的诱导作用;用Western blot法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后的PANC-1细胞中pim-3、Bad、pBad(Ser112)和pBad(Ser136)的表达;定向克隆Pim-3的发夹状寡核苷酸(shor thairpin RNA,shRNA)到真核表达载体形成重组质粒pSilencer 3.1-HINeo-Pim-3 shRNA,将重组质粒通过脂质体介导转染PANC-1细胞,采用Annexin V/PI流式细胞分析法检测转染后PANC-1细胞的凋亡,用Western blot法检测转染后PANC-1细胞的pim-3及pBad(Ser112)的表达。结果:10、20、40和80μmo1/L的人参皂苷Rg3对PANC-1细胞增殖的抑制率分别为20.2%、33.4%、52.8%、65.3%;经10～80μmol/L的人参皂苷Rg3处理后PANC-1细胞呈现明显的凋亡形态学改变,80μmol/L人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,与正常对照组细胞凋亡率(3.3±2.1)%比较,处理组细胞凋亡率(12.2±1.3)%增加(P<0.05);人参皂苷Rg3处理PANC-1细胞24h后,Bad总蛋白表达没有明显变化。pim-3和pBad(Ser112)的表达均随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱。PANC-1细胞中pBad(Ser136)不表达;Pim-3 shRNA转染PANC-1细胞后,与正常对照组比较,转染组早期凋亡率和总凋亡率均增加[(11.5±3.7)%vs.(5.8±2.2)%,P<0.01;(20.8±2.6)%vs.(13.0±4.1)%,P<0.05],转染组pim-3及pBad(Ser112)表达均低于正常对照组。结论:人参皂苷Rg3可下调胰腺癌细胞PANC-1中Pim-3以及磷酸化Bad蛋白的表达,从而抑制PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡。

Pim-3对抗心肌细胞缺氧／复氧损伤的研究

目的研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3mRNA及蛋白表达水平(RT-PCR、Western blot法)的改变,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果RT-PCR和Western blot结果显示,Pim-3在正常组几乎不表达,A/R组表达明显升高,缺氧预适应(APC)+A/R组表达则进一步升高;转染pEGFP-N2/Pim-3质粒后24h,荧光倒置显微镜显示转染效率达30%;在A/R损伤后,Pim-3基因转染组较未转染组的心肌细胞LDH值明显降低,细胞存活率则明显升高,心肌细胞的凋亡指数明显下降。结论在细胞水平,Pim-3参与心肌APC保护作用,导入外源性的Pim-3基因能对抗急性A/R损伤。

人参皂苷Rg3对人肝癌细胞Pim-3及Bad凋亡蛋白表达的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对人肝癌细胞SMMC-7721中Pim-3及磷酸化Bad蛋白pBad(Ser112),pBad(Ser136)表达的影响.方法:用浓度为0、5、10、20、40和80μmol/L的人参皂苷Rg3处理SMMC-7721细胞24h后.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测人参皂苷Rg3对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用,Westernblot方法检测不同浓度人参皂苷Rg3处理后SMMC-7721细胞中Pim-3,pBad(Ser112)和pBad(Ser136)的表达情况.结果:5、10、20、40和80μmol/L的人参皂苷Rg3对SMMC-7721细胞增殖的抑制率分别为4.69%、15.53%、22.17%、50.97%、61.65%.5-80μmol/L的人参皂苷Rg3处理细胞呈现明显的凋亡形态学改变,80μmol/L人参皂苷Rg3处理SMMC-7721细胞24h后,处理组比正常对照组凋亡明显增加,差异有统计意义(16.5%±4.3%vs0.4%±1.3%,P<0.01).人参皂苷Rg3对细胞中Bad总蛋白的表达没有明显影响.Pim-3的表达随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱,而pBad(Ser112)的表达随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐增强;pBad(Ser136)不表达.结论:人参皂苷Rg3的抗癌活性与其促进磷酸化Bad蛋白表达有关.

Pim-3异常表达在胃癌中的意义

目的:探讨Pim-3的异常表达在胃癌发展过程中的作用.方法:使用半定量RT-PCR法和免疫组化法检测40例胃癌组织及20例癌旁正常组织标本Pim-3的表达,并比较Pim-3的表达与胃癌临床病理参数的关系.结果:与正常胃黏膜相比,Pim-3mRNA的表达量在胃癌组织中更高(0.287±0.058 vs 0.053±0.055,P<0.001).中分化腺癌中Pim-3蛋白的表达高于低分化腺癌组织中的表达,两者比较差异显著(50%vs20%,P<0.05).Pim-3的表达与淋巴转移、静脉转移密切相关(r=0.385,0.412,P=0.014,0.008).结论:Pim-3可作为胃癌早期的生物标志物,并可预示肿瘤的预后.

p38 MAPK-Pim-3通路可能介导预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:研究MAPK通路在原癌基因Pim-3抗心肌急性缺氧复氧损伤中的作用。方法:采用原代培养新生大鼠的心肌细胞,随机分为4组:正常对照组(control)、缺氧复氧组(A/R)、缺氧预适应组(APC+A/R)、阻断剂组。在缺氧预处理前分别用终浓度为10μmol/LSB203850(p38MAPK阻断剂)、U0126(ERK1/2阻断剂)、SP600125(SAPK/JNK阻断剂)与细胞孵育30min。实验结束后测定MAPKs通路中ERK1/2、JNK、p38MAPK磷酸化蛋白表达水平及Pim-3蛋白的表达水平,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果:SB203850、U0126、SP600125能分别取消由APC或A/R所诱导ERK1/2、JNK、p38MAPK的磷酸化水平的升高;由APC所诱导的Pim-3表达的升高在p38MAPK通路被阻断后明显下调(P<0.01),并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率则下降,心肌细胞的凋亡指数升高。结论:p38MAPK的激活可上调原癌基因Pim-3的表达,从而可能对心肌细胞起到保护作用。

食管鳞状细胞癌组织中Pim-3和微小染色体7蛋白的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中Pim-3和微小染色体7(MCM7)蛋白的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测77例ESCC组织、70例癌旁不典型增生组织及46例正常食管黏膜组织中Pim-3和MCM7蛋白的表达情况,分析ESCC组织中Pim-3和MCM7蛋白的表达与各临床病理因素的关系及二者表达的相关性。结果:ESCC组织中Pim-3和MCM7蛋白的表达高于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(H=113.160,64.507,P均<0.001)。Pim-3和MCM7蛋白的表达与TNM分期、淋巴结转移有关(χ2分别为3.368、3.424及2.827、2.362,P<0.05),且MCM7蛋白的表达还与癌细胞分化程度、外膜浸润有关(χ2=3.672和2.760,P<0.05)。ESCC组织中Pim-3蛋白表达与MCM7蛋白表达无关(rs=0.116,P=0.316)。结论:Pim-3和MCM7与ESCC的发生、发展有密切关系。

原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的:克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N2／pim-3,观察他在真核细胞SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响．方法:利用TRIzol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N2／pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定．将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-7721细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色实验对转染细胞的生物学行为进行检测．结果:将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000 bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N2／pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N2/pim-3转染组凋亡细胞占3．5％,质粒pEGFP-N2转染组凋亡细胞占10．7％,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11．0％,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义(P<0．05);倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-772 1细胞中的正常表达;MTT比色实验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡．结论:真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡．

原癌基因Pim-3在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌细胞增殖的相关性

目的:探讨胰腺癌组织中Pim-3的表达及其与癌细胞增殖的相关性。方法:采用免疫组化SP法检测15例正常胰腺组织和49例胰腺癌组织中Pim-3与增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,并计算PCNA增殖指数。结果:Pim-3在正常胰腺组织中不表达,而在胰腺癌组织中阳性表达,表达率为73.47%(36/49),明显高于正常胰腺组织(P<0.01)。胰腺癌组织中PCNA的增殖指数(32.54%±14.69%)明显高于正常胰腺组织(6.25%±2.59%)(P<0.01)。且随胰腺癌细胞中Pim-3蛋白表达水平升高,肿瘤细胞增殖活性相应增加,Pim-3蛋白表达与PCNA增殖指数呈正相关(r=0.726,P<0.01)。结论:Pim-3在胰腺癌组织中高表达,Pim-3与细胞的增殖密切相关,可能在胰腺癌的发生发展中起重要作用。

应用组织芯片研究Pim-3、p-STAT3在胰腺癌中的表达及临床意义

目的探讨Pim-3、p-STAT3蛋白在胰腺导管腺癌组织中的表达情况及生物学行为意义。方法应用组织芯片和免疫组化的方法,检测88例人胰腺导管腺癌组织和11例非癌组织中Pim-3、p-STAT3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征及患者预后的关系。结果在88例胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3的阳性表达率分别为76.1%和75.0%,在非癌胰腺组织内均为阴性表达。Pim-3在肿瘤细胞的胞质内表达,p-STAT3在肿瘤细胞的胞核与胞质内表达,两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤大小、位置和病理学分级无关(P>0.05),且其之间成正相关(r=0.416,P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3表达阳性的患者生存时间缩短。Cox多因素相关分析表明Pim-3和p-STAT3阳性表达是影响患者生存期的独立预后因素(分别P=0.003和P=0.015)。结论胰腺癌中Pim-3、p-STAT3的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移密切相关,且两者均可作为胰腺癌患者预后不良的判断因子。

Pim-3在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

目的研究Pim-3在结直肠癌组织中的表达及其与预后的相关性,并探讨其与结直肠癌细胞凋亡的关系。方法收集经手术切除且病理证实的410例结直肠癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学SP法检测相关组织中Pim-3蛋白的表达,采用SPSS 19.0统计软件行生存分析和相关分析;比较Pim-3蛋白在原发灶及肝转移灶中的表达,及其与其他临床病理因素的相关性。结果多因素分析显示围手术期输血量、局部浸润、淋巴结或肝转移与否、Pim-3表达情况是独立的预后影响因素。Pim-3蛋白在结直肠癌组织中的水平较正常组织增高,阳性表达的患者5年生存率显著下降;Pim-3表达情况与肿瘤细胞的分化、局部浸润、淋巴结或肝转移呈正相关。结论 Pim-3基因在结直肠癌中高表达,是独立的预后影响因素。

Pim-3在肺癌组织中的表达

目的探讨Pim-3在肺腺癌A549细胞系和肺癌组织中的表达及临床意义。方法免疫组化法检测Pim-3蛋白在肺癌细胞系、不同类型肺癌组织和非肺癌支气管肺组织中的表达,分析组间差异。结果 Pim-3蛋白在肺癌细胞系和不同类型肺癌组织中阳性表达率均为100%,而癌周组织未见明显阳性表达;在正常支气管肺组织中,未见阳性表达;不同类型肺癌组织阳性表达率无统计学差异。结论 Pim-3蛋白有可能成为新的肺癌标志物。

原癌基因Pim-3蛋白表达与食管癌术后生存的关系

目的探讨原癌基因Pim-3蛋白表达与食管癌患者术后生存的关系。方法应用免疫组织化学SP法对50例随访资料完整的食管癌标本进行Pim-3的基因产物测定,并将其与患者生存期进行Kaplan-Meier单因素和Cox回归多因素分析。结果 Kaplan-Meier分析显示:食管癌患者的年龄、病理分级、临床TNM分期、Pim-3表达、侵袭深度及淋巴结转移与否是影响患者预后的重要因素;Cox回归多因素分析显示:肿瘤的病理分级、TNM分期、Pim-3表达是独立的预后因素,其中以病理分级和Pim-3表达最为重要。结论 Pim-3的高表达预示着食管癌患者的预后不良,是独立危险因素。

碱性成纤维细胞生长因子对肺癌A459细胞pim-3表达影响的实验研究

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,FGF-2)对肺癌A459细胞株pim-3的影响。方法:不同浓度的(0、25、50、100ng/ml)FGF-2在体外作用于肺癌A459细胞,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测pim-3mRNA,Western blot检测pim-3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,RT-PCR和Western blot检测结果显示pim-3mRNA及其蛋白的表达在各FGF-2作用组均显著增高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:FGF-2可以量效的方式上调pim-3的表达。

Pim-3在食管鳞癌组织中mRNA和蛋白的表达及其意义

目的:探讨食管鳞癌组织中Pim-3 mRNA和蛋白的表达及其意义.方法:应用原位杂交和免疫组织化学法分别检测45例正常食管黏膜组织、22例癌旁不典型增生组织及45例食管鳞癌组织中Pim-3 mRNA和蛋白的表达.结果:在食管鳞癌癌变过程中Pim-3在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中mRNA的表达分别为0.00%(0/45)、22.73%(5/22)、82.22%(37/45),组间比较有明显差异(χ2=67.450,P<0.01).此外,对应的蛋白表达的阳性率依次为0.00%(0/45)、18.18%(4/22)、75.56%(34/45),组间比较有明显差异(χ2=60.326,P<0.01);食管鳞癌组织之间Pim-3 mRNA和蛋白的表达在不同TNM分期及有无淋巴结转移中的差异均有统计学意义(均P<0.05).Pim-3 mRNA和蛋白的表达具有明显的正相关关系(γp=0.547,P<0.01).结论:食管鳞癌组织中Pim-3 mRNA和蛋白的高表达可能与食管鳞癌发生发展密切相关.

Pim-3与NF-κB在乳腺浸润性导管癌中的表达及相关性研究

目的探讨Pim-3与NF-κB在乳腺浸润性导管癌发病中的作用。方法用免疫组织化学技术SP法,检测Pim-3与NF-κB在75例乳腺浸润性导管癌、21例乳腺导管内癌及30例正常乳腺组织中的表达,分析它们与乳腺癌临床病理因素的关系及两者的相关性。结果在乳腺浸润性导管癌中Pim-3的阳性表达率为77.3%、NF-κB为68.0%,在乳腺导管内癌中Pim-3的阳性表达率为52.4%、NF-κB为42.9%,在正常乳腺组织中Pim-3的阳性表达率为23.3%、NF-κB为16.7%。Pim-3阳性表达率与肿瘤直径、组织学分级、临床病理分期,NF-κB阳性表达率与肿瘤直径、组织学分级、淋巴结转移有相关性。Spearmen秩相关分析,乳腺癌中Pim-3的阳性表达与NF-κB阳性表达呈正相关(r=0.243)。结论 Pim-3与NF-κB在乳腺癌的发生、发展中具有重要的促进作用,其阳性表达对预后的判断具参考作用。

siRNA沉默Pim-3对T24细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究小干扰RNA(siRNA)沉默Pim-3对膀胱癌细胞增殖和周期的影响。方法:膀胱癌T24细胞分为3组:未处理组(不作任何处理)、对照siRNA组(采用50nmol/L对照siRNA转染)和Pim-3siRNA组(采用50nmol/LPim-3siRNA转染)。采用Westernblot检测转染48hPim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达的变化,CCK-8试剂检测转染24、48、72、96h细胞的增殖速率,流式细胞术检测转染48h细胞周期的变化。结果:3组膀胱癌T24细胞Pim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=32.506、49.573、23.079、44.758,P<0.05),与未处理组和对照siRNA组相比,Pim-3siRNA组Pim-3、CyclinD1和Cdk-2蛋白的表达下降,P21蛋白表达升高(P<0.05)。转染Pim-3siRNA48、72和96h后,膀胱癌T24细胞的增殖速率均明显受到抑制(F=50.067、132.504、277.389,P<0.001)。3组G0/G1、S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例比较,差异有统计学意义(F=107.970、20.039和66.872,P<0.05),Pim-3siRNA组G0/G1期膀胱癌T24细胞比例高于未处理组和对照siRNA组(P<0.05),而S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例低于未处理组和对照siRNA组(P<0.05)。结论:Pim-3有望成为治疗膀胱癌潜在的分子靶点。

PIM-3及Cyclin D1与肺腺癌发生的关系及意义

目的探讨PIM-3及Cyclin D1在肺腺癌中的表达及临床意义。方法收集肺腺癌标本45例及肺大疱旁正常肺组织20例,采用免疫组织化学Envision二步法检测PIM-3及Cyclin D1的表达,并分析它们的相关性。结果肺腺癌组织中PIM-3及Cyclin D1的表达均高于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.01);在肺腺癌中PIM-3的表达与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移及临床分期相关(P<0.05),与患者性别及年龄无明显相关性(P>0.05);而Cyclin D1的表达与肺腺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移及临床分期均无相关性(P>0.05);PIM-3及Cyclin D1蛋白在肺腺癌及正常肺组织中的表达经双变量相关分析呈正相关。结论 PIM-3及Cyclin D1的高表达与肺腺癌的发生相关,两者在肺腺癌及正常肺组织中的表达呈正相关,两者联合检测可为肺腺癌的诊断提供参考依据。而PIM-3在肺腺癌组织中的高表达与预后有关,有可能作为判断肺腺癌患者预后的一项指标。

Pim-3在大鼠脂肪组织中的表达及其与脂肪胰岛素抵抗的关系

目的:检测Pim-3在脂肪中的表达,并探讨其在脂肪的胰岛素抵抗发生过程中的作用。方法:RT-PCR法检测脂肪组织中Pim-3 mRNA的表达,免疫荧光化学法检测Pim-3蛋白表达及亚细胞定位;检测胰岛素抵抗大鼠的附睾及肾周脂肪组织中Pim-3 mRNA表达变化;体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞,油红O染色判断分化程度,并观察分化前后Pim-3表达变化。RT-PCR法检测高胰岛素(100 nmol/L)对骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞中Pim-3表达变化的影响。结果:(1)脂肪组织中具有较高水平的Pim-3 mRNA表达,免疫荧光结果显示其蛋白主要分布于胞浆;(2)胰岛素抵抗大鼠附睾及肾周脂肪组织中Pim-3 mRNA表达显著低于对照组(P<0.05);(3)大鼠骨髓间充质干细胞成功分化为脂肪细胞,分化后Pim-3 mRNA表达水平明显增高;(4)高胰岛素处理后,脂肪细胞中Pim-3 mRNA表达显著降低。结论:Pim-3表达于脂肪组织中,并可能参与骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞分化过程及脂肪组织胰岛素抵抗的发病过程。

Pim-3、Bax与XIAP在食管鳞癌中的表达及意义

目的:探讨Pim-3、Bax与XIAP在食管鳞癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测Pim-3、Bax及XIAP在食管鳞癌与正常食管黏膜中的表达。结果:Pim-3与XIAP蛋白在食管鳞癌中的表达高于正常食管黏膜(P<0.05);Bax蛋白在正常食管黏膜中的表达高于食管鳞癌(P<0.05);Pim-3、Bax及XIAP蛋白的表达与食管鳞癌的组织学分级与临床病理分期无关。结论:Pim-3、Bax与XIAP与食管鳞癌的发生发展具有相关性,Pim-3、Bax及XIAP与食管鳞癌的组织学分级和临床病理分期的关系有待进一步证实。

胃癌组织中PIM-3的异常表达及临床意义

目的 研究并分析胃癌组织中PIM-3的异常表达及其临床意义.方法 选择2013年6月～2014年2月于内蒙古医科大学附属医院行胃癌组织根治性切除的患者50例为研究对象,采用免疫组织化学法（SP法）分别测定PIM-3在50例胃癌组织和及其中25例患者的癌旁组织中的表达,分析PIM-3与性别、年龄、肿瘤大小等有关参数的相关性.结果 癌旁组织中PIM-3的表达阳性率（16％）显著低于胃癌组织（90％）;PIM-3的表达与胃癌组织中分化程度、浸润程度、淋巴转移和静脉转移密切相关（P＜0.05）,而与性别、年龄、肿瘤直径关系不大（P＞0.05）.结论 PIM-3参与胃癌组织细胞的分化、浸润和转移,促进肿瘤恶化和癌症发展.