邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对马氏珠母贝(Pinctada martensi)血细胞免疫功能及氧化应激效应的影响

邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)是一种持久性的有机污染物(POPs),具有潜在毒性、致癌性。选取马氏珠母贝(Pinctada martensi)为研究对象,研究DEHP对其血淋巴细胞免疫功能和脂质过氧化水平的影响。将成年马氏珠母贝暴露于不同浓度(0.5、2.0、8.0、16.0 mg·L-1)的DEHP中,暴露14 d后测定血细胞数目(THC)、吞噬能力(phagocytic activity)、细胞膜稳定性(cell membrane stability)、脂质过氧化程度(LPO)和总谷胱甘肽含量(T-GSH)的变化。结果显示,血细胞数目随DEHP浓度的升高而降低,呈明显的剂量-效应关系,最低可见效应浓度(LOEC)<0.5 mg·L-1。细胞膜稳定性和吞噬活力均随DEHP浓度的升高,呈现先升高后降低的变化趋势,其LOEC值分别小于2和8 mg·L-1。细胞中丙二醛(MDA)含量随染毒浓度增加逐渐升高,在8 mg·L-1浓度组达到最高值,之后降低,与之相应的脂质过氧化水平也呈现先升高后降低的变化趋势,LOEC<2 mg·L-1。8mg·L-1浓度组的总谷胱甘肽含量与对照组相比存在显著差异性(p<0.05),LOEC<8 mg·L-1。研究结果表明:DEHP染毒14 d对马氏珠母贝血淋巴细胞免疫功能有明显的影响,同时还会诱导机体产生氧化应激效应,在所测试的指标中,血细胞计数对DEHP的胁迫最敏感(LOEC<0.5 mg·L-1),细胞膜稳定性和脂质过氧化水平的敏感性次之(LOEC<2 mg·L-1)。

芘污染对马氏珠母贝(Pinctada martensi)D型面盘幼虫发育的影响

多环芳烃(PAHs)是一类广泛存在于环境中的持久性有机污染物,大多具有潜在毒性、致癌性及致畸诱变作用。选取马氏珠母贝(Pinctada martensi)作为模式动物,研究芘对马氏珠母贝D型面盘幼虫发育的影响。将马氏珠母贝D型面盘幼虫暴露于不同浓度(2、4、8、16和32μg·L-1)芘(pyrene)中,在暴露后第12、24、36、48、60、72和84小时,分别测定其死亡率和畸形率,并观察形态学的变化。结果表明,芘对D型面盘幼虫的发育有显著影响,同一浓度组的死亡率与时间呈正相关。在2～32μg·L-1浓度范围内,不同暴露时间段,死亡率与浓度呈正相关。芘暴露对马氏珠母贝D型面盘幼虫的形态也有显著影响,随着芘浓度的增大幼虫畸形的比例增高,并呈现明显的剂量-效应关系,其中8和32μg·L-1浓度组的响应最敏感。同时,芘暴露对马氏珠母贝D型面盘幼虫的半数致死浓度(LC50)随着时间的推移逐渐降低,60h后趋于稳定,LC50值为43.50μg·L-1。研究结果表明,芘暴露能影响马氏珠母贝D型面盘幼虫的发育,并可能对其种群结构产生不利影响。

珠母贝糖胺聚糖的结构初探及其生理活性

以马氏珠母贝全脏器为原料提取、纯化后所得的珠母贝糖胺聚糖PG2 - 3- 2 ,经醋酸纤维素薄膜电泳显示其迁移率相对接近于 6 -硫酸软骨素 (C - 6 -S) ,红外光谱类似于C - 6 -S。抗肿瘤试验结果显示 :PG2 - 3- 2对体内S180肉瘤和艾氏腹水癌可显著增敏临床抗癌药的抑瘤作用 ,抑瘤率分别达 6 1.96 %与 46 .3%。并有抗凝血作用。

珠母贝糖胺聚糖的纯化及其化学性质

珠母贝糖胺聚糖粗制品经吸附、等电点沉淀、醇沉、溴化十六烷基三甲铵（ＣＴＡＢ）络合等法进行分离纯化，得一糖胺聚糖级分。经醋酸纤维素薄膜电泳显示为单一区带。化学组成分析表明：该级分氨基已糖含量较高（７１．３％），其中以氨基半乳精为主（５９％），含有少量的已糖醛酸，含硫酸基、半乳糖、岩藻糖。元素分析表明其碳、氢、氮、硫的含量分别为３７．７％、５．８％、５．８％、３．０％。对级分的残余氨基酸分析表明，８４．２％氨基酸已被清除。

马氏珠母贝生长性状的相关分析

对马氏珠母贝(Pinctadamartensi)不同生长时期的壳长、壳高、壳宽和活体质量进行了一年多的跟踪测量。分析表明,在不同生长时期,其4个性状的两两间的相关系数均达到极显著水平(P<0.01),但其相关系数大小排列顺序存在差异,8次测量的平均相关系数大小依次为壳高-壳长>壳宽-体质量>壳高-体质量>壳长-体质量>壳长-壳宽>壳高-壳宽。在不同生长时期,活体质量对壳高、壳宽的偏回归系数均极显著(P<0.01),而对壳长的偏回归系数在第1,3,7,15个月时不显著(P>0.05)。该研究的结果可为珍珠贝的选育种的重要目标性状的确定提供理论指导。

珠母贝氨基多糖的分离纯化及其抗肿瘤活性的初步研究

探讨珠母贝氨基多糖的分离纯化及其抗肿瘤活性。马氏珠母贝全脏器经胰酶和枯草杆菌蛋白酶双酶水解、醇沉后得到氨基多糖粗品(CPG),再经DEAE-52-纤维素柱纯化,并采用MTT法检测其体外抗肿瘤活性。结果表明:CPG和经DEAE-52-纤维素柱纯化级分GAG-1,GAG-2中总氨基己糖的质量分数分别为45.9%,56.5%和59.2%,级分GAG-1硫酸基的质量分数高达13.8%;体外抗肿瘤试验表明CPG,GAG-1和GAG-2具有抑制肿瘤细胞生长的作用,对HL-60细胞的抑制率分别为54.6%,50.0%和35.4%,且能显著增敏化疗药物5-Fu抑制肿瘤细胞的作用,其中GAG-1为主要的活性成分。

合浦珠母贝二倍体、三倍体和非整倍体群体的基因杂合度与生长比较

采用淀粉凝胶电泳方法对合浦珠母贝Pinctadamartensi(D.)雌性三倍体与雄性二倍体交配,细胞松弛素B抑制其受精卵第一极体释放产生的二倍体、三倍体及非整倍体3个群体进行了同工酶研究。二倍体、三倍体及非整倍体群体在6个多态位点的平均基因杂合度分别为0.255±0.087,0.286±0.097,0.275±0.089,三倍体的杂合度高出二倍体约12%,表明多倍体诱导能增加诱导群体的杂合度。但在单个位点上,三倍体的杂合度不一定高于二倍体;在各自群体内,平均杂合位点数与生长间无明显的相关性,单个位点上的杂合子也未完全表现出其生长大于纯合子,且差异不明显(p>0.05)。因此,合浦珠母贝三倍体的快速生长难以完全用杂合度增高假说解释,只能说明诱导处理能使三倍体的杂合度增高,而能量再分配和"巨型性"可能对其快速生长起着不可忽视的作用。非整倍体群体的杂合度高于二倍体群体,但其生长却小于二倍体,其原因可能是染色体的增减对机体的生长有一定的影响。

马氏珠母贝全脏器提取物糖胺聚糖抗肿瘤作用的实验研究

目的 :观察马氏珠母贝 (pinctadamartensis )全肉提取物糖胺聚糖精提物 (glycosaminoglycan ,GAG)或粗提物 (coarseglycosaminoglycan ,CGAG)对几种肿瘤的作用。方法 :用昆明种小鼠 ,分别观察GAG和CGAG对体内几种肿瘤的抑瘤率、生命延长率、与 5 FU或替加氟的协同作用 ,及其对体外培养HL 6 0细胞的杀伤作用。结果 :糖胺聚糖粗、精提取物分别对体内S180肉瘤和艾氏腹水癌 (EAC)有显著增敏 5 FU或替加氟的抑瘤作用 ,抑瘤率分别达 6 1.96 %或4 6 .30 % ;糖胺聚糖精提物对S180肉瘤生命延长率影响明显 ,生命延长率为 14 .16 % ;糖胺聚糖粗提物(1.0g·L- 1或 0 .1g·L- 1)对体外培养HL 6 0细胞杀伤率达 38.6 7%或 2 5 .6 4%。结论 :糖胺聚糖粗、精提物分别对体内S180肉瘤和EAC有显著增敏 5 FU或替加氟的抑瘤作用 ,并有一定的提高生命延长率的作用 ,对体外培养HL 6

芘暴露对马氏珠母贝鳃和肝胰腺抗氧化酶活性的影响

在实验生态条件下,采用生态毒理学方法,选用海洋环境中常见的有机污染物多环芳烃芘(Pyrene),以马氏珠母贝(Pinctada martensi)为实验材料进行毒理实验。研究了芘不同质量浓度(8、16、32和64μg·L-1)、不同时间(7,10 d)的胁迫对马氏珠母贝鳃和肝胰腺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)3种抗氧化酶活性的影响。结果表明:3种酶在不同组织和不同胁迫时间的敏感性有所差异,在芘胁迫马氏珠母贝第7天,鳃组织中SOD、POD、GPx 3种酶活性主要表现为诱导现象,高质量浓度组对3种酶活性均具有极显著诱导作用(p<0.01),而芘胁迫对肝胰腺3种酶活性的影响主要表现为抑制作用,且POD酶活性表现最敏感,在较低浓度组就被显著抑制(p<0.01);到染毒第10天,鳃组织中SOD、GPx两种酶诱导作用明显,POD诱导现象不显著(p>0.05),肝胰腺中3种酶活性与对照组相比诱导明显,并表现出一定的剂效关系。两种组织中SOD和GPx活性的变化具有一定的同步性。通过比较最低可观察效应质量浓度(LOEC),发现在第7天,鳃组织中敏感性强弱表现为SOD=POD>GPx,肝胰腺中表现为POD>GPx>SOD,而到第10d,两组织中敏感性又分别表现为GPx>SOD>POD,GPx=SOD>POD。因此,在较短的暴露时间,POD酶活性可作为芘胁迫对马氏珠母贝的生物标志物,而对于较长时间的染毒实验,可选用GPx酶作为芘胁迫对马氏珠母贝的生物标志物以监测海洋环境芘污染。

珠母贝全脏器中糖胺聚糖粗提物的制备及其生理活性初探

以马氏珠母贝 ( Pinctada martensis( Dunder) )全脏器为原料 ,经丙酮脱脂、酶解、脱色、醇沉、干燥后 ,得糖胺聚糖粗制品。用正交试验优选出酶解与醇沉条件。该糖胺聚糖粗提物对体外培养 HL - 60细胞有一定杀伤作用。

合浦珠母贝代谢产物对异枝麒麟菜生长的促进作用

于1995年4月间在海南省三亚市、陵水县分别采集合浦珠母贝和异枝麒麟菜并进行混养实验，测定贝释放的三氮（NH4－N，NO3－N，NO2－N）以及藻类对贝释放的三氮的吸收及其生长，以期探讨合浦珠母贝代谢产物促进异枝麒麟菜生长的原因。结果表明，贝释放物中以NH4－N为主，NO3－N次之，NO2－N含量较少；藻对三氮的吸收亦依此顺序递减。实验组藻体的生长速率明显高于对照组的，在模拟实验组中，通过加入无机氮使水体中NH4—N，NO3－N，NO2－N浓度与实验组贝释放后的浓度相同，藻体生点速率接近实验组的。本结果直接证明了贝释放的三氮是促进藻体快速生长的主要原因。另一方面，藻类吸收了贝类代谢产物，也优化了养殖区的生态环境。

合浦珠母贝两个野生种群的生化遗传变异

用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直平板电泳技术测定了大亚湾和北部湾合浦珠母贝Pinctadamartensi野生种群12种同工酶26个基因座位的遗传变异。结果表明,两个种群的平均杂合度分别为0.1243±0.0377和0.0999±0.0441,与已报道的珠母贝属的其他种很接近。两个种群的杂合子缺失系数分别为-0.278和-0.346;遗传相似度(I)和遗传距离(D)分别为0.9842和0.0159;基因分化系数GST为0.0253,表明2个种群之间有较强的基因流。

苯并[a]芘对马氏珠母贝肝组织抗氧化酶活性的影响

为揭示不同浓度苯并[a]芘(B[a]P)对海洋贝类的生态毒理效应,将马氏珠母贝(Pinctada martensi)暴露于不同浓度(1、4和8μg.L-1)B[a]P中,检测暴露3、7和10d后,B[a]P对马氏珠母贝肝组织抗氧化酶(超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽硫转移酶GST和过氧化氢酶CAT)活性的影响。结果表明:暴露时间3d时,随着B[a]P浓度的增加,SOD活性无明显变化,GST的活性被激活,在7d和10d受到抑制,GST活性表现为抑制,并表现出一定的剂量-效应关系,而CAT的活性在染毒后第7天受到激活;暴露时间10d时,SOD活性增加,GST活性和CAT活性均受到抑制。B[a]P暴露时间相同,GST活性和CAT活性变化趋势基本相似。B[a]P浓度相同(1和4μg.L-1)时,随着暴露时间的延长,SOD活性无明显变化,GST的活性受到抑制,CAT的活性表现为先激活后抑制的趋势。另外,相对于SOD活性,GST和CAT的活性变化可以更好地反映B[a]P对马氏珠母贝胁迫的毒性效应。

珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤作用初步研究

目的：初步探讨珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤作用。方法：采用MTT法检测珠母贝糖胺聚糖对人宫颈癌Hela细胞、小鼠白血病L1210细胞和人慢性粒细胞白血病K562细胞生长的抑制作用。采用动物体内模型检测马氏珠母贝糖胺聚糖对荷L1210小鼠生命延长率的影响。结果：珠母贝糖胺聚糖PGI、PGII在25～100μg·mL^-1浓度范围内对三种肿瘤细胞有显著抑制作用。在100μg·mL^-1时PGI、PGII对小鼠白血病L1210细胞作用最强，抑制率分别达到48．2％与40．4％；PGII与抗癌药物（5-Fu、DDP）合用时对人宫颈癌Hela细胞、小鼠白血病L1210细胞有增敏作用；珠母贝糖胺聚糖具有延长荷L1210小鼠生命的作用，其中100mg·kg。剂量组的生命延长率达19.3％。

苯并[a]芘对马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤的研究

通过单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)研究了苯并[a]芘(B[a]P)对马氏珠母贝(Pinctada martensi)血淋巴细胞DNA的损伤。结果显示,在相同暴露时间内,不同质量浓度的B[a]P均能引起马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤。4μg.L-1 B[a]P处理组DNA含量、彗尾长度和Olive尾矩均最大,分别为34.39%、281.73和60.31μm。随着暴露时间的延长,彗星尾长明显增加,表现出明显的时间-效应关系,而DNA含量和Olive尾矩没有呈现出规律性变化。此外,在不同的染毒时间内,对照组和各处理组之间均存在显著差异(P<0.05),3个指标具有很好的一致性。研究表明,彗星试验是检测B[a]P对马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤的一种有效手段,马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤可作为指示B[a]P污染的一种有效生物标志物用于早期预警监测。

马氏珠母贝红色壳家系不同世代遗传变异的SRAP分析

利用SRAP(sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)标记对马氏珠母贝红色壳家系第一代到第三代(F1、F2、F3)及回交家系(BC1)的遗传变异进行了分析。7对SRAP引物共产生63条扩增带,其中多态性条带55条,平均每对引物组合产生7.86条多态标记。在F1,F2及F3三代中,Shannon信息指数和Nei氏基因多样性指数显示世代群体的遗传多样性呈下降趋势,但差异并不显著(P>0.05)。随着世代的增加,相邻世代群体之间的遗传分化有逐渐降低的趋势,而世代内遗传相似性逐渐增加。BC1与F1的遗传相似度高于F3与F1间,表明回交能使后代个体更趋向轮回亲本。

马氏珠母贝饥饿补偿生长的初步研究

采取饥饿处理时间不等(3、6、9和12d)、但总持续时间相等的方法研究马氏珠母贝Pinctada martensi(Dunker)稚贝在饥饿处理后的生长和存活。结果表明,S12组(饥饿12d)的存活率最低,恢复期的壳长和体重最小,表明饥饿强度大会对其生长和存活造成较大的影响;饥饿处理后的稚贝都表现出补偿生长现象,S9组(饥饿9d)的特定生长率最高,S3组(饥饿3d)的最低,但饥饿组间的差异不明显,其壳长和体重大小排列为S3>S6>S9>S12,恢复期延长,其生长恢复到正常水平。

苯并[a]芘对马氏珠母贝鳃组织抗氧化酶活性的影响

将马氏珠母贝(Pinctada martensi)暴露于不同质量浓度(1、4和8μg.L-1)苯并[a]芘B[a]P中,检测暴露后第3、7和10天后,马氏珠母贝鳃组织抗氧化酶(超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽硫转移酶GST和过氧化氢酶CAT)对苯并[a]芘胁迫的生态毒理效应。结果表明:暴露时间为3、7 d时,SOD活性无明显变化,随着暴露时间的延长,SOD活性在第10天时被激活;在胁迫初期,GST活性被激活,随后表现出逐渐降低的趋势,在暴露后10 d,不同质量浓度组GST活性变化趋于稳定。当暴露质量浓度相同时,表现出明显的时—效关系;而CAT活性在第7天被激活,随着时间的延长,高质量浓度(4和8μg.L-1)组表现出先升高后下降的趋势,并表现出一定的时-效关系。SOD、GST和CAT均可作为B[a]P污染的生物标志物,活性变化相对于SOD,GST和CAT对B[a]P的胁迫更加敏感。

马氏珍珠贝肉固体发酵制曲条件的优化

以马氏珍珠贝为米曲霉制曲原料,蛋白酶活力为指标,研究了珍珠贝蒸煮条件、曲料碳源、曲料初始水分含量、培养温度、培养时间对成曲中性和酸性蛋白酶活力的影响。结果表明,米曲霉珍珠贝固体发酵制曲的最优条件为:珍珠贝肉121℃蒸煮10 min、曲料初始水分51.89%(m/m)、曲精接种量0.5%(m/m)、培养温度32℃、培养时间46 h、珍珠贝肉:面粉=3:1(m/m)。在此条件下,珍珠贝肉成曲的中性蛋白酶活力可达1494 U/g。成曲在53℃,pH 7.0,料水比1:2.5,酶解36 h,酶解液蛋白回收率可达66.83%,水解度为63.42%,酶解产物鲜甜味突出。

珠母贝糖胺聚糖PG-Ⅱ诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:探讨珠母贝糖胺聚糖PG-II诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡,从而抑制其增殖。方法:MTT法检测珠母贝糖胺聚糖PG-II对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。倒置显微镜、荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学特征,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂片段,流式细胞仪定量检测细胞凋亡的百分率及对其细胞周期的影响。结果:MTT法显示PG-II可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖。倒置显微镜和荧光显微镜形态学观察可见HeLa细胞凋亡的形态明显变化。琼脂糖凝胶电泳显示PG-II作用HeLa细胞24h,出现分子质量为200bp到2000bp不等的细胞凋亡的特征性DNA梯状条带。流式细胞术测试表明:PG-II可使HeLa细胞阻滞于G1期,剂量为100mg/L作用24h阻滞作用最明显,凋亡指数为42.6%。结论:珠母贝糖胺聚糖PG-II可能通过诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡而抑制其增殖。