β淀粉样蛋白受体PirB对小鼠星形胶质细胞增殖及反应性增生的影响

目的观察β淀粉样蛋白(Aβ)受体PirB对小鼠星形胶质细胞增殖和反应性增生的影响。方法培养小鼠原代星形胶质细胞,将细胞分为对照组、Aβ组、Aβ+0.2μmol/L PEP组、Aβ+0.4μmol/L PEP组、Aβ+Fluspirilene组、Aβ+GFP-LV组和Aβ+mPirB-LV组。分别采用PirB的可溶性胞外段PEP或PirB抑制剂Fluspirilene处理星形胶质细胞,抑制内源性PirB受体;或采用慢病毒转染过表达PirB基因,其后给予Aβ1-42寡聚体处理。采用RTCA和EdU法观察细胞增殖情况,Real-time PCR检测星形胶质细胞反应性增生相关S-100钙结合蛋白B(S-100β)、波形蛋白(Vimentin)、巢蛋白(Nestin)、淀粉样前体蛋白(APP)的mRNA表达水平,Western blotting检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平。结果RTCA法检测结果显示,给药后各组标准化细胞指数(NCI)值均骤降,其后逐步升高并趋于平稳。EdU染色结果显示,与对照组比较,Aβ组星形胶质细胞增殖活性明显增强(P<0.05);与Aβ组比较,Aβ+0.2μmol/L PEP组、Aβ+0.4μmol/L PEP组和Aβ+Fluspirilene组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01或P<0.001)。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,Aβ组GFAP、S-100β、Vimentin、Nestin、APP和PirB的mRNA表达量均明显增高(P<0.05);与Aβ组比较,Aβ+0.4μmol/L PEP组GFAP、S-100β、Vimentin、Nestin、APP和PirB的m RNA表达量均明显下降(P<0.01);与Aβ+GFP-LV组比较,Aβ+mPirB-LV组GFAP、S-100β、Vimentin、Nestin、APP和PirB的mRNA表达量均明显增高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Aβ组GFAP表达明显增高(P<0.05);与Aβ组比较,Aβ+0.4μmol/L PEP组GFAP表达明显下降(P<0.05)。结论PirB是调节星形胶质细胞反应性增生和增殖的上游分子,抑制星形胶质细胞PirB受体可能是治疗阿尔茨海默病的潜在方法。

以PirB为靶点治疗中枢神经再生的研究进展

哺乳动物中枢神经损伤后轴突再生、突触可塑性和神经功能恢复存在障碍的主要原因之一是由于中枢神经系统存在抑制神经再生的抑制因子和抑制因子受体。Nogo、髓磷脂相关蛋白（myelin—associated glycoprotein，MAG）和少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白（oligodendrocyte myelin glycoprotein，OMgp）三种神经抑制因子通过与神经元细胞膜上的Nogo受体（Nogo receptor，NgR）结合，发挥抑制神经生长的作用。

海马内注射LPS后诱导大鼠皮质星形胶质细胞活化和PirB的表达

目的:探讨海马内注射LPS(lipopolysaccharide,LPS)后,大鼠皮质神经元和星形胶质细胞PirB(paired-immunoglobulin-like receptor B)的表达变化。方法:成年SD大鼠,分为对照组和实验组,用免疫组织化学法检测大鼠脑皮质PirB的表达及星形胶质细胞GFAP的表达变化,免疫荧光双重标记技术,观察星形胶质细胞与PirB阳性细胞的共存。结果:PBS注射的对照组动物脑皮质Ⅴ层内可见PirB阳性神经元样细胞,呈圆形、卵圆形和锥体形,免疫反应产物呈棕色、主要位于细胞膜上;海马内注射LPS 30 d后,PirB阳性神经元样细胞和PirB阳性神经胶质样细胞主要分布于皮质Ⅳ、Ⅴ层,免疫反应产物位于胞质和突起内;另外,可见大鼠梨状皮质、内嗅皮质内GFAP阳性星形胶质细胞明显被激活,表现为细胞胞体相对增大,突起变粗。PirB分别和MAP-2、GFAP、CD11b免疫荧光双重标记染色显示:PirB和MAP-2阳性神经元的胞体存在共定位;PirB与GFAP阳性染色存在部分共定位,但未见PirB与CD11b阳性染色双标细胞。结论:LPS能诱导大鼠皮质星形胶质细胞活化和PirB蛋白表达上调,而且部分活化的星形胶质细胞表达PirB,PirB可能参与脑内炎症突触可塑性改变和学习记忆功能缺失的免疫调节。

虾源副溶血性弧菌PirB蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

用杆状病毒表达系统表达虾源副溶血性弧菌编码蛋白PirB的重组蛋白,用SDS-PAGE、Western blot对其进行鉴定,纯化后的PirB重组蛋白免疫Balb/c小鼠后进行细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,用ELISA方法对单克隆抗体进行测定。结果发现,共筛选到7株能够稳定分泌抗PirB蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,小鼠腹水的效价最高效价达到1∶2.56×10^(6),制备的单克隆抗体可以特异性识别PirB蛋白,表明成功制备了虾源副溶血性弧菌PirB蛋白单克隆抗体,为虾源副溶血性弧菌引发的疾病诊断奠定了基础。

脑出血模型大鼠PirB和NogoA表达与神经功能缺损

背景:NogoA和PirB是髓鞘相关抑制因子及受体,在多种中枢神经系统损伤模型中表达明显增高,且起着抑制轴突再生和阻碍神经功能恢复的作用,脑出血遗留严重持久的神经功能障碍可能与二者有关。目的:通过构建大鼠脑出血模型,探讨PirB和NogoA蛋白表达与神经功能缺损的关系。方法:健康雄性SD大鼠75只,随机分为假手术组(n=25)和脑出血组(n=50),按取材时间点不同分为12 h及1,3,7,14 d组,假手术组大鼠不做任何处理,脑出血组大鼠以自体鼠尾不凝血经改良二次注入法建立脑出血模型。各时间点大鼠进行神经功能缺损评分后深度麻醉断头取脑,采用Western blot检测PirB和NogoA蛋白的定量表达,免疫荧光观察PirB定位表达。结果与结论:①PirB可表达于成年健康大鼠的神经元及星形胶质细胞的胞体和突起;②脑出血组各时间点PirB和NogoA表达较假手术组明显增加,差异有显著性意义(P<0.05),在脑出血后第3天达到高峰,持续至14 d表达仍较高;③脑出血组PirB和NogoA的表达与神经功能评分呈负相关关系;④结果表明,PirB和NogoA均可表达于健康成年大鼠脑组织中,脑出血后PirB和NogoA表达明显上调并抑制轴突再生,从而阻碍神经功能的恢复。

PirB蛋白在中枢神经损伤修复中的作用

中枢神经系统损伤后再生困难的一个重要原因是因为髓鞘中存在与其相关的神经生长抑制性因子,而Pir B蛋白是新发现的这些因子的共同受体。许多研究发现Pir B在中枢神经系统中广泛表达,并参与调控神经元发育、生长导向及可塑性等作用,阻抑Pir B功能后存在促进中枢神经系统神经再生修复的作用。深入了解Pir B的功能可能为神经再生带来新的希望。

PirB通过突触可塑性介导学习记忆的调控作用

成对免疫球蛋白样受体B(paired immunoglobulin-like receptor B,PirB)作为中枢微环境中的髓鞘相关抑制因子及主要组织相容性复合体I的共同受体,在中枢神经系统损伤后可抑制轴突再生,且对突触可塑性具有明显的调节作用。在正常情况下,PirB参与的抑制信号有助于平衡学习和记忆等基本大脑功能所需的稳态,而在损伤状态下这种抑制效应则会影响突触可塑性,导致神经元回路的永久性损伤。综述了PirB的生物学功能并在此基础上深入探讨了PirB介导突触可塑性调控学习记忆的作用机制,为认知及精神障碍类疾病的预防与治疗提供了理论依据。

PirB蛋白在正常成年小鼠神经组织中的表达

目的观察PirB蛋白在正常成年小鼠视神经、视皮质、小脑、脊髓及坐骨神经中的表达。方法12只健康成年BALB／c小鼠采用随机数字表法分为两组，每组6只，分别用免疫组织化学及Western blot方法观察视神经、视皮质、小脑、脊髓及坐骨神经PirB蛋白的表达。结果视神经、视皮质、小脑、脊髓切片中PirB蛋白均表达阳性，阳性信号位于胞体，部分阳性细胞可见突起。坐骨神经切片中PirB蛋白均表达阴性。Western blot结果示视神经、视皮质、小脑、脊髓组织均有PirB蛋白阳性条带，坐骨神经无明显条带，PirB蛋白表达量在视皮质中相对较高（P〈0．05），在视神经中相对较低（P〈0．01）。结论PirB蛋白在视神经等中枢神经中阳性表达，提示PirB蛋白可能与视神经再生能力低下密切相关。

对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌双重微流控荧光定量PCR快速检测技术的建立与应用

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是对虾养殖过程中最常见、最严重的疾病,给对虾养殖造成重大经济损失。AHPND病原种类多、基因型复杂,现有的针对不同病原的检测技术目标导向较弱、检测成本高、时间消耗长,对虾健康养殖亟待开发AHPND的精准快速诊断技术。本研究针对AHPND病原体携带编码一种二元毒素pirA和pirB大型质粒的遗传共性,基于pirA和pirB基因设计特异性引物并建立微流控荧光定量PCR检测方法。该方法对致病基因pirA和pirB特异性强、灵敏度高,最低检测限分别为5.43×10^(0)和4.31×10^(1)copies/μL,样品平均检测时间为26min左右。为进一步评估该方法在实际应用中的准确性,以含有pirA和pirB毒性质粒的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行人工感染实验。结果表明,感染后的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃丝、肝胰腺、肠道和肌肉等组织随时间的推迟均能检测到pirA和pirB;从感染2h的结果来看,pirB比pirA检出率更高。此外,致病因子pirA和pirB比toxR的检出率更高,更适合对AHPND致病原的检测。本研究建立的微流控荧光定量PCR检测的方法具有快速、灵敏、高通量、污染少、现场检测、一体化集成等优点。该技术不仅适用于实验室,更符合养殖基层的现场快速检测需求,为及早认知疾病发生风险和病害精准防控提供了新的技术手段与理论支撑。

致对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立一种对虾急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease)病原菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)荧光定量PCR检测方法,对该病进行快速检测。【方法】根据副溶血弧菌基因保守序列设计特异性引物和探针,经优化反应体系及条件,建立检测VpAHPND的荧光定量PCR方法;以重组质粒为标准品制作标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】该方法定量范围宽,起始模板浓度范围为2.3×10^(1)~2.3×10^(7)拷贝/μL时,标准曲线具有良好的线性关系;最低检测限为2.3拷贝/μL,与对虾其他病原菌及病毒无交叉反应,重复试验变异系数为0.45%~0.69%,可在1 h内完成样品检测;对临床对虾样品的检测结果表明,该方法与世界动物卫生组织(OIE)推荐的套式PCR法检测结果一致。【结论】应用TaqMan探针建立的检测VpAHPND的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,可有效用于临床对虾样品的VpAHPND检测。

对虾急性肝胰腺坏死病病原菌RAA检测方法的建立

针对对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)病原菌检测,建立了一种重组酶介导等温扩增(recombinase acid amplification,RAA)检测方法。根据pVA1质粒保守序列设计特异性探针和引物,分别以不同稀释浓度梯度的含pirB靶序列的重组质粒pMD18-T-pirB为模板进行荧光RAA法检测,评价其灵敏度;对溶藻弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等病原菌进行荧光RAA法检测,评价其特异性;取8.2×10^(3 )copies/μL浓度的pMD18-T-pirB重组质粒进行荧光RAA试验,评价其重复性;对人工感染样品用RAA方法进行应用试验,以水产行业标准(SC/T 7233—2020)推荐的荧光探针PCR法作为平行对照。结果显示:该方法可对pirB靶序列基因片段进行有效扩增,最低检出限为8.2×101 copies/μL,与其他病原菌无交叉反应,重复试验变异系数为0.41%,与荧光探针PCR方法符合率为100%。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好、操作步骤简单,可用于对虾样品的AHPND现场检测。本研究为AHPND快速检测提供了技术支撑。

海上示位标天线设计

示位标天线是确保反潜作战和海上搜救信息实时有效传输的关键。分析海上示位标天线的基本电参数,提出设计海上示位标天线的物理要求和技术要求,针对示位标使用频段设计两种适宜海上作业环境的示位标天线。

基于GO的酵母膜系统蛋白相互作用规律研究

引进描述蛋白质相互作用倾向性参数(PIRB),基于GO(Gene Ontology)和相关的数据库中蛋白质功能注释,对酿酒酵母部分膜蛋白相互作用规律进行了研究,构建了基于PIRB的蛋白质相互作用网络图.结果表明各类膜蛋白质之间的相互作用具有明显的偏向性.对这种偏向性的生物学含义作了简要探讨.

海洋环境对示位标回传信号的影响分析

分析海洋大气、海面低空波导、海浪等海洋环境对示位标回传信号的影响,以便准确选择使用回传信号频率,对确保海上示位标信息有效回传有重要意义。

近海障碍物对示位标回传信号的影响分析

分析海上示位标信息回传路径上的海面大型船只、岛屿、海岸高地和缓慢斜坡等障碍物的影响,有针对性地选取和使用回传信号频率,能确保海上示位标信息实时、有效回传。

Nogo-A及其受体在中枢神经系统发育过程中作用及机制的研究进展

Nogo-A及其受体在成年哺乳动物的中枢神经系统(CNS)中,尤其是在中枢神经系统损伤及修复过程中的作用及机制已经被广泛而深入的研究,但是它们在CNS发育中的扮演的角色却了解甚少。新近研究表明,Nogo-A在CNS发育过程中神经前体细胞分化及迁移,轴突的生长及可塑性的变化以及少突胶质细胞前体细胞分化和成髓鞘化等过程中发挥着重要的作用。

以髓磷脂相关抑制因子及其受体为靶点的脊髓损伤免疫治疗策略研究

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)往往导致患者下肢活动功能受限,甚至瘫痪,降低患者生活质量,且治愈率低。髓磷脂相关抑制因子(myelin associated inhibitors,MAIs)是抑制受损中枢神经系统(central nervous system,CNS)再生修复的一个重要因素。对MAIs及其信号通路的干扰能有效逆转CNS神经再生抑制信号,促进脊髓损伤后轴突的再生。MAIs抑制轴突再生信号通路的发现及其深入研究为损伤脊髓的免疫治疗提供了充分的理论依据和研究靶点。将对抑制神经再生信号通路中MAIs及其受体的生物学功能新进展以及以此为治疗靶点设计的脊髓损伤免疫治疗策略作一综述。