同时性多发性垂体神经内分泌肿瘤13例临床病理学分析

目的探讨同时性多发性垂体神经内分泌肿瘤/腺瘤(multiple synchronous PitNET/adenomas of distinct lineages,MSPs)的不同谱系肿瘤细胞组成部分,并进行准确的组织学分型为确定手术后的随访计划和辅助治疗提供重要依据。方法收集855例垂体神经内分泌肿瘤临床资料,按照新版WHO标准重新分类,对13例被明确诊断为MSPs的临床病理特征进行回顾性分析,运用免疫组化EnVision两步法分析PIT-1、SF-1、T-PIT、GH、PRL、TSH、LH、FSH、ACTH等表达,并复习相关文献。结果(1)患者年龄39~68岁,中位年龄55岁,女性患者7例;男性患者6例;(2)影像学表现:肿瘤最大径1.2~3.8 cm(平均2.5 cm)。13例均为大腺瘤,影像学均无法评估MSPs与单一谱系垂体神经内分泌肿瘤(pituitary neuroendocrine tumors,PitNETs);(3)临床表现:3例出现高泌乳素血症,均包含分泌PRL的PitNETs成分,1例为未成熟PIT-1多激素细胞瘤、1例为致密颗粒型泌乳素细胞瘤及1例嗜酸性干细胞瘤。1例患者为库欣病,包含Crooke细胞瘤成分;2例检测到ACTH升高,其中1例包含促肾上腺皮质细胞瘤成分。在无激素过量证据的2例患者中,均含有促性腺激素细胞瘤成分;(4)组合形式:两种细胞谱系组合11例(SF-1谱系与PIT-1谱系组合5例;T-PIT谱系与PIT-1谱系组合4例;零细胞瘤与PIT-1谱系1例;未明确谱系多激素细胞瘤与SF-1谱系1例);三种细胞组合2例(零细胞瘤、PIT-1谱系与T-PIT谱系);其中13例病例均为PIT-1谱系肿瘤,46.2%(6/13)为促性腺激素细胞瘤,38.5%(5/13)为泌乳素细胞瘤;(5)10例患者组合中存在高风险谱系肿瘤:3例未成熟PIT-1多激素PitNETs、1例Crooke细胞PitNETs、1例嗜酸性干细胞PitNETs、3例零细胞PitNETs及4例静默型稀疏颗粒型促肾上腺皮质激素PitNETs;其中2例为两种高风险亚型肿瘤组合。结论本中心MSPs均为大腺瘤,其发生率虽仅为PitNETs的1.5%,但2/3病例存在高风险谱系肿瘤成分,垂体细胞谱系转录因子与腺垂体激素的使用对于区分和明确MSPs不同成分具有重要作用。

基于Cat.1技术与阵列式位移计的深基坑监测方法与应用

深基坑开挖的危险系数高,容易引发安全事故,需要采用有效的地质灾害监测系统。为实现深基坑施工阶段变形的有效监测与预警,提出了采用基于Cat.1技术与阵列式位移计的无线自动化监测方法。首先通过与传统的LoRa通信技术对比,分析了Cat.1技术的特点和优势。然后把Cat.1技术与阵列式位移计共同应用于基坑监测,建立了监测系统。最后,以某深基坑监测项目为例,分析了代表性测点的水平位移监测结果。结果表明,所建立的监测系统能够稳定地采集监测数据并上传至监测平台,实时反映基坑测点水平位移变化规律,且监测结果的可解释性高,有助于及时发出预警信号,做好风险防范措施。

猪Pit-1基因的多态性研究

选取7个中国地方猪种和3 个国外引入猪种共473 头,应用PCR SSCP技术在7 个中国地方猪种中检测到1个Pit 1基因第4外显子上的突变;应用PCR RFLP技术在3个国外引入猪种中,扩增长度为1 747 bp的片段中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点。遗传多态性分析结果表明:外显子4上的突变,在7个中国地方猪种中是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中沂蒙黑猪和巴马小型猪处于Hardy Weinberg平衡;北京黑猪、沂蒙黑猪、巴马小型猪、滇南小耳猪和香猪处于中度多态。RsaⅠ酶切多态位点的突变在3个国外引入猪种中也是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中大白猪和杜洛克猪处于Hardy Weinberg平衡;3 个国外引入猪种的多态信息含量均为中度多态。

鸡PIT-1基因57 bp插入/缺失多态与生长和屠体性状的相关研究

垂体特意性转录因子(P itu itary-spec ific transcription factor 1,PIT-1)是重要的组织特异性转录因子,能够调控生长激素(GH)、促甲状腺素β亚单位(TSHβ)和催乳素(PRL)基因的表达,从而在生长发育中发挥重要调节作用。本实验选取鸡PIT-1基因第2内含子的57 bp缺失/插入位点为分子标记,利用华南农业大学“杏花×隐性白洛克”全同胞鸡参考家系材料,研究了该位点与鸡生长和屠体性状的相关性。结果表明,该位点与鸡的第1-7周龄体重相关极显著(P<0.01),与第8周龄体重相关显著(P<0.05),与胸角宽、全净膛、半净膛、翅膀重、胫爪重、小肠长度相关极显著(P<0.01),与胸肉重、腿肉重相关显著(P<0.05);其中A基因(57 bp插入)有利于体重增加和肌肉生长。

PIT-1基因在人、鼠及猪中的研究现状

本文对PIT 1基因在鼠、人及猪中作为生长发育性状候选基因的研究现状作一综述 ,主要包括PIT 1基因与鼠矮小性状、人类综合性垂体激素缺陷症及猪的生长和胴体性状之间的关系 ,并对PIT 1基因在小型猪中的研究前景作一展望。

山羊Myf-5、Pit-1基因多态性与生产性状的关联性分析

用PCR-SSCP和测序技术对河西绒山羊、辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊3个品种共394个个体的生肌决定因子5(Myf-5)和垂体转录释放因子-1基因(Pit-1)进行遗传多态性分析,并研究基因型对体质量和体尺性状的影响。结果表明:Myf-5基因第1外星子在3个山羊品种中未发现多态性。在Pit-1基因第3外星子中检测到1个SNP(A/G),并存在AA和AB 2种基因型,A等位基因为优势等位基因。最小二乘分析结果表明,AA基因型有较高的产绒量和体质量且达到显著水平(P<0.05),而对于体尺性状,基因型间未达到显著水平(P>0.05),但AB基因型个体的表型值明显低于AA基因型,2种基因型在这3个体尺指标的大小排列顺序均为AA>AB。推测Pit-1基因对山羊生长性能存在一定影响,提示AA基因型可作为分子标记用于预测山羊生产性状。

固原本地黄牛及其利杂群体Pit-1基因多态性与育肥性状的关系

为了分析固原本地黄牛及其利木赞牛杂交群体(简称利杂群体)Pit-1基因的多态性与育肥性状的关系,为固原本地黄牛下一步的杂交改良提供理论基础,利用PCR-RFLP技术研究了固原本地黄牛及其利杂群体共178个个体的Pit-1基因多态性,并分析了其与育肥个体育肥性状的相关性。结果表明,451 bp的PCR产物被限制性内切酶HinfⅠ消化后表现出多态性,固原本地黄牛及其利杂群体在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态,等位基因A/B的频率分别为0.3039/0.6961和0.1614/0.8386。与部分育肥性状的相关分析表明,在育肥的初期阶段,BB型和AB型个体的精料料肉比均显著低于AA型个体(P<0.05);7月龄育肥牛BB型个体的胸深显著低于AA型,而胸宽显著高于AA型(P<0.05);育肥牛6~12月龄体长增长量也表现出BB型个体优于AB型的趋势(P<0.05)。初步认为,BB基因型与优良的育肥性能显著相关,对B等位基因的选择有利于优良性状的改良。

香猪PIT-1基因内含子多态性的研究

采用PCR和DNA测序方法,对香猪及对照猪种(上海白猪、大约克夏猪)的PIT-1基因进行了单核苷酸多态性(SNP)分析,并采用RT-PCR方法对3个猪种PIT-1基因的表达水平进行了半定量分析。结果显示:香猪在DNA序列的963位(位于第4内含子)和1429位(位于第5内含子)分别发生G→A突变,而对照猪种在这2个位置未发生突变;香猪PIT-1基因表达水平显著低于上海白猪和大约克夏猪(P<0.05)。结论:香猪第4和第5内含子的两处突变可能会造成PIT-1基因表达量下降,最终可能导致香猪的生长受到影响。

垂体特异转录因子pit-1在垂体瘤中的表达及意义的实验研究

目的检测垂体特异转录因子pit-1在垂体腺瘤中的表达,研究Pit-1与激素水平、肿瘤侵袭性的关系,以探讨Pit-1在垂体瘤发病机制中的作用。方法根据术前激素水平、临床表现及术后病理诊断确定腺瘤类型,依影像学表现、术中所见及硬膜病检结果判断对肿瘤侵袭性分级,用免疫组化和RT-PCR分别测定Pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达。结果Pit-1在GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤中均有表达,与对照组相比,中、高度表达者占此3种腺瘤的78.8%(26/33),无功能腺瘤及ACTH腺瘤中无Pit-1蛋白的表达。pit-1mRNA在全部的GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤和50%(5/10)的无功能腺瘤中有表达,在ACTH腺瘤组中无表达。GH、PRL、GH/PRL混合腺瘤组间pit-1mRNA的表达量差异无显著性,此3组均显著高于无功能腺瘤组(P<0.05)。GH、PRL腺瘤组中pit-1mRNA的表达量与其各自术前的激素水平呈显著正相关。在表达pit-1mRNA的腺瘤中,侵袭性组高于非侵袭性组。结论Pit-1的表达与垂体腺瘤的表型、功能有关,与某些激素(GH、PRL)水平、肿瘤的侵袭性呈正相关,在某些类型(GH、PRL、GH/PRL)的垂体瘤发病机制中起重要作用。

鹅Pit1基因5′侧翼区克隆及序列分析

为研究垂体特异性转录因子(pituitary specific transcription factor 1,Pit1)的启动子及其转录调控机制,试验设计了3对特异性引物,利用Genome Walking技术、克隆测序及序列比对分析,首次从太湖鹅基因组中克隆出长约3.0kb的Pit1基因5′侧翼区序列,使用在线软件(预测侧翼序列元件)对所获序列进行分析,结果发现,Pit1包含2个启动子区域,这2个区域都含有TATA框、CAAT框和转录起始子,但无GC框,并存在一些转录因子结合位点,这些转录因子结合位点可能与潜在调控Pit1基因的转录及其表达机制有关。不同物种间Pit1基因5′侧翼区序列比对分析结果表明,Pit1基因的转录起始点上游-200bp区域保守性较强,可能为启动子的核心序列,且鹅与鸡的同源性最高。上述结果表明,已成功获得了太湖鹅Pit1基因5′侧翼区序列。

猪Pit-1基因第三内含子序列的克隆测序

根据不同物种间同一基因核苷酸序列的保守性及相似性的特点 ,在人和鼠的Pit 1基因第三外显子上设计上游引物 ,而将下游引物设计在猪Pit 1基因第四外显子上。利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,扩增出猪Pit 1基因第三内含子序列 ,并经由酶切及序列同源性比对确认该序列即为猪Pit 1基因第三内含子序列。

鹅Pit-1基因部分序列多态性分析

根据鸡Pit-1 mRNA和基因组序列设计1对引物,以籽鹅、狮头鹅、皖西白鹅、四季鹅、浙东白鹅和朗德鹅6个群体的DNA为模板,扩增鹅Pit-1基因的部分片段。结果发现该片段存在2个插入/缺失突变,共出现3种基因型,分别为AA、AB和BB;与AA基因型相比,BB基因型分别在扩增片段的132和145 bp后插入3和13 bp。所有群体在该突变位点上的等位基因频率均处于哈代-温伯格平衡状态(P>0.05);朗德鹅群体基因型分布与其他5个鹅群体均存在极显著差异(P<0.01);籽鹅和狮头鹅群体内基因型的分布与其他3个鹅群体存在显著差异(P<0.05)。在狮头鹅和朗德鹅群体内,等位基因A为优势等位基因,而在皖西白鹅、四季鹅和浙东白鹅群体内等位基因B为优势等位基因。

IGF-1和Pit-1基因多态性与淮猪新品系生长性状的相关性分析

以淮猪新品系Ⅱ系一世代（190头）、二世代（244头）为试验材料,采用PCR-RFLP方法分别检测IGF-1基因的HhaⅠ酶切位点、Pit-1基因的RsaⅠ酶切位点的多态性,并与生长性状进行相关性分析。结果表明：30~90kg平均日增重、达90kg校正日龄在一世代、二世代、两个世代合并中,IGF-1基因的AA型个体均有优于AB、BB型个体的趋势,但差异都不显著（P＆gt;0.05）;Pit-1基因的DD型个体均有优于CD、CC型个体的趋势,但差异都不显著（P＆gt;0.05）。虽然IGF-1基因、Pit-1基因的不同基因型个体在一世代、二世代的达90kg校正背膘厚的趋势不一致,但是在两个世代合并中以IGF-1基因的AA型个体、Pit-1基因的DD型个体最薄,但差异不显著（P＆gt;0.05）。若将IGF-1基因、Pit-1基因作为生长性状的遗传标记用于淮猪新品系的选育,需要在淮猪新品系Ⅱ系后续世代中扩大样本含量并进行进一步的验证。

多巴胺激动药对大鼠垂体组织表达Pit-1作用的研究

目的研究多巴胺激动药对大鼠垂体组织表达Pit-1的作用。方法成年雄性Wistar大鼠,随机分为3组,催乳素瘤(PRL)组、对照组和诺果宁组,各组按照实验程序操作。8周后处死动物,测定大鼠血清PRL水平;用免疫组化方法显示垂体组织PRL蛋白的表达和分布;用RT-PCR方法检测Pit-1mRNA在两组垂体组织中的表达,以β-actin作为内参照,借助于计算机凝胶成像系统分析表达量。结果诺果宁组大鼠血清PRL水平和垂体重量均明显低于PRL瘤组(P<0.01),Pit-1mRNA水平在诺果宁组较PRL瘤组明显降低(P<0.01)。结论降低Pit-1的表达水平可能是诺果宁抗PRL瘤的重要机制之一。

中药降乳散对大鼠催乳素瘤表达Pit-1的作用

目的研究中药降乳散对大鼠催乳素(PRL)瘤组织表达Pit-1的作用。方法用皮下植入雌激素的方法制备大鼠PRL瘤模型,将成功诱发出PRL瘤的大鼠随机分2组,分别给予安慰剂和中药降乳散灌胃,用药4周后处死动物,垂体称重,用放免法测定血清PRL水平。用反转录-PCR方法分析Pit-1在大鼠PRL瘤组织中的表达量。结果降乳散组大鼠血清PRL水平和垂体重量均明显低于安慰剂组(P<0.001),Pit-1 mRNA水平在降乳散组较安慰剂组明显降低(P<0.001)。结论降低Pit-1的表达水平可能是中药降乳散抗PRL瘤的重要机制之一。

PiT-1在高磷血症导致慢性肾衰竭大鼠血管钙化中的表达

目的观察胸主动脉组织 PiT-1 在高磷血症导致慢性肾衰竭大鼠血管钙化中的表达情况,并探讨其可能机制。方法36 只Wistar 雄性大鼠首先分为假手术组(9 只)和5/6 肾切除组(27 只),普通饮食喂养4 周,建立慢性肾衰竭大鼠模型。之后慢性肾衰竭大鼠给予高磷饮食喂养 1 0 周,同时随机分为①模型组(n=9,NX-HP);②PFA 阻断组(n=7,NX-HP+PFA):高磷饮食同时隔天腹腔注射PFA0.15g/kg;③生理盐水对照组(n=6,NX-HP+NS):高磷饮食同时隔天腹腔注射与PFA 等量的生理盐水。10 周后全部大鼠处死,摘取胸主动脉全段,上段用于组织钙含量检测,中段-80℃冻存行RealtimePCR 和Western 检测PiT-1 和血管钙化标记物Cbf α-1 的表达,下段用10% 甲醛固定后石蜡包埋行VonKossa 染色。同时经腹主动脉留全血检测Pi、Ca,及1,25(OH)2D3。结果慢性肾衰竭大鼠高磷饮食喂养10 周三组血肌酐、血磷、血钙和1,25(OH)2D3水平无差异;PFA阻断组大鼠胸主动脉组织PiT-1 的蛋白及mRNA 表达与模型组和生理盐水对照组比较均明显降低(P <0.001),Cbf α-1 蛋白及mRNA 的表达明显下调(P <0.001),血管钙化程度减轻。结论在慢性肾衰竭高磷环境下,大鼠胸主动脉组织的PiT-1 介导了磷的转运,诱导了Cbf α -1 的表达,促进了血管钙化的发生。

猪PIT-1基因多态性与生长性状的关联分析

目的:研究猪PIT-1基因多态性及其对生长性状的遗传效应,旨在寻找改良猪生长性能的分子标记。方法:采用PCR-RFLP方法检测猪PIT-1基因的单核苷酸多态性(SNP),并分析基因多态性与生长性状的关联性。结果:猪PIT-1基因的Rsa I酶切位点存在多态性。其中,杜洛克猪未检测到AA型,BB基因型频率高于AB型,等位基因B频率高于等位基因A,SNP处于低度多态(PIC<0.25);淮猪新品系未检测到BB型,AA基因型频率高于AB型,等位基因A频率高于等位基因B,SNP处于低度多态(PIC<0.25);杜洛克猪×淮猪新品系未检测到BB型,AB基因型频率高于AA型,等位基因A频率高于等位基因B,SNP处于中度多态(0.25<PIC<0.5)。关联分析表明,PIT-1基因型对猪平均日增重和饲料转化率的遗传效应都未达到显著水平(P>0.05)。结论:杜洛克猪、淮猪新品系、杜洛克猪×淮猪新品系PIT-1基因Rsa I酶位点都存在多态性,但PIT-1基因对猪生长性状没有显著影响。

鹅PIT-1基因启动子区转录调控的研究

为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,PIT-1)启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位。利用前期染色体步移技术扩增得到鹅PIT-1基因的启动子区序列,经PCR扩增,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体(pGL-Basic),制备了一系列启动子缺失体(-1 485/-1bp、-1 293/-1bp、-1 014/-1bp、-775/-1bp、-561/-1bp、-353/-1bp和-206/-1bp),并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转染GH3细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。本试验所克隆的PIT-1基因启动子区具有明显的启动子活性,其中-561/-1bp的启动活性最强,该区域存在有PIT-1、POU3F2、myogenin和GR等多个转录因子结合位点。利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,并且验证了克隆的启动子具有启动活性,找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。

山羊Pit-1基因遗传多态性及与生长性能的相关性分析

以河西绒山羊、陇东绒山羊、辽宁绒山羊和内蒙古绒山羊为研究对象,采用PCR-SSCP和测序技术对Pit-1基因第6外显子进行多态性研究,并分析该基因多态性与山羊体质量和体尺性状的关系.结果表明:Pit-1基因第6外显子存在2个SNPs位点并形成AA、AB、BB、AC和BC 5种基因型,BB为优势基因型.除内蒙古绒山羊外,其他3个山羊群体的基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡状态.最小二乘法分析表明,AB基因型个体的体质量、胸围显著高于BC基因型(P<0.05),其他基因型间差异不显著(P>0.05).Pit-1基因是山羊生产育种应用中的一个有效遗传标记.

Pit-1/Hinf Ⅰ基因PCR-RFLP和鲁西黄牛与利木赞杂交牛生长性状的关联性分析

为了提高鲁西黄牛生长发育水平及产肉性能。利用PCR-RFLP技术研究111头利鲁杂交牛Pit-1基因多态性与体尺生长性状指标之间的相关性。结果表明,群体的Pit-1-HinfⅠ基因座的451 bp的PCR产物被限制性内切酶HinfⅠ酶切后表现多态性,它们的等位基因A、B频率分别为0.32,0.68,不符合Hardy-Weinberg平衡状态。群体Pit-1基因座不同基因型与体尺生长性状指标相关分析的结果表明,群体内AA基因型个体的尻高显著高于群体AB和BB型个体(P<0.01),可作为利鲁杂交牛尻高的候选基因之一;群体内AB基因型个体的髋宽显著高于群体AA和BB型个体(P<0.05);但在头长、额宽、胸围、胸深、胸宽、体斜长、尻长、腰角宽、坐骨结节宽、管围、体高、十字部高、臀端高等指标上均无显著差异(P>0.05)。