鹅Pit1基因5′侧翼区克隆及序列分析

为研究垂体特异性转录因子(pituitary specific transcription factor 1,Pit1)的启动子及其转录调控机制,试验设计了3对特异性引物,利用Genome Walking技术、克隆测序及序列比对分析,首次从太湖鹅基因组中克隆出长约3.0kb的Pit1基因5′侧翼区序列,使用在线软件(预测侧翼序列元件)对所获序列进行分析,结果发现,Pit1包含2个启动子区域,这2个区域都含有TATA框、CAAT框和转录起始子,但无GC框,并存在一些转录因子结合位点,这些转录因子结合位点可能与潜在调控Pit1基因的转录及其表达机制有关。不同物种间Pit1基因5′侧翼区序列比对分析结果表明,Pit1基因的转录起始点上游-200bp区域保守性较强,可能为启动子的核心序列,且鹅与鸡的同源性最高。上述结果表明,已成功获得了太湖鹅Pit1基因5′侧翼区序列。

用商品猪群定位RYR1、PIT1和PRKAG3

利用一个由汉普夏、皮特兰猪等5品种杂交商品群建立了参考家系,采用微卫星标记构建连锁图谱的方法对分别位于6、13、15号染色体的3个基因RYR1、PIT1、PRKAG3进行了定位.结果表明RYR1位于6号染色体的S0087和Sw316之间,PIT1位于13号染色体的Sw225和Sw1056之间,PRKAG3位于15号染色体的Sw946和Sw906之间,与已发表的结果基本一致.为下一步分析这3个基因对经济性状的影响奠定了基础.

鹅垂体特异性转录因子荧光素酶报告基因重组体的构建和鉴定

为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,Pit1)启动子转录调控机制,将获得的Pit1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,构建Pit1基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。本研究利用染色体步移技术扩增鹅Pit1基因的启动子,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,构建含有正确目的基因的报告基因重组体pGL3-Pit1,并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定。通过酶切鉴定及基因测序证明,所克隆的基因产物与预期结果一致,序列无碱基突变。结果,成功构建了含有Pit1启动子基因序列的荧光素酶报告基因真核表达载体,为下一步分析该启动子活性及转录调控机理奠定基础。