MMP-26在人正常胎盘滋养层细胞中的表达及激活素A对其表达的调节

胚胎植入和胎盘形成涉及细胞外基质的降解和重建,以及细胞的增殖、凋亡、迁移和分化,基质金属蛋白酶(MMPs) 是参与这些事件的主要蛋白水解酶系统. MMP-26是近年来发现的MMPs家族的新成员,但其功能所知甚少. 通过半定量RT-PCR、免疫组织化学、荧光免疫细胞化学等手段,发现人胎盘中MMP-26主要定位于绒毛滋养层细胞,在绒毛间质细胞中也有少量表达. 妊娠早期,胎盘中MMP-26表达水平较高,至妊娠中期降至最低,但在足月胎盘中其表达又有显著提高,提示MMP-26可能参与妊娠早期滋养层细胞的侵润和分娩时的胎盘剥离. 体外培养的妊娠早期人细胞滋养层细胞能产生一定水平的MMP-26,而其表达受到激活素A的剂量依赖性刺激,表明滋养层细胞中存在MMP-26表达的自分泌/旁分泌调节.

母-胎免疫调节机制在妊娠高血压综合征病理过程中的作用

目的:分析妊娠高血压综合征(PIH)患者外周血中免疫细胞因子水平变化及滋养层细胞中免疫相关转录因子的基因、蛋白表达情况,探讨母-胎免疫调节机制在妊娠高血压综合征病理过程中的作用。方法:纳入PIH患者50例作为观察组,选择同期分娩的正常妊娠妇女40例作为对照组。ELISA法检测两组孕妇外周血中IFN-γ、IL-4、IL-17及TGF-β水平;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别测定两组孕妇胎盘滋养层细胞中转录因子T-bet、GATA-3、RORC、Foxp3的mRNA及蛋白表达情况。结果:(1)观察组外周血中IFN-γ和IL-17水平明显高于对照组,TGF-β水平明显低于对照组(P<0.05);两组间IL-4水平无明显差异(P>0.05);观察组IFN-γ/IL-4、IL-17/TGF-β比值均明显大于对照组(P<0.05)。(2)与对照组比,观察组T-bet、RORC的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),而GATA-3、Foxp3的mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),T-bet/GATA-3及RORC/Foxp3比值均显著增大(P<0.05)。结论:PIH具有明显的Th1/Th2及Th17/Treg比例失衡现象,其病理机制可能与Th细胞介导的母-胎免疫耐受机制功能紊乱有关。

II型核受体PPARγ和金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在早孕胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨II型核受体的过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9与细胞滋养细胞浸润的关系。方法:采用免疫组织化学、实时RT-PCR和免疫印迹技术检测早孕早期(孕6-8周,A组)和早孕晚期(孕11-12周,B组)绒毛组织中PPARγ、MMP-2和MMP-9mRNA及蛋白的表达。结果:PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2和MMP-9蛋白阳性颗粒主要存在于绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且A组绒毛PPARγ表达量高于B组(P<0.05),而MMP-2和MMP-9表达量在B组高于A组(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,-0.68,P<0.01);且在A组MMP-2表达量多于MMP-9,而B组则MMP-9多于MMP-2,但无显著性差异。结论:PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达实现的,为深入探讨PPARγ及其配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。

人类白细胞抗原G、E在人胎盘组织中的表达及其意义

目的:探讨人类白细胞抗原G、E(HLA-G、E)在人胎盘组织中的表达及意义。方法:用原位杂交及免疫组化法分别检测HLA-G、E mRNA及蛋白质在人正常早孕绒毛组织、晚孕胎盘组织中的表达。结果:在人正常早孕绒毛组织中的绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞及绒毛外滋养细胞(EVCT)内均有HLA-G、E mRNA及HLA-E蛋白质表达,而HLA-G蛋白质仅在EVCT内表达;晚孕胎盘组织中HLA-G、E mRNA及蛋白质表达于蜕膜板内的EVCT及羊膜上皮细胞。结论:HLA-E表达于人正常早孕绒毛组织中所有类型的滋养细胞及晚孕胎盘组织中的EVCT和羊膜上皮细胞。抗人HLA-G单克隆抗体4H84仅能检测出人胎盘组织中EVCT及羊膜上皮细胞内的HLA-G蛋白。

肿瘤坏死因子对人滋养层干扰素α分泌的影响

目的和方法：本文采用人妊娠６～８周胎盘组织块的体外培养方法，通过检测干扰素免疫活性和抗病毒活性研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对人滋养层干扰素（ＩＦＮ）分泌的影响。结果：ＴＮＦα可显著促进人滋养层ＩＦＮα的分泌，并呈剂量和时间依赖关系。同时各浓度的ＴＮＦα还可促进βＨＣＧ的分泌，并呈一定的剂量依赖关系。此外，我们还证明ＩＮＦα可显著抑制人滋养层细胞的生长，而ＴＮＦα则无明显作用。结论：ＴＮＦα可通过促进人滋养层干素α和βＨＣＧ的分泌。

早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物，但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞，而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除角蛋白外，细胞滋养层细胞免疫组化染色均阴性。结论；早孕时三种滋养层细胞在免疫组化方面有其共性，也有各自不同的特点。

解聚素和金属蛋白酶19在人妊娠绒毛和胎盘组织中的表达

目的通过对解聚素和金属蛋白酶19(ADAM19)在人早孕绒毛和胎盘组织中表达的研究,探讨其在妊娠过程中的作用。方法应用免疫组织化学(免疫组化)链霉抗生物素-过氧化物酶法,对23例绒毛及41例胎盘组织中的ADAM19进行检测。结果ADAM19的表达主要集中在滋养细胞的细胞膜、细胞质中和细胞滋养层柱细胞中;早孕绒毛中,ADAM19表达主要集中于细胞滋养细胞膜,在晚孕期胎盘,ADAM19主要表达于合体滋养细胞膜。早孕期绒毛中AD- AM19表达量明显高于中孕期和晚孕期(P<0.01),中孕期和晚孕期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADAM19可能与滋养细胞侵袭功能有关的重要的分子,可能对滋养细胞的浸润和妊娠的维持起重要作用。

MMP-2和MMP-9在早孕胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的探讨MMP-2和MMP-9在早孕胎盘滋养细胞中的表达及意义。方法本研究通过免疫组织化学技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果MMP-2和MMP-9蛋白主要定位在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内，绒毛间质细胞内亦有少量阳性染色，且旱孕早期绒毛滋养细胞中MMP-2表达量高于早孕晚期（P〈0．05），而MMP-9表达量在早孕晚期高于早期（P〈0．05）。结论MMP-2和MMP-9在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用，且在早孕不同时期，二者表达不同，为深入探讨MMPs在滋养细胞浸润机制中的作用提供理论基础。

早孕胎盘组织中PPARγ和MMP-2的表达及意义

目的探讨PPARγ和MMP-2与早孕细胞滋养细胞浸润的关系;方法本研究通过免疫组织化学技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中PPARγ和MMP-2蛋白的表达;结果PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2阳性颗粒主要存在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且早孕早期绒毛PPARγ表达量高于早孕晚期(P<0.05),而MMP-2表达量在早孕晚期高于早期(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,P<0.01);结论PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2的表达实现的,为深入探讨PPARγ及配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。

猪胎盘绒毛滋养层细胞体外原代培养

本研究旨在建立一种简便有效的猪胎盘绒毛滋养层细胞体外分离纯化方法。采用胰酶DNase I酶联合消化法消化母猪自然分娩后胎盘绒毛组织,以35%、45%2个Percoll密度梯度法进行猪胎盘绒毛滋养层细胞的分离纯化,并通过观察细胞形态、测定生长曲线、免疫荧光染色、透射电镜等鉴定猪胎盘绒毛滋养层细胞。结果表明,分离培养的猪胎盘绒毛滋养层细胞呈上皮样平铺成片生长,形态为多角形或类圆形,培养48h后部分细胞开始融合成多核合胞体滋养层细胞。免疫荧光染色结果显示,细胞角蛋白7染色阳性占91%以上,表明分离获得的猪胎盘绒毛滋养层细胞纯度较高。透射电镜观察显示,所获细胞具有典型滋养层细胞结构特征。综上表明,采用胰酶DNase I酶联合消化法和35%、45%2个Percoll密度梯度法进行分离纯化,可简便有效地获得较高纯度的猪胎盘绒毛滋养层细胞。

EIF5A2基因在不同发育时期人胎盘绒毛膜中的定位表达及意义

目的探讨EIF5A2(eukaryotic transla-tion initiation factor 5A2)癌基因在人胎盘绒毛膜中表达及其定位。方法收集孕早期(8±周)绒毛膜、孕中期(20±周)及足月(38±周)胎盘组织,应用RT-PCR和Western blot及免疫组织化学等方法,从分子水平及蛋白水平检测EIF5A2在不同时段胎盘组织中的表达及定位。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示各期胎盘组织中均有EIF5A2 mRNA及蛋白表达,孕中期达峰值,足月胎盘EIF5A2表达显著下降(P<0.05);免疫组化结果显示孕早期绒毛膜中EIF5A2定位表达于合体滋养层及细胞滋养层细胞胞质,孕中期胎盘组织中EIF5A2主要表达于细胞滋养层,合体滋养层表达较弱,分娩期胎盘部分合体滋养层细胞内可见微弱的EIF5A2表达。结论 EIF5A2在不同时段人绒毛膜、胎盘组织中均有表达,定位于胎盘绒毛膜合体滋养层及细胞滋养层细胞胞质,其表达丰度及优势表达细胞类别在不同孕期存在差异。

松驰素受体LGR7在人妊娠绒毛及胎盘组织中表达的研究

目的探讨松驰素受体LGR7在妊娠过程中的作用。方法应用免疫组织化学(免疫组化)链霉素抗生物素-过氧化物酶法和RT-PCR技术,对56例妊娠绒毛和胎盘组织中的LGR7检测。结果在早期妊娠的绒毛中,LGR7免疫反应呈现强阳性。主要分布于绒毛滋养层细胞的细胞膜上,在细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞及滋养层细胞柱中都有较强的信号,并可见细胞滋养细胞的阳性反应明显强于合体滋养细胞;中、晚期妊娠的胎盘组织中LGR7呈现为强阳性或阳性,主要定位于合体滋养细胞的细胞膜上及毛细血管内皮细胞。免疫组化结果中,早期妊娠绒毛LGR7的强阳性率为90%,明显高于中晚期胎盘中的76.5%和73.7%,中、晚期妊娠分别与早期妊娠比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但中期妊娠及晚期妊娠相比较,差异无统计学意义(P>0.05);早期妊娠的绒毛中LGR7mRNA的表达量为0.967±0.019,明显高于中晚期妊娠胎盘中的0.522±0.071和0.482±0.094,中、晚期妊娠分别与早期妊娠比较,差异均有统计学意义(P<0.01);中期妊娠及晚期妊娠比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论LGR7可能是与妊娠早期滋养细胞侵袭有关的重要的因子,在妊娠的中晚期参与妊娠的维持。