逆转录聚合酶链反应检测和鉴定疟原虫的研究

在同一反应体系中建立能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟及混合感染的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并用于现场采集血样检测。先以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计1对针对恶性疟原虫的特异性引物,建立RT-PCR检测恶性疟原虫方法,在此基础上,增加1条针对间日疟原虫的种特异性引物,使在同一反应体系中,能够同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段。恶性疟原虫和间日疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小为359bp和449bp特定扩增带,健康人血样和空白对照均未见扩增带。用建立的RT-PCR检测方法对现场采集128份血样进行检测,与镜检的阳性符合率为9609%,14份镜检为阴性的发热病人全血标本中2份RT-PCR检测为间日疟阳性。RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。

逆转录聚合酶链反应用于检测恶性疟原虫的初步研究

目的 建立逆转录聚合酶链反应系统 ,用于检测恶性疟原虫感染。方法 以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段 ,设计一对特异引物 ,分别采用RT -PCR技术和PCR技术进行检测恶性疟原虫血样并比较两者检测的敏感性。结果 从培养的恶性疟血样中扩增出 35 9bp特定扩增带 ,而间日疟和健康人血样均未见扩增带。经限制性内切酶分析证实扩增产物为目的片段。检测系统初步显示可检出恶性疟血样中 0 34个疟原虫所含的RNA模板。以RNA为检测对象的RT -PCR肉眼可见条带的检测水平较以DNA为检测对象的PCR扩增高。结论 RT -PCR检测恶性疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点 。

逆转录聚合酶链反应检测恶性疟原虫的应用研究

目的 建立逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测恶性疟原虫的新方法，并用于检测现场采集血样。方法以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段，设计一对特异引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，恶性疟原虫预期被扩增出３５９ｂｐ特定扩增带。结果 从培养的恶性疟血样和现场采集的恶性疟血样中扩增出３５９ｂｐ特定扩增带，而间日疟和健康人血样均禾见扩增带。经限制性内切酶分析证实扩增产物为目的片段。本检测系统初步显示可检出０．３４个疟原虫／μι血样，３７份现场采集经镜检确诊的恶性疟血样中，３６份ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性，１份ＲＴ－ＰＣＲ检测为阴性，阳性符合率为９７．３５％。结论 ＲＴ－ＰＣＲ检测恶性疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点，对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。