培养温度、时间对饲用凝结芽孢杆菌菌数的影响

研究采用平板计数法,评估了两个团体标准(T/YNBX 024—2021,简称“云南团标”;T/CSWSL 022—2020,简称“北京团标”)操作步骤中微生物的培养温度、培养时间对饲用凝结芽孢杆菌制剂的菌数检测结果的影响,旨在为确定饲用凝结芽孢杆菌制剂菌数检测的培养温度和时间提供参考。结果显示:无论采用云南团标、还是北京团标,在40℃/24 h“低温、短时”培养条件下,平板上无菌落生长,无菌数检出数据;50℃/24 h“高温、短时”培养的检出菌数显著高于40℃/48 h“低温、长时”(P<0.05),且50℃/24 h“高温、短时”与50℃/48 h“高温、长时”的检出菌数一致。本研究证明,平板计数法检测饲用凝结芽孢杆菌菌数受培养温度和时间影响,以培养温度为50℃、培养时间为24~48 h为宜。

培养基及其pH对饲用凝结芽孢杆菌制剂的菌数检测影响

研究采用平板计数法,评估了两个团体标准(T/YNBX 024,简称云南团标;T/CSWSL 022,简称北京团标)中的检测培养基及其pH对饲用凝结芽孢杆菌制剂的菌数检测影响。结果显示:两个团体标准中的特异培养基均可用于饲用凝结芽孢杆菌的菌数检测。采用云南团标配制的检测培养基,培养基pH 4.9~5.5范围均可用于准确检测凝结芽孢杆菌的总菌数。然而,采用北京团标中的检测培养基,需将培养基pH调整为5.5。以上研究结果旨在为规范饲用凝结芽孢杆菌制剂的菌数检测方法提供科学依据。

微量稀释联合平板计数法评价聚维酮碘抗菌活性及其影响因素

[目的]建立一种评价聚维酮碘抗菌效果的科学方法,并研究影响其抗菌能力的因素,为聚维酮碘防控水产细菌病提供参考。[方法]采用微量稀释联合平板计数法(包括标测法和模测法)测定了不同厂商和批次聚维酮碘的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,并评估了孵育温度、细菌浓度、培养基浓度、pH、货架期对聚维酮碘最小抑菌浓度的影响。[结果]标测法测得的聚维酮碘对4株渔源多重耐药菌的MIC(213~17g/m^(3))和MBC(216~19g/m^(3))是临床使用浓度的数万倍。模测法测得的聚维酮碘对MH可培养水生菌的MIC(27~11g/m^(3))和MBC(29~12g/m^(3))是临床使用浓度的数百到数千倍。试验体系的温度(5℃到35℃)越高、细菌浓度(103到108cfu/mL)越大、培养基浓度(0.082~21 g/L,MH)越大、pH(5.5到9.5)越高,聚维酮碘对细菌的MIC越大。聚维酮碘固态原粉货架期为18个月,而聚维酮碘溶液货架期约3个月。[结论]聚维酮碘对渔源致病菌和水生MH可培养菌的MIC远远高于临床使用浓度;水温、pH、培养基浓度、细菌浓度都影响抗菌活性;聚维酮碘固体稳定性远高于其水溶液。

基于损伤等效的直立锁边屋面板动态抗风揭试验方法

围护结构在台风等极端风下的抗风性能需要依靠动态试验测定,试验周期长导致成本高且模拟研究受限。基于直立锁边屋面板材料的损伤本构模型,通过疲劳分析研究荷载幅值对材料损伤影响,提出简化荷载序列组合。借助雨流计数法统计测点风压时程得到基于损伤等效的简化荷载循环,提出动态抗风揭试验方法。参照不同试验方法开展抗风揭试验,通过对比发现,试验方法对屋面板风揭破坏过程影响不明显。除永久塑性变形外,该文试验方法与现有试验方法下屋面板损坏现象基本一致,屋面板均为撕裂破坏。不同试验方法下屋面板承载力差异在10%~20%间。该文试验方法加载周期小于1h,现有试验方法加载周期则大于20h。在屋面板风揭破坏过程、承载力等抗风揭性能差异不大情况下,该文试验方法可大幅降低试验周期,为开展模拟研究奠定基础。

页岩气生产液细菌计数方法对比研究

针对部分油气田服务企业以平板计数法、ATP荧光快速检测法代替绝迹稀释法(MPN)进行页岩气生产液中细菌含量检测的现象,将这三种细菌计数方法对相同样品的测定结果进行了对比研究。平板计数法与ATP荧光法操作均比MPN法简便,但是对于页岩气生产液,这两种方法均存在检测出的细菌类型不明确、计数结果不准确、线性关系差等缺点。平板计数法检测出的细菌主要为好氧或耐氧菌腐生菌,无法检测和鉴别与腐蚀密切相关的硫酸盐还原菌。ATP荧光法通过总菌的ATP含量换算得到细菌含量,该法目前更多用于医疗与食品行业的限制类细菌含量的快速检测,尚无明确标准可依,且无法区分菌体的死活。而MPN法可通过鉴别培养基将与腐蚀相关的硫酸盐还原菌(SRB)、铁细菌(IB)和腐生菌(TGB)分别培养后计数,且其检测限远低于另外两种方法,因此更适用于页岩气生产液中特定腐蚀菌种的检测。

壳寡糖水溶液(优力克)的抗菌活性及其影响因素

为探究壳寡糖水溶液(商品名优力克)体外抗菌活性及其影响因素,本研究采用标准微量肉汤稀释联合平板计数法(简称标测法)测定了优力克对4株渔源多重耐药菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)、采用微孔板模拟全池泼洒(简称模测法)测定了优力克对MHA可培养水生细菌的MIC和MBC、并评价了标测法的孵育温度、起始细菌浓度、MH浓度、pH和货架期对优力克MIC和MBC的影响。结果显示,标测法下,优力克对大肠杆菌E105、维氏气单胞菌AV040、副炭疽芽孢杆菌BC006和贝莱斯芽孢杆菌B14的MIC和MBC(32~64 g·m^(-3))是其临床推荐使用浓度(0.3~0.5 g·m^(-3))的数百倍;而模测法下,优力克对MHA可培养水生菌的MIC和MBC(4~8 g·m^(-3))是其临床推荐使用浓度的数十倍。标测法体系的温度(5~35℃)越高、细菌浓度(103~108 cfu·mL^(–1))越高、MH浓度(1/256~1×MH)越高、pH(5.5~9.5)越高,优力克对细菌的MIC和MBC越大(最大值是最小值的2~8倍);上述参数范围内优力克对4种测试菌的MIC在16~128 g·m^(-3)之间。优力克货架保质期至少为24个月。本研究结果提示,壳寡糖水溶液(优力克)是非常有前景的渔业水环境细菌载量的调节剂。

平板计数法检测化妆品中需氧细菌总数的不确定度评估

文章将不确定度原理引入平板计数中,以测量需氧细菌总数检测过程中平皿计数法的检测误差。检测方法参照USP 2023<61>中的“非无菌产品微生物限度检查”,采用微生物计数法定量检测化妆品中的需氧细菌总数,并参照JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》中的要求,用需氧细菌总数对数值表示,通过评定需氧细菌总数检测中平皿计数法测量的不确定度,探讨平皿计数的检测误差[1]。结果表明,平皿法检测需氧菌总数的测量误差主要由A类评定的不确定度所致,而B类评定不确定度造成的误差可以忽略不计,因而据此得出可以扩展不确定度。研究所得的通过对需氧细菌总数检测中平皿计数结果的测量进行不确定度评定,可用于评估平皿计数法的检测误差[2]。

测试片法在食品菌落总数检测中的应用可行性分析

为评估测试片法在食品菌落总数检测中的应用可行性及与传统的平板计数法的一致性,选取大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌作为标准菌株,同时采集生肉、水产品、乳制品、面食和果蔬等自然污染样品,分别采用测试片法和平板计数法对上述样品进行菌落总数检测,并采用t检验分析两种方法测定结果的一致性。结果表明,两种方法对标准菌株的检测结果无显著差异(P>0.05),对自然污染样品的检测也无显著差异(P>0.05),其中现制面条菌落总数最多,牛肉菌落总数最少。这表明测试片法与平板计数法的检测结果具有很好的一致性。测试片法操作简便,为食品菌落总数快速检测提供了可行的技术手段,具有一定的应用前景。

测试片法检测食品中大肠菌群的验证评价

为探究大肠菌群测试片法在食品检测中的可行性,依据国际标准ISO 16140-2:2016中的性能指标验证要求,对MicroFast^(®)大肠菌群测试片法进行包容性、排他性,以及与国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》(GB 4789.3—2016)中方法的一致性验证,采用t-检验和Bland-Altman分析方法进行一致性分析评价。16株目标菌在测试片上形成典型菌落,24株非目标菌中的23株均未在测试片上形成菌落,阿巴特图巴沙门氏菌ATCC 35640在测试片上形成非典型菌落。测试片法和GB 4789.3—2016中方法的检测结果呈正相关(R^(2)>0.976);95%置信区间的样品比例为1∶25,满足不得高于1∶20的要求;所有食品类型的β-期望容忍区间(β-ETI)均在±0.5对数单位范围内,测试片法和GB 4789.3—2016方法具有很好的一致性。MicroFast^(®)大肠菌群测试片法对纯菌株的包容性和排他性良好,在一致性方面符合ISO 16140-2:2016对方法等效性的要求,可作为替代方法,用于检测食品中的大肠菌群。

食品安全检验中微生物检测技术的运用

食品安全检测与人们的身体健康密切相关,其主要内容是按照国家相关标准来检测食品中的有害物质。随着社会经济的发展,人们的饮食结构、饮食方式、饮食习惯发生改变,对食品安全检验工作的要求也越来越高。在此背景下,食品安全检测技术不断创新,多种新型微生物检测技术逐渐被应用在食品安全检验领域中,显著提高了检测效率和质量。本文概述了微生物检测技术在食品安全检验中的应用,以供参考。

水中菌落总数测定方法的比较

本研究采用平皿计数法、酶底物法和Easy Disc法3种不同的菌落总数测定方法对有证质控样品、阴性样品及不同细菌浓度的实际样品进行检测。对比结果表明,3种检测方法均能准确检测有证质控样品。通过对比实际样品及阴性样品的检测结果发现,酶底物法和Easy Disc法相较于传统的平皿计数法,在检测菌落总数时具有准确度更高、操作更简便、稳定性好等优势,抗环境因素干扰更强,检测适用性更广,更适合多数条件受限的实验室进行菌落总数的测定。

大肠埃希氏菌平板计数法存在的技术性问题探讨

本文综述了大肠埃希氏菌结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷琼脂平板计数法的建立背景、原理、优缺点,以期对该方法有更全面深入的认识,在此基础上对该方法存在的技术性问题进行了探讨,并提出了改进策略,以期为方法修订提供参考,从而更准确地进行食品中大肠埃希氏菌的计数。

氧化还原电位对低煤阶煤生物甲烷生成的影响

氧化还原电位(Eh)是煤层生物甲烷生成的重要控制因素之一。为了解其对煤层生物甲烷产出的影响以及产甲烷的动力学过程,在实验室采用-102mV、-153mV、-208mV、-284mV、-315mV这5个氧化还原电位值,对河南义马低煤阶煤样品进行了生物甲烷模拟产出实验,采用气相色谱仪对不同反应阶段生成气体的成分及生成量进行检测,同时对菌种源中微生物进行培养计数。结果表明:①不同Eh条件下的实验均有甲烷的生成,氧化还原电位较低时产甲烷菌的繁殖更加快速,在-284mV时生物甲烷的浓度最大,-102mV时最小;②通过平板计数法,分析了产甲烷过程和细菌生长动力学机理——整个产甲烷生成过程也是微生物生长代谢的过程,间接证明了产气量大小变化的原因。结论认为,Eh对于煤层生物甲烷的生成具有重要的控制作用。

臭氧化山茶油对金黄色葡萄球菌的体外杀伤效果

目的:探寻油剂体外杀菌效果的检测方法,同时检测臭氧化山茶油对金黄色葡萄球菌的体外杀伤效果。方法:制备金黄色葡萄球菌悬液,采用三区划线法将金黄色葡萄球菌悬液接种于LB平板,培养过夜后选取21个直径相同的细菌单克隆,平均分为3组:对照组、基础油(山茶油)组、臭氧油(臭氧化山茶油)组。用无菌环隔离细菌单克隆,并给予臭氧油等处理,将平板正置培养过夜,次日挑取隔离培养的整个细菌单克隆于5 m L液体LB培基中培养12 h,然后采取平板计数法和比浊法检测菌液浓度,从而判断臭氧油的杀菌效果。结果:平板计数法和浊度法均显示,经臭氧油处理后的单克隆重悬培养后,菌液的细菌浓度显著低于对照组和基础油组(P<0.001)。结论:臭氧化山茶油对金黄色葡萄球菌有显著杀伤作用,单克隆菌落培养法检测油剂体外杀菌作用方法学可靠。

抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选

本研究以从断奶仔猪肠道分离的益生菌为试验菌株,将大肠杆菌K88和益生菌接种到体外培养的猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell-1,IPEC-1)中,测定培养2.5h上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,同时将益生菌和大肠杆菌K88体外混合培养2.5h,进行平板计数,统计大肠杆菌K88菌数的变化,筛选出可以抑制大肠杆菌K88的益生菌。试验结果显示,干酪乳杆菌和凝结芽孢杆菌能显著降低IPEC-1培养上清液中的LDH活性(P<0.05),降低大肠杆菌K88对细胞的损伤;凝结芽孢杆菌能降低DMEM培养基中大肠杆菌K88的生长速度,结合模拟制粒过程及胃肠道环境的耐高温、耐酸及耐胆盐研究进行综合分析,该凝结芽胞杆菌对大肠杆菌K88有较好的抑制作用且具有良好的耐高温、耐酸及耐胆盐性能,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。本试验建立了能够抑制大肠杆菌K88的益生菌体外筛选技术模型。

优化的ATP生物发光法快速检测面粉中细菌总数

[目的]建立一种快速检测面粉中细菌总数的方法。[方法]采用优化的ATP生物发光法检测面粉中的细菌总数,考察D-荧光素(Ln)浓度、萤火虫荧光素酶(FL)浓度、Mg2+浓度对生物发光反应的影响。[结果]Ln浓度为70 mg/L,FL浓度为50 mg/L,Mg2+浓度为0.250 0 mmol/L时,ATP生物发光法的测定结果较理想。该法最低检测细菌总数为1.0×103cfu/ml,与传统的平板计数法具有良好的相关性(P>0.05),RSD为4.0%。[结论]优化的ATP生物发光法成本低、操作简便、反应迅速、准确可靠,能快速检测出食品中的细菌总数。

两种沙门氏菌定量计数方法的比较

目的为了准确计数生鲜肉中的沙门氏菌的数量,为微生物危险性评估提供精确的数据支持,探索一种实用性、准确性和选择性的沙门氏菌计数方法.方法将污染不同数量沙门氏菌的样品分别稀释,同时用平板计数法和MPN法分别计数,比对两方法的准确度、灵敏度和可操作性.平板计数选用CHROMagar显色培养基平板和XLD琼脂平板作分离平板,挑取可疑菌落经鉴定后,计算沙门氏菌数.MPN法选用TTB、MM和SC增菌液分别于(36±1)℃、(42±1)℃增菌后,接种CHROMaagar显色培养基平板和XLD琼脂平板,挑取可疑菌落鉴定后查MPN表.结果样品中污染沙门氏菌量在1～500 cfu/g时,平板计数法不能将沙门氏菌很好地区分;MPN法采用SC增菌液(42±1)℃培养效果最好,检出限10 cfu/g,检测值和理论值(在500 cfu/g)的符合率为92.0%.结论MPN法无论从可操作性或是检出的灵敏度都要优于平板计数法.

泸型酒生产中不同层糟醅微生物与白酒风味的关系

对泸型酒酿造过程中同一口窖池不同层次糟醅中典型微生物(酵母、细菌和芽孢、霉菌)的生长情况进行跟踪测定,并结合酒质,探究微生物生长与白酒风味成分之间的关系。结果表明:同一窖池不同层次糟醅微生物生长状况存在差异,表现为不同层糟醅内同种微生物最大峰出现时间及峰值有差异;相同时期内典型微生物的组成结构不同,这些差异是不同层糟醅酒产量和风味不同的重要原因。

流式细胞术快速检测生乳中细菌总数

研究了应用流式细胞术检测生乳中细菌总数的方法。实验对生乳采用酶法消化蛋白质颗粒、高速离心脱脂的方式来消除大颗粒物质对流式检测的影响。并对菌体进行热处理,使其能被荧光性染料碘化丙锭染色。经过前处理的乳液进入流式细胞仪分析、计数。结果表明,流式细胞术与平皿菌落计数法呈正的直线相关(P<0.01),相关程度为显著相关(r=0.9360)。该方法极大的缩短了检测时间,检出限为104/mL。

盐渍食用菌加工过程中厌氧亚硫酸盐还原梭菌污染状况分析

[目的]了解辽宁地区盐渍食用菌加工过程中厌氧亚硫酸盐还原梭菌的污染情况,以便进一步研究消除和控制该类细菌污染的方法。[方法]采用平板计数法对9家加工盐渍食用菌工厂的生产用原料级盐渍食用菌、加工用水、食盐、成品进行厌氧亚硫酸盐还原梭菌抽样检测。[结果]9家加工厂所用水样中均未检出该类细菌;4家企业加工用食盐中检出厌氧亚硫酸盐还原梭菌,其菌落数量在3.6～150cfu/g之间;9家加工厂的11个原料样品中有8个原料样品检出厌氧亚硫酸盐还原梭菌,菌含量在9.1～300cfu/g,3个成品盐渍食用菌中检出该类细菌含量在30～100cfu/g。[结论]盐渍食用菌加工过程中,可能会受到厌氧亚硫酸盐还原梭菌的污染,而污染源主要来自加工用原料级盐渍食用菌和食盐。