宫颈鳞癌中Plkl和CyclinBl的表达及其临床意义

目的:探讨Plk1及Cyclin Bl在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:利用组织芯片技术,结合免疫组化Elivision方法对88例宫颈鳞状细胞癌、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)、20例正常宫颈组织中Plkl和Cyclin Bl表达情况进行检测。结果:Plkl在宫颈鳞癌、CIN中的表达阳性率分别为72.7%、55.0%,明显高于正常宫颈组织10.0%,差异有统计学意义(P<0.01),但前两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。Cyclin Bl在宫颈鳞癌中的表达阳性率54.5%,明显高于CIN 30.0%和正常宫颈组织10.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。Plk1的表达与宫颈鳞癌淋巴结转移相关(P<0.05),Cyclin B1的表达与宫颈鳞癌浸润深度相关(P<0.05),且Plkl和Cyclin Bl在宫颈鳞癌中的表达呈正相关(rs=0.261,P=0.014)。结论:Plkl和Cyclin Bl的表达与宫颈鳞癌的发生发展、浸润深度和转移相关,两者联合有可能成为宫颈鳞癌临床治疗的新靶点。

pCMV-N-Flag-Plkl重组质粒的构建及其对骨肉瘤U20S细胞增殖和凋亡的影响

Polo样蛋白激酶1（Plkl）是一类丝／苏氨酸蛋白激酶，在骨肉瘤中呈高表达。我们通过构建Plkl过表达质粒pCNV-N-Flag-Plkl，检测其对骨肉瘤U20S细胞增殖和凋亡的影响。

Plk1的研究进展

Plk1是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,经磷酸化激活,在细胞有丝分裂的不同时期都起到十分重要的作用:在G2晚期M初期参与Cdc25C的活化,继而促成cyclin B/Cdc2的激活、协助中心体的功能成熟以及双极性纺锤体的形成,从而促进M期的起始和染色体正常分离、分配;通过调节APC(anaphase-promoting complex)决定细胞能否按期离开M期。正常情况下,DNA的损伤将阻抑细胞进入分裂期(M),Plk1活性受抑在其中起关键性的作用。Plk1可以使细胞周期停滞在G2期或M期的多个时点。Plk1尚参与哺乳动物细胞有丝分裂中高尔基体特异性碎解、分离入子细胞并融合重构的过程。在大多数人类肿瘤中Plk1均高表达。已经建立了针对Plk1 mRNA的反义寡核苷酸,它能特异性地抑制Plk1 mRNA及其蛋白产物,有效抑制培养细胞系或裸鼠肿瘤模型中肿瘤细胞的增殖。

Plk1基因及其与胰腺癌的关系

Plk1是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，1994年由Golsteyn等首先克隆发现，与果蝇的Polo和酵母的Cdc5具有较高同源性。Plkl是Polo激酶家族Plks（Polo—likekinase）的成员。该家族是一个保守的蛋白激酶家族，主要包括裂殖酵母的Plol，出芽酵母的Cdc5，果蝇的Polo，爪蟾蜍的Plx1和哺乳动物细胞的4种激酶Plk1、Plk2（Snk）、Plk3（Prk／Fnk）、Plk4（Sak）。目前研究发现，Plk1与胰腺癌的发生发展密切相关，正成为胰腺癌诊治研究的新热点。

子宫颈癌中Plk1和Cyclin B1、p21^(WAF1)的表达及其临床意义

目的探讨Plk1(polo-like kinase1)和Cyclin B1、p21WAF1在子宫颈癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法利用组织芯片技术,结合免疫组化Eli Vision法对102例子宫颈癌、20例子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、20例正常子宫颈组织中Plk1和Cyclin B1、p21WAF1的表达进行检测,并分析相关数据。结果 Plk1在子宫颈癌、CIN中的阳性率分别为70.5%、55.0%,明显高于正常子宫颈组织(10%),差异有统计学意义(P<0.01)。Cyclin B1在子宫颈癌、CIN中的阳性率分别为52.9%,30.0%,明显高于正常子宫颈组织(10.0%),差异有统计学意义(P<0.01)。p21WAF1在子宫颈癌、CIN中的阳性率分别为23.5%、10.0%,明显高于正常子宫颈组织(0),差异有统计学意义(P<0.05)。Plk1、Cyclin B1和p21WAF1在子宫颈癌、CIN中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。Plk1表达与子宫颈癌间质浸润深度相关(P<0.05)。Cyclin B1表达与子宫颈癌间质浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05)。p21WAF1在子宫颈癌中的表达与组织学分级相关(P<0.01)。组织学分级低的子宫颈癌中p21WAF1阳性率高。Plk1和Cyclin B1在子宫颈癌中的表达呈正相关(rs=0.297,P=0.002)。Plk1和p21WAF1在子宫颈癌中的表达呈负相关(rs=-0.403,P<0.001)。结论 Plk1、Cyclin B1和p21WAF1的表达与子宫颈癌的发生、发展相关,且前两者与子宫颈癌预后相关,三者联合检测有可能成为子宫颈癌临床治疗的新靶点。

Plk1磷酸化修饰PinX1对宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响

目的:探讨有丝分裂激酶Plk1通过磷酸化修饰PinX1调控宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的作用。方法:运用酵母双杂交、免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶沉降实验了解Plk1与PinX1在体内外是否能够相互结合采用;采用体内外磷酸化实验明确Plk1是否能够磷酸化修饰PinX1;采用免疫荧光染色及流式细胞术检测PinX1磷酸化对HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响。结果:Plk1与PinX1在体内外均能结合;Plk1在体内外均可磷酸化修饰PinX1;过量表达PinX1的非磷酸化突变体能够阻碍HeLa细胞的有丝分裂进程;过量表达PinX1的磷酸化突变体导致细胞凋亡的增加(F=76554.133,P<0.001)。结论:Plk1与PinX1相互结合并通过磷酸化修饰PinX1阻碍细胞有丝分裂进程及促进细胞凋亡。

siRNA介导的Plk1表达沉默对食管癌细胞生长的影响

在包括食管癌在内的多种肿瘤中,Plk1呈现过表达且具重要预后价值,表明该分子是一个潜在的肿瘤治疗靶点.为了探讨Plk1作为分子靶点用于食管癌治疗的潜在价值,采用siRNA技术抑制Plk1的表达,并观察了其对3株代表性食管癌细胞生长的影响.结果表明:合成的特异性短链Plk1 siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制3株代表性食管癌细胞系中Plk1的表达.同时,siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制了食管癌细胞的生长,细胞活力同时显著下降.另外,Plk1表达被抑制后,大量细胞有丝分裂受到阻滞,并进而发生大规模细胞死亡.这些结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默能显著抑制食管癌细胞的生长,Plk1是一个潜在的用于食管癌治疗的新靶点.

肝细胞癌组织中Survivin和Plk1表达的研究

目的探讨Polo样激酶1(Plk1)和生存素或存活素(Survivin)在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,为临床诊断和治疗提供理论依据。方法应用免疫组织化学SP三步法检测HCC 80例、肝硬化20例、正常肝组织20例中Plk1、Survivin蛋白的表达。结果 HCC、癌旁肝组织、肝硬化和正常肝组织的Plk1蛋白阳性表达率分别是87.5%、27.5%、0.0%和10.0%,四者之间的差异有统计学意义;Survivin在HCC、癌旁肝组织、肝硬化和正常肝组织中的阳性率分别为82.5%、47.5%、20.0%和20.0%,四者之间的差异有统计学意义。结论 Plk1和Sur-vivin异常表达与HCC的发生密切相关,在HCC的发展过程中起非常重要的作用;Plk1、Survivin在HCC中的表达关系密切,呈正相关。

Plk1在胃癌中的表达及与临床病理因素关系

目的:观察Plkl在胃癌发展不同阶段中的表达,探讨分析它与胃癌临床病理指标之间的关系。方法:采用SP免疫组化方法,对49例胃癌及其相应的癌旁非癌胃粘膜中Plkl表达进行检测。结果:Plkl在非癌粘膜和胃癌组织中的阳性表达率分别为0和83.67%;两组比较差别十分显著(P<0.01)。Plkl表达与侵润深度、胃癌淋巴结转移和临床分期相关(P<0.05)。结论:Plkl可能参与胃癌的侵袭和转移过程。

过氧化氢对PC12细胞plk1基因表达的影响

目的观察过氧化氢对体外培养的PC12细胞plk1基因表达的影响。方法采用MTT法观察不同浓度过氧化氢对体外培养的PC12细胞作用6 h后,对PC12细胞存活率的影响;Western-blot检测不同浓度过氧化氢作用后,PC12细胞plk1基因蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,过氧化氢剂量依赖性降低PC12细胞的存活率,增强PC12细胞plk1基因蛋白的表达水平。结论过氧化氢降低PC12细胞的增殖活力,其机制可能是通过增强Plk1蛋白表达水平来实现。

小鼠受精卵早期发育过程中Plk1表达和活性变化及其与MPF关系的研究

目的研究在小鼠受精卵早期发育过程中,哺乳动物Polo-like激酶(Plk1)的表达和活性变化及其与有丝分裂促进因子(MPF)活性变化的关系。方法以一细胞期小鼠受精卵为材料,用Western Blotting方法检测Plk1蛋白含量;用液闪计数分析仪分别测定Plk1和MPF的cpm值来表示各自激酶活性。结果小鼠受精卵第一次有丝分裂过程中Plk1的含量没有显著变化,而Plk1活性在M期达到最高峰,在M期退出时迅速下降。加入MPF抑制剂后MPF和Plk1活性均未在M期出现峰值。结论Plk1的活性是随着细胞周期的进程而变化的;Plk1在小鼠受精卵早期发育过程中可能参与了MPF的自我催化活化环。

宫颈癌中Plk1蛋白表达与疾病进展及患者远期生存率的关系

目的探讨宫颈癌组织中polo-like kinase 1(Plk 1)蛋白的表达与肿瘤发生发展、远期生存率的关系。方法选取80例宫颈癌组织标本(宫颈癌组)、宫颈上皮瘤组织作为CIN组(40例)、正常宫颈组织标本40例(对照组),收集时间2011年1月-2012年12月,采用免疫组化染色检测3组标本中的Plk1蛋白表达情况,分析Plk1蛋白与宫颈癌发生发展、远期生存率的关系。结果宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达率(73.75%)显著高于CIN组(45.00%)、对照组(12.50%),差异具有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达与分化程度、国际妇产联盟(FIGO)分期、是否发生淋巴结转移、间质浸润程度、是否发生脉管浸润具有显著的统计学意义(P<0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达与患者肿瘤直径、年龄的关系无统计学意义(P>0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达患者的3年生存率76.27%与阴性表达组的85.71%差异无统计学意义(P>0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达患者的5年生存率40.68%显著低于阴性表达组的66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与CIN组织和正常宫颈组织相比,Plk1蛋白在宫颈癌中表达程度显著上调,并且与肿瘤的进展、患者远期生存密切相关。

微小RNA-34家族抑制结直肠癌细胞同源重组修复的机制

目的探讨微小RNA-34家族(miR-34s)对结直肠癌细胞同源重组修复的作用及调控机制。方法分别在2种结直肠癌细胞系(HCT116和HT29细胞)和2种非结直肠癌细胞系(HeLa和U2OS细胞)中过表达miR-34c-5p,应用蛋白质印迹法检测polo样激酶1(PLK1)蛋白表达水平。过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p以及回转PLK1,应用蛋白质印迹法检测PLK1和第139位丝氨酸磷酸化的组蛋白H2AX(γH2AX)蛋白表达水平,分析miR-34s与PLK1以及DNA损伤的关系。使用DR-GFP/Ⅰ-SceI报告质粒检测miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p对同源重组修复效率的影响。qRT-PCR法检测miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p对PLK1 mRNA表达水平的影响。生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p与PLK1 mRNA的结合位点。分别在p53wt和p53-/-HCT116细胞中过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p,分析p53在PLK1调控过程中的作用。结果miR-34c-5p在HCT116、HT29、HeLa、U2OS细胞中均可抑制PLK1蛋白表达,t值分别为13.317、8.129、6.802和15.934,均P<0.001。过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p可抑制PLK1蛋白(F=44.191,P<0.001)和mRNA(F=26.076,P<0.001)表达水平以及上调γH2AX蛋白表达水平(F=5.368,P=0.026),回转PLK1可部分逆转DNA损伤。过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p可降低结直肠癌细胞同源重组修复效率,F=200.739,P<0.001。双荧光素酶报告基因分析显示,miR-34a-5p可靶向结合PLK1 mRNA 3′-UTR。过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p均能明显上调p53蛋白(F=6.100,P=0.018)以及mRNA(F=17.401,P=0.001)表达水平。在HCT116 p53-/-细胞中,miR-34a-5p对PLK1 mRNA及蛋白的抑制作用明显减弱,t值分别为-6.471和-4.056,均P<0.05;而miR-34b-5p和miR-34c-5p对PLK1 mRNA及蛋白的抑制作用消失,均P>0.05。结论miR-34s可通过下调PLK1表达水平抑制结直肠癌细胞同源重组修复以及诱导DNA损伤的积累。

PLK1激酶域抑制剂的构效关系与作用模式

Polo样激酶1(polo-like kinases 1,PLK1)作为抗肿瘤药物的靶标,在过去十年里得到了广泛的研究。目前,已有多个PLK1抑制剂进入临床研究。已报道的PLK1抑制剂的化学结构类型较多,本文主要针对激酶域ATP抑制剂,总结其构效关系和作用模式,阐述研究进展,以期对PLK1抑制剂的研究提供有益的参考。

保罗样激酶基因沉默体外抑制胶质瘤细胞侵袭与生长

目的观察保罗样激酶1基因(plk1)沉默对胶质瘤细胞株-H4体外生长的抑制作用,探讨plk1基因作为胶质瘤治疗靶点的可行性。方法化学合成小片断干扰RNA(siRNA)抑制plk1基因的表达,Western blot检测plk1蛋白质的表达变化,流式细胞仪检测H4细胞周期分布及凋亡程度的变化,体外侵袭实验检测H4细胞侵袭能力的变化,MTT法检测H4细胞增殖速度的变化。结果经siRNA作用48h后,plk1蛋白质水平明显降低;较多的H4细胞聚集于G2/M期附近(P<0.05);细胞凋亡明显上升(P<0.05);细胞体外侵袭能力下降(P<0.05);增殖速度明显缓于对照组(P< 0.05)。结论靶向plk1的siRNA可在体外抑制胶质瘤细胞H4的侵袭与增殖,plk1有可能成为新的潜在胶质瘤治疗靶点。

翻译控制肿瘤蛋白研究现状

翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）在动植物中广泛表达并且具有多种生物学功能。它可调节细胞骨架：可被Plk1激酶特异性的磷酸化，并且p-TCTP-S46是反应Plk1激酶体内活性的标志物；TCTP可抗细胞凋亡等等。文章就TCTP的上述生物学功能进行简要综述。

RNA干涉介导的Plk1沉默对乳腺癌细胞恶性生物表型的影响

目的:研究乳腺癌细胞中丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1基因表达下调后对其恶性生物表型的影响。方法:利用pSilencer4.1-CMVneo质粒,分别构建针对Plk1基因的RNA干涉载体(pSilencer4.1-shPlk1),利用脂质体Lipofectamine2000转染MCF-7细胞,G418筛选稳定的转染细胞系。半定量RT-PCR和Western blot分别检测Plk1基因mRNA和蛋白表达,MTT和克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化,最后分析MCF-7细胞对紫杉类药物(紫杉醇和多西他赛)化疗敏感性的变化。结果:成功筛选了稳定转染细胞系(MCF-7/shPlk1和MCF-7/shcontrol)。同MCF-7/shPlk1细胞相比,MCF-7/shPlk1细胞中Plk1基因mRNA和蛋白表达水平分别下调65.8%和74.4%(P<0.05)。同MCF-7/shcontrol,MCF-7/shPlk1细胞增殖速度显著抑制,到第5天时抑制率达到44.9±3.2%(P<0.05)。同时,MCF-7/shPlk1细胞的克隆形成能力显著降低(P<0.01)。流式细胞仪技术分析细胞周期结果表明:MCF-7/shPlk1细胞的G2/M期细胞比例显著增加了21.1±4.1%,而S期细胞比例则显著降低了(18.5±3.1%;P<0.05)。流式细胞仪技术分析细胞凋亡结果表明:MCF-7/shPlk1细胞的凋亡率约显著增加了13.1±2.3%(P<0.05)。同时还发现:MCF-7/shPlk1细胞中激活的caspase-3蛋白显著增加,Bcl-2蛋白显著降低,而Bax蛋白则显著增加。结论:RNA干涉载体能特异性下调乳腺癌细胞中Plk1基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和体外克隆形成能力,同时诱导乳腺癌细胞的G2/M期阻滞和细胞凋亡率显著增加。因此,靶向Plk1基因的生物治疗有望成为未来临床乳腺癌的一个重要的辅助治疗策略。

14-3-3ε调节小鼠受精卵纺锤体组装

目的:研究14-3-3ε蛋白调节小鼠受精卵纺锤体组装的作用。方法:采用间接免疫荧光实验检测1-细胞期受精卵14-3-3ε和α-微管蛋白的亚细胞定位;利用显微注射方法将14-3-3εsi RNA注射入1-细胞期受精卵,观察小鼠受精卵纺锤体形态及检测Polo样激酶1(Plk1)的活性。结果:14-3-3ε和α-微管蛋白在G1期、S期和G2期卵中主要共定位于细胞质,M期卵14-3-3ε主要位于细胞质皮质。小鼠受精卵注射14-3-3εsi RNA后导致异常形态纺锤体形成及Plk1活性下降。结论:14-3-3ε蛋白在调节小鼠受精卵纺锤体组装中发挥重要作用。

选择性丝/苏氨酸蛋白激酶PLK1抑制剂类抗肿瘤药Volasertib

目前，包括微管蛋白结合剂紫杉烷类和长春碱类药物在内的许多抗肿瘤药，因缺乏选择性，均会导致各种不良反应。因此，开发更具特异性的新型抗肿瘤药，已成为广大药学研究者的当务之急。