凤丹(Paeonia ostii)脂肪酸去饱和酶基因PoFAD_2的克隆及表达分析

以油用牡丹凤丹（Paeonia ostii T.Hong＆J.X.Zhang）胚珠为试材,通过反转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）及RACE技术得到脂肪酸去饱和酶基因FAD2的c DNA全长,命名为PoFAD_2（Gen Bank注册号为KT153989）。该基因全长为1 695 bp,开放阅读框（open reading frame,ORF）为1 152bp,编码383个氨基酸。系统发育树结果表明PoFAD_2与芍药（P.lactiflora）FAD2具有最高的同源性,亲缘关系最近。此外,PoFAD_2编码的氨基酸序列中存在3个高度保守的组氨酸簇及4个跨膜区,且含有Delta12-FADs的特异位点,这些结果表明,该基因属于脂肪酸去饱和酶家族。实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）结果表明：PoFAD_2在凤丹各组织中的表达差异较大,在茎、萼片、雄蕊及花瓣中几乎不表达,在叶片中极微弱表达,表达量仅为胚珠中的1/73,在芽及雌蕊中低表达,表达量约为胚珠中的1/10~1/12,而在胚珠中高表达;种子发育进程中,PoFAD_2表达量呈现先急速上升之后迅速下降再回升的趋势,且于花后75 d出现表达量的最高峰。