多柔比星肾病大鼠podocin mRNA表达与氧化应激反应的关系

目的探讨多柔比星肾病大鼠肾小球裂隙膜分子podocinmRNA表达与氧化应激反应的关系。方法建立大鼠多柔比星肾病模型,原位杂交染色和半定量RT-PCR法检测肾皮质podocinmRNA表达,化学比色法检测肾皮质氧化应激指标,并对二者进行相关性分析。结果原位杂交染色发现正常对照组podocinmRNA主要表达在肾小球细胞胞浆中。随时间进展多柔比星肾病组阳性细胞数和阳性强度明显增加;半定量RT-PCR结果显示肾病组podocinmRNA表达d7无明显改变,d14和d21显著升高。与正常对照组比较,多柔比星肾病组丙二醛(MDA)水平d7明显增高,d14和d21显著增高;超氧化物歧化酶(SOD)水平d14明显降低,持续至d21;总抗氧化能力(T-AOC)d21明显降低。podocinmRNA的表达与MDA呈正相关,与SOD和T-AOC呈显著负相关。结论肾病状态下足细胞分子podocinmRNA表达异常与氧化应激反应密切相关。

阿霉素肾病幼鼠肾组织podocin定位和半定量分析及药物干预的影响

目的:探讨podocin在肾小球滤过膜中的定位及其在肾病综合征蛋白尿发生中的可能作用以及肾上腺皮质激素和血管紧张素转换酶抑制剂对其表达浓度的影响。方法:应用大鼠阿霉素肾病模型,分4组进行观察。结果:①podocin分布在靠近肾小球基底膜(GBM)的足突基底部,主要定位于裂隙隔膜的胞质面。②阿霉素肾病组肾组织中podocin表达较正常大鼠肾组织明显减少。③泼尼松治疗组、苯那普利治疗组podocin浓度增加。结论:podocin为肾小球上皮细胞裂孔隔膜上的主要结构蛋白;阿霉素肾病幼鼠肾小球podocin含量显著减少;泼尼松和苯那普利可能通过影响肾小球滤过膜中podocin表达浓度而起到减轻蛋白尿的治疗效果。

NPHS2及其基因产物Podocin与激素抵抗的肾病综合征

2000年在激素抵抗的肾病综合征中新克隆的NPHS2是一种结构基因,含有8个外显子,其编码蛋白podocin特异地表达于肾脏足突细胞,是裂孔隔膜相关的一种重要膜蛋白,属于stamatin蛋白家族,含有383个氨基酸残基,由于NPHS2突变造成裂孔隔膜功能异常,引起大量蛋白尿,不仅是家族性激素抵抗的肾病综合征、而且是散发性激素抵抗的肾病综合征的常见病因,该基因的发现不仅有助于阐明肾小球滤过屏障的结构和功能,而且有助于激素抵抗的肾病综合征预后的判断和治疗方案的选择。

防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及足细胞病变的影响

目的:探讨防己黄芪汤对蛋白尿及其发生原因——足细胞病变的影响。方法:采用阿霉素肾病大鼠造成肾病综合征模型,以防己黄芪汤、2倍剂量防己黄芪汤、防己黄芪去甘草汤灌胃。于14d、28d、42d测24h尿蛋白定量;实验42d取血、取肾,检测血生化,观察肾组织病理改变,免疫组织化学法、Western-blotting、RT-PCR检测肾组织nephrin、podocin蛋白及基因水平。结果:模型组大鼠蛋白尿明显增加,伴血Alb下降;与模型组比较,防己黄芪汤组大鼠尿蛋白定量在实验14d、28d、42d明显减少。2倍剂量防己黄芪汤组、防己黄芪去甘草汤组大鼠尿蛋白定量在42d明显减少。模型组大鼠nephrin蛋白表达上调,药物干预后表达明显下降;模型组podocin蛋白和基因表达下调,药物干预后表达明显增加。结论:防己黄芪汤明显改善阿霉素肾病大鼠蛋白尿,这可能与其对足细胞关键结构nephrin、podocin表达的调节有关。

雷公藤多甙对糖尿病大鼠尿蛋白、肾小球硬化及足细胞的影响

目的观察雷公藤多甙(TWP)对糖尿病大鼠尿蛋白、肾小球硬化及足细胞的影响,探讨TWP对糖尿病大鼠肾脏保护作用的效果及可能的机制。方法运用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,设立TWP组(给予TWP治疗8周)、厄贝沙坦组(给予厄贝沙坦治疗8周)、模型对照组及正常对照组各8只,检测各组的24 h尿蛋白定量、Ⅳ型胶原表达水平以及肾组织中Nephrin蛋白与Podocin蛋白表达水平,并进行比较。结果 8周后各药物干预组24 h尿蛋白定量和肾组织中的Ⅳ型胶原表达水平均低于模型组(P均<0.05),其中TWP组和厄贝沙坦组间的24 h尿蛋白定量比较差异无统计学意义,但TWP组的Ⅳ型胶原表达水平低于厄贝沙坦组(P<0.05);TWP组和厄贝沙坦组Nephrin和Podocin蛋白表达均强于模型对照组,但TWP组和厄贝沙坦组间比较差异无统计学意义。结论 TWP可能通过减少糖尿病大鼠的尿蛋白及减轻其肾小球硬化达到保护肾脏的作用,其机制可能与TWP具有保护肾脏足细胞的功能有关。

足细胞蛋白Nephrin、Podocin与肾小球疾病

肾小球疾病是指累及两侧肾小球的一类疾病,多以蛋白尿为主要临床表现,由于发病机理尚不明确,因此疾病早期缺乏准确有效的检测和诊断手段。近来研究发现足细胞蛋白Nephrin和Podocin在多种肾小球疾病发生发展和诊断预测中起重要作用。本文就近几年Nephrin、Podocin与肾小球疾病的相关研究进行综述。

肾病综合征患者肾组织podocin的表达

目的观察不同病理类型、不同激素反应性肾病综合征(NS)患者肾小球足细胞中podocin的表达和分布特征。方法肾组织作冰冻切片免疫荧光双染色。以激光共聚焦显微镜采集图像。与定位标志Ⅳ型胶原α3链比较。受检NS患者21例。其中局灶节段性肾小球硬化(FSGS)12例(难治性7例,非难治性5例)、微小病变(MCD)5例、膜性肾病(MN)4例;正常肾组织对照3例。采用LSM510图像处理系统进行处理。荧光强度以吸光度表示。结果(1)podocin在正常肾组织沿肾小球基底膜呈连续、线形分布。部分FSGS患者podocin的分布呈点状、短线条状,少数患者未见podocin沉积。(2)FSGS患者肾小球中podocin表达量(80.5±33.5)与对照正常肾组织(138.4±38.1)比较,显著减少(P=0.0211),其中难治性FSGS(67.2±30.5)与正常肾组织的差异有统计学意义(P=0.0131);非难治性FSGS患者(99.0±31.0)与正常肾组织的差异无统计学意义(P=0.1585)。(3)MCD(112.1±47.6)、MN(92.5±34.8)患者podocin的表达量亦降低,与正常肾组织比较,无统计学意义(P=0.4497,P=0.1570)。(4)不同病理类型各组NS患者肾小球中podocin表达量的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论FSGS的NS患者肾小球中podocin的表达减少,难治性FSGS患者尤为明显,部分FSGS患者podocin分布发生改变。podocin的检测可能在FSGS激素疗效评价方面有一定价值。

足细胞裂孔隔膜与信号传导

足细胞足突间的裂孔隔膜（sht diaphragm，SD）是肾小球滤过屏障最重要的组成部分。直到近年，才通过对一些遗传性或先天性肾病综合征（NS）的研究先后确定了多个位于SD的蛋白分子，如nephrin、podoein、CD2AP、ZO-1、FAT和NEPH1等，并把这些分子组成的复杂结构称为“SD复合体”（SDeomplex）。随后，在一些获得性NS和肾病动物模型发现，这些足细胞分子的表达和分布也存在异常。可见，SD以“静态分子筛”（static molecular siever）的形式在肾脏的超滤中起着关键作用。

地塞米松通过稳定podocin的表达和分布抑制嘌呤霉素对小鼠肾小球足细胞的损伤

目的观察嘌呤霉素（PAN）和地塞米松（DEX）对足细胞分子podocin表达和分布的影响，探讨DEX改善蛋白尿的机制。方法体外培养小鼠足细胞（MPC5），分为对照组、PAN组和DEX组。对照组用含0．02％DMSO的RPMI-1640培养液培养；PAN组加入PAN；DEX组同时加入PAN和DEX。处理后8h、24h和48h，观察细胞形态并摄像，用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差异。用RT—PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色检测各时间点podocin mRNA和蛋白的表达及分布。结果正常足细胞呈星形，胞体大并有树样突起，细胞相互连接。PAN刺激8h，足细胞胞体面积缩小，为对照组的43％；24h为10％；48h为5．7％（P〈0．01）；部分足细胞足突及细胞连接消失。DEX组在8h、24h和48h，足细胞胞体面积显著大于PAN组，分别为对照组的43．9％、26．2％及29．6％（P〈0．05），足突形态正常。PAN组podoein mRNA表达量呈下降趋势，蛋白表达量显著降低（P〈0．01），分布异常。DEX组podocin mRNA和蛋白的表达量及分布与对照组相似，48h时mRNA和蛋白的表达量均显著高于PAN组（P〈0．05）。结论DEX直接作用于足细胞，稳定podocin mRNA和蛋白的表达量及分布，该作用可能与其能保护足细胞及改善蛋白尿有关。

川芎嗪对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及相关蛋白nephrin和podocin表达的影响

目的:研究川芎嗪对高脂高糖饮食与链脲佐菌素(STZ)诱致大鼠肾脏损伤的保护作用及与相关蛋白nephrin,podocin表达的影响。方法 :将50只雄性大鼠随机分为正常组和模型组。除正常组外,其余大鼠均给予高脂-高糖饲料喂养4周,再给予STZ(40 mg/kg,ip)注射,72h后测定空腹血糖,将血糖值大于16.67mmol/L的大鼠随机分为4组:模型组,二甲双胍组(250 mg/kg),川芎嗪低剂量组(80mg/kg)和高剂量组(160mg/kg),连续给药8周。末次给药后,收集24h尿液,测定尿蛋白含量;取血测定血糖、血肌酐、尿素氮变化;光镜下观察肾脏病理学变化;Western Blot方法检测肾组织nephrin、podocin蛋白表达水平。结果:模型大鼠血糖值明显高于正常对照组,尿蛋白含量、血肌酐、尿素氮含量亦明显升高,肾组织nephrin、podocin蛋白表达水平降低。低高剂量川芎嗪治疗8周后,明显改善血糖水平,降低尿蛋白含量、血肌酐和尿素氮含量;肾组织nephrin和podocin蛋白表达增加,肾脏组织病理性损伤明显减轻。结论:川芎嗪对高糖高脂饮食与STZ诱致糖尿病大鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与诱导nephrin,podocin表达增加有关。

槐杞黄对IgA肾病大鼠蛋白尿及肾组织nephrin及podocin的影响

目的观察槐杞黄对IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)大鼠蛋白尿及肾组织nephrin及podocin的影响,探讨槐杞黄对IgA肾病大鼠蛋白尿的治疗作用及其机制。方法将24只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、槐杞黄组,每组8只。模型组和槐杞黄组建立IgA肾病模型,槐杞黄组给予槐杞黄颗粒治疗。应用定量尿沉渣计数法检测尿红细胞个数,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血生化指标。应用直接免疫荧光法检测肾小球IgA沉积强度,间接免疫荧光法检测肾小球nephrin及podocin蛋白的表达及分布,采用实时荧光定量PCR技术检测肾皮质nephrin mRNA和podocin mRNA的表达。结果①槐杞黄组大鼠的尿红细胞计数、尿蛋白,较模型组显著减少,差异有显著意义(P<0.05);②槐杞黄组大鼠肾组织病变,较模型组减轻;③槐杞黄组大鼠肾小球nephrin表达量,较模型组显著升高,差异有显著意义(P<0.01),podocin表达量较模型组稍有下降,但差异无显著意义(P>0.05);槐杞黄组大鼠肾皮质nephrin mRNA及podocin mRNA的表达,较模型组显著升高,差异有显著意义(P<0.01);④槐杞黄组大鼠肾小球nephrin及podocin的不连续斑片状、团块状异常分布,较模型组改善。结论IgA肾病大鼠肾组织nephrin及podocin出现表达变化及分布异常,槐杞黄能降低IgAN大鼠尿蛋白,其作用可能与调节nephrin及podocin的表达及分布有关。

糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠血清SREBP-1c、SREBP-2c水平及肾组织IRS-1、PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达影响

目的:观察糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠的作用及可能机制。方法:SD大鼠采用腔注射STZ方法建立糖尿病肾病模型,对造模成功大鼠分为模型组、厄贝沙坦片组(15.75mg/kg)、糖肾一号组(1800mg/kg)、糖肾一号组(900mg/kg)、糖肾一号组(450mg/kg),各15只,另设正常对照组15只,连续给药8周,观察血糖、血脂、胱抑素C、SREBP-1c、SREBP-2c水平,尿微量白蛋白,肾组织IRS-1、PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达水平。结果:与模型对照组比较,糖肾一号胶囊(900mg/kg、1800mg/kg)各组大鼠血糖、血脂、胱抑素C、尿微量白蛋白明显降低,肾脏组织IRS-1及PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达水平明显升高,糖肾一号胶囊(450mg/kg)组升高不明显,糖肾一号胶囊(900mg/kg)组与糖肾一号胶囊(450mg/kg)比较,具有统计学意义,糖肾一号胶囊(900mg/kg)为有效剂量。结论:糖肾一号胶囊通过激活胰岛素受体底物-1(IRS-1),激活胰岛素信号传导系统,达到降糖;降低血清SREBP-1c、SREBP-2c水平,调节血脂代谢;提高肾组织podocin、CD2AP蛋白表达,改善肾足细胞损伤,降低尿蛋白,进而通过上述综合作用达到改善肾脏纤维化、硬化作用。