文心兰花粉离体萌发培养基的筛选及萌发率的测定

【目的】研究不同培养基组分、培养温度及培养时间对文心兰花粉离体萌发的影响,以期筛选出文心兰花粉离体萌发的适宜培养基及培养条件,为文心兰种质资源创新利用提供科学依据。【方法】以盛花期当天开放的花朵为试验材料,采用液体培养基,比较蔗糖、H_(3)BO_(3)、Ca(NO_(3))·4H_(2)O、MgSO_(4)·7H_(2)O及KNO_(3)对文心兰花粉离体萌发的影响,正交试验筛选文心兰花粉离体萌发培养基的最佳组合及培养条件;在此基础上,测定收集保存的68份文心兰种质资源的花粉离体萌发率。【结果】一定质量浓度的蔗糖、H_(3)BO_(3)、Ca(NO_(3))·4H_(2)O、MgSO_(4)·7H_(2)O及KNO_(3)对文心兰花粉的离体萌发具有一定的促进作用,各因素的最佳作用效果从高到低依次为H_(3)BO_(3)、Ca(NO_(3))·4H_(2)O、蔗糖、MgSO_(4)·7H_(2)O及KNO_(3)。正交试验表明适宜的液体培养基组合为100 g·L^(-1)蔗糖+10 mg·L^(-1)H_(3)BO_(3)+50 mg·L^(-1)Ca(NO_(3))·4H_(2)O+20 mg·L^(-1)MgSO_(4)·7H_(2)O+30 mg·L^(-1)KNO_(3),各成分的质量浓度与单因素试验的结果一致;培养条件为25℃、黑暗培养48 h。文心兰花粉离体萌发测定结果表明,60.29%的种质资源的花粉能离体萌发,萌发率普遍较低,为0.74%~49.65%。【结论】筛选出文心兰花粉离体萌发适宜的液体培养基组合及培养条件,不同文心兰种质资源的花粉离体萌发率存在明显差异,本研究结果可为后续文心兰种质资源的创新利用及他人研究等提供参考。

小黑杨花粉离体萌发和细胞学分析

采用花粉离体培养法,研究不同的液体培养基组分、温度、pH值对小黑杨花粉萌发的影响。结果表明:在单因子试验中,蔗糖、H3BO3和CaCl2在一定的浓度范围内对小黑杨花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定浓度时则起抑制作用,温度和pH值也是如此。在正交试验中,蔗糖、H3BO3、CaCl2、温度和pH值对小黑杨花粉萌发均有极显著的影响,小黑杨花粉萌发最适的培养基为150g·L-1蔗糖+20mg·L-1H3BO3+40mg·L-1CaCl2,在21℃和pH6.0条件下,花粉的萌发率可以达到46.23%,花粉管生长状态良好。细胞学观察结果表明:小黑杨成熟花粉为2-细胞型,随着培养时间的延长,花粉萌发率逐渐提高,花粉管不断伸长。

达乌里胡枝子花粉萌发特性研究

为揭示达乌里胡枝子(Lespedeza daurica)花粉的育性并为其花粉活力检测提供一种高效方法,本试验以达乌里胡枝子新鲜花粉为试验材料,采用液体培养基,研究了蔗糖、硼酸、氯化钙浓度、采样时间、温度、光照和培养时间等因素对花粉离体萌发和花粉管生长的影响。试验结果表明:单因素试验中,适宜花粉萌发的培养基配方为20 g·L^(-1)蔗糖+40 mg·L^(-1)硼酸+80 mg·L^(-1)氯化钙,最佳镜检时间为6 h,最适采样时间为中午12:00,最适培养条件为黑暗条件下25℃,最适贮藏温度为—20℃。本试验表明,达乌里胡枝子花粉总体上活力较高,花粉离体液体培养是一种高效、简单、快捷、可靠的检测方法,但在培养条件的选择上应加以优化。

拟南芥花粉体外和体内2种萌发差异的比较研究

[目的]比较拟南芥花粉体外和体内2种萌发的差异。[方法]以模式植物拟南芥作为研究对象,采用荧光显微镜观察比较2种体外萌发培养基的萌发率差异并比较体外萌发率和体内萌发率的差异。[结果]花粉在固体培养基上的萌发率平均为51.01%,而在液体培养基上萌发率平均为83.97%;在体外,液体萌发培养基优于固体萌发培养基,液体培养基萌发率较固体培养基萌发率高,稳定;体内萌发较体外萌发稳定,萌发率高,平均萌发率为94.00%。[结论]研究结果为检测花粉活力提供了一个有效的检测标准,为拟南芥花粉的生物学研究提供理论与方法。

五味子花粉活力的液体培养测定

该试验以五味子新鲜花粉为试材,研究了不同浓度的蔗糖和硼酸对花粉离体萌发的影响。结果表明:当蔗糖和硼酸在一定浓度范围内时,对花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定浓度时起抑制作用。五味子花粉离体萌发最适合的液体培养基配方为10%蔗糖+50mg·kg-1硼酸。

适宜水稻花粉萌发的液体培养基的优化

花粉萌发率是检测花粉活力的一个重要指标,但实践中还缺少便捷、可靠的水稻花粉萌发率测定方法。作者在前人研究的基础上,以两系杂交中稻两优818为试验材料,采用液体培养基对相关培养条件进行了优化。结果表明,采用155 g/L蔗糖+20 mg/L H3BO3+40 mg/L CaCl2+5 mg/L V-B1相配合的培养基较适合花粉的萌发,萌发率最高可达63.78%。此外,该培养方法具有培养条件要求不高、发芽结果稳定性好、培养基分布均匀等优点。

杜仲花粉离体萌发特征及花粉管微丝骨架分布

以干燥的杜仲成熟花粉为材料,对杜仲花粉离体萌发的适宜液体培养基配方进行了筛选,并对花粉萌发特征及花粉管微丝骨架分布规律进行了研究。结果表明:(1)适宜杜仲花粉离体萌发的液体培养基组成为200g/L蔗糖+30mg/L硼酸+10mg/L Ca(NO3)2,于26℃条件下离体培养18h的花粉萌发率可达46.29%±3.75%。(2)在适宜液体培养条件下,杜仲花粉萌发率在培养6h内急剧增长,随后趋于平稳;而花粉管在培养8h内伸长较快,之后有放缓趋势,至培养48h时,花粉管长度可达363.14±30.51μm。(3)杜仲花粉属于2胞花粉,花粉萌发过程中,营养核和生殖核的移动存在一定的时序性,通常营养核先于生殖核进入到花粉管;杜仲花粉生殖核的有丝分裂发生在花粉管中,离体培养12h可逐渐观察到有丝分裂行为。(4)花粉萌发过程,微丝骨架形成束状,与花粉管伸长方向平行排布,与较为稀疏的网状微丝阵列组成连续系统,引导细胞核的运动。

竹叶兰花粉离体萌发及其贮藏特性

以竹叶兰新鲜花粉为试验材料,采用液体培养基,在单因素试验的基础上,设计正交试验,比较蔗糖、H 3BO 3和CaCl 2对竹叶兰花粉萌发的影响;另外,进行竹叶兰花粉贮藏性试验,测定竹叶兰单花花期内花粉萌发率的变化,旨在筛选出竹叶兰花粉离体萌发的适宜液体培养基组分配比和贮藏条件,为其种质资源保存等研究奠定基础。结果表明:(1)单因素试验中,在一定的浓度范围内的蔗糖、H 3BO 3和CaCl 2,对竹叶兰的花粉萌发具有一定的促进作用,超过一定浓度则起抑制作用;(2)正交试验中,蔗糖和CaCl 2对竹叶兰花粉萌发有显著影响,适宜的花粉离体萌发培养液为100 g·L^-1蔗糖+20 mg·L^-1H 3BO 3+5 mg·L^-1 CaCl 2,花粉萌发率58.71%;(3)贮藏性试验中,竹叶兰花粉在4、-7和-25℃中贮藏相同时间,温度越低,花粉活力相对保存越好;(4)竹叶兰单花花期约为3 d,开花当天花粉萌发率58.71%,而后花粉萌发率呈下降趋势。

不同培养和储藏条件对北美豆梨、我国杜梨花粉萌发的影响

为探明北美豆梨和杜梨花粉萌发的适宜条件和最佳液体培养基组分,以北美豆梨‘克利夫兰’‘三体’和我国的杜梨花粉为材料进行了培养温度,蔗糖、H_(3)BO_(3)和Ca(NO_(3))_(2)质量浓度以及贮藏方式对花粉萌发影响的试验,利用L_(16)(4^(3))正交试验设计对液体培养基组分进行了筛选优化。结果表明:杜梨及北美豆梨花粉萌发的适宜温度为25℃,蔗糖质量浓度为150 g·L^(-1);适宜杜梨、‘克利夫兰’和‘三体’花粉萌发的H3BO3质量浓度分别为50,100,50 mg·L^(-1),Ca(NO_(3))_(2)质量浓度分别为50,100,50 mg·L^(-1);-20℃和-40℃冷冻贮藏是3种花粉保存的最佳方式;杜梨、‘克利夫兰’和‘三体’花粉萌发的最适液体培养基分别为:150 g·L^(-1)蔗糖+100 mg·L^(-1)Ca(NO_(3))_(2)+50 mg·L^(-1)H_(3)BO_(3),100 g·L^(-1)蔗糖+100 mg·L^(-1)Ca(NO_(3))_(2)+150 mg·L^(-1)H_(3)BO_(3),130 g·L^(-1)蔗糖+50 mg·L^(-1)Ca(NO_(3))_(2)+150 mg·L^(-1)H3BO3。

生菜花粉活力测定及方法优化

【目的】为测定生菜花粉的活力,优化生菜花粉离体萌发培养基,筛选最适的培养时间、温度及转速。【方法】以生菜品种‘S39’为材料,使用BK培养基和ME_(3)培养基测定生菜花粉的萌发率,并在这两种培养基的基础上添加不同质量浓度聚乙二醇1500和聚乙二醇4000,测定不同培养温度、时间及转速下的花粉萌发率。【结果】生菜花粉在BK培养基和ME_(3)培养基中萌发率均极低,添加300 g/L聚乙二醇4000能极显著提高生菜花粉的萌发率。最适的培养条件为33℃100 r/min摇床中避光培养12 h。【结论】采集生菜‘S39’完全开放时期的花粉,使用优化后的培养基:200 g/L蔗糖+0.1 g/L H_(3)BO_(3)+0.236 g/L Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O+0.04 g/L CaCl 2·H_(2)O+0.12 g/L MgSO_(4)·7H_(2)O+300 g/L聚乙二醇4000在33℃,100 r/min摇床中避光培养12 h,花粉萌发率最大能达到67.30%。该研究对生菜新品种的选育具有重要的意义。

硼酸、蔗糖和pH值对火龙果花粉离体萌发和花粉管伸长的影响

为明确硼酸、蔗糖和pH值对火龙果花粉离体萌发特性的影响,本研究以新鲜花粉为材料,采用液体培养基离体培养法,结合单因子与正交设计试验,以期优化液体培养基组分。结果表明,蔗糖、硼酸和pH值三因素均对火龙果花粉离体萌发和花粉管伸长产生极显著影响,因素间存在交互作用。其中,对花粉离体萌发率的作用大小表现为硼酸×蔗糖>蔗糖>蔗糖×pH>硼酸>硼酸×蔗糖×pH>pH>硼酸×pH,对花粉管长度影响程度为蔗糖>pH>硼酸×蔗糖>硼酸>硼酸×pH>蔗糖×pH>硼酸×蔗糖×pH。促进花粉萌发的最佳组分为500 mg/L硼酸+25%蔗糖+pH 6.5,促进花粉管伸长的最佳组分为300 mg/L硼酸+20%蔗糖+pH 7.5。本研究为建立最佳火龙果花粉离体萌发的液体培养基配方奠定基础,也为生产中提高辅助授粉效率、加快人工杂交育种进程提供参考。

培养基pH值及蔗糖、硼酸、PEG-4000对百香果花粉体外萌发的影响

为明确培养时间、培养基pH值、蔗糖、硼酸、PEG-4000对百香果花粉离体萌发的影响,筛选出花粉体外萌发的适宜条件、优化液体培养基组分,本研究以‘台农一号’百香果花粉为材料,采用液体培养基离体培养的方法,开展单因素及正交试验,并用‘台农一号’及‘黄果’百香果的花粉验证了最适宜培养基的萌发率。结果显示:培养时间、培养基pH值、蔗糖、硼酸、PEG-4000对花粉萌发率及花粉管生长均有显著的影响。培养时间为4 h,培养基pH值为5.5时萌发率最高,蔗糖、硼酸、PEG-4000为百香果花粉离体萌发的必需物质,适当的浓度可促进花粉萌发及花粉管的生长,但浓度过高起抑制作用,因素间存在明显的互作效应。百香果花粉离体萌发的最佳培养基为:150 g/L蔗糖+150 g/L PEG-4000+25 mg/L H_(3)BO_(3)+300 mg/L Ca(NO_(3))_(2)·4H_(2)O+200 mg/L Mg SO_(4)·7H_(2)O+100 mg/L KNO_(3),‘台农一号’百香果及‘黄果’百香果花粉在该培养基中的离体萌发率分别为95.99%及92.35%。本研究筛选到的适宜百香果花粉体外萌发的培养条件及萌发率高的液体培养基,为生产及杂交育种中的人工授粉及百香果孢粉学研究提供参考。