基于水负荷动物模型及生物信息学虎杖利湿作用的初步研究

目的:通过制备小鼠水负荷模型观察虎杖的利湿作用,并基于生物信息学初步探讨其发挥作用的物质基础及可能机制。方法:设置虎杖水提液不同剂量组(9.2、4.6、2.3 g·kg^(-1))构建小鼠水负荷模型;采用ICP-OES法测定小鼠尿液中的钠钾离子浓度;在TCMSP数据库预测虎杖活性成分靶点,Genecards数据库获取湿病相关靶标;取两者交集构建PPI网络并优化,利用Cytoscape3.8.0软件构建“药物-成分-靶点-疾病-通路”网络;在DAVID6.8数据库富集分析交集靶点;借助AutoDock Tools-1.5.7软件进行分子对接。结果:实验表明虎杖水提液中剂量组(4.6 g·kg^(-1))利尿效果显著(P<0.05),可促进钠、钾离子排泄。网络数据库及软件高通量分支和整体筛选中获取虎杖活性成分27个,药物和湿病交集靶点275个;核心靶点为STAT3、TP53、SRC;活性成分包括芹菜素、木犀草素、槲皮素等;相关通路主要涉及AGE-RAGE信号通路、催乳素信号通路、HIF-1信号通路。结论:通过网络可视图及网络组学分析技术初步预测了虎杖发挥利湿作用的关键成分、靶点及相关通路,可为其利湿功效的物质基础研究和临床应用提供理论依据。

低共熔溶剂对虎杖中虎杖苷的高效绿色提取工艺优化研究

目的建立虎杖中虎杖苷绿色高效提取方法。方法以中药虎杖粉末为原料,虎杖苷提取率为指标,优选的低共熔溶剂(deep eutectic solvent,DES)为提取溶液,对DES的摩尔比和含水量,以及提取工艺(温度、时间、固液比)进行参数优化。结果氯化胆碱-乙二醇(choline chloride-ethylene glycol,ChCl-Gly),氯化胆碱-乳酸(choline chloride-lactic acid,ChCl-Lac),甜菜碱-乳酸(betaine-lactic acid,Bet-Lac)DES是适宜的绿色提取溶剂,其最佳提取参数分别为:氯化胆碱-乙二醇溶液摩尔比为1∶4,含水量为40%(v/v,下同),固液比为1∶10(g/mL,下同),搅拌温度为80℃,搅拌时间为45 min;氯化胆碱-乳酸溶液,摩尔比为1∶3,含水量为40%,固液比为1∶20,搅拌温度为40℃,搅拌时间为30 min;甜菜碱-乳酸溶液,摩尔比为1∶4,含水量为60%,固液比为1∶20,搅拌温度为40℃,搅拌时间为30 min,虎杖苷的提取含量相比于《中华人民共和国药典》2020版提取方法有极大地提升。结论氯化胆碱-乙二醇、氯化胆碱-乳酸、甜菜碱-乳酸等低共熔溶剂可以替代传统的稀乙醇作为虎杖中虎杖苷的高效绿色提取溶剂,且该方法操作简便,用时短,效率高。

常见中药在治疗血脂异常中的研究新进展

血脂异常是由多种复杂原因导致的人体代谢性疾病,山楂、银杏叶、绞股蓝、泽泻、虎杖作为常见中药,在治疗血脂异常中具有一定的作用。本文总结了国内外最新研究进展,综述了常见中药山楂、银杏叶、绞股蓝、泽泻、虎杖等在治疗血脂异常中的作用,提示这些中药在防治血脂异常相关疾病如动脉粥样硬化中具有十分重要的意义。

不同生长年限虎杖高效液相色谱指纹图谱研究

目的建立不同生长年限虎杖的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,比较其化学成分的差异。方法色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为286 nm,柱温为25℃,进样量为20µL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版软件建立25批(采收时间分别为移植后第1,2,3,4,5年,各5批)虎杖的HPLC指纹图谱,计算相似度;采用SIMCA-P 14.1软件建立偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型,分析其中化学成分的差异。结果共标定19个共有峰,相似度为0.906~0.993。不同生长年限虎杖明显聚为5类,共筛选出6个差异标记物,按影响大小依次为峰15>峰6(虎杖苷)>峰8(白藜芦醇)>峰17(大黄素)>峰5>峰1。结论HPLC指纹图谱结合PLS-DA法能反映不同生长年限虎杖化学成分的差异,可为其采收和质量评价提供参考。

大黄、虎杖、何首乌止血作用的比较研究

目的采用多批次商品药材混合粉末水提物比较大黄、虎杖、何首乌的止血作用。方法将10批次的大黄、虎杖、何首乌药材粉碎,分别将10批次的同种药材等比混匀,以各药材的混合粉末水提物给药。采用毛细玻管法测定小鼠的凝血时间,计算凝血时间缩短率。结果大黄、虎杖、何首乌均有缩短小鼠凝血时间的作用,且随着剂量的增加作用增强。结论多批次商品药材混合的方法适用于不同药材间同一药效的比较,既节约资源,又增强了代表性和重复性。实验结果表明,大黄的止血作用最强,其次为虎杖,何首乌最弱。

基于健脾解毒方中虎杖抗肝癌的物质基础及潜在作用机制研究

目的通过网络药理学和分子对接技术,预测和分析健脾解毒方中虎杖发挥抗肝癌作用的物质基础及其机制。方法经TCMSP平台筛选和Pubmed数据库文献挖掘来收集虎杖活性成分。借助PharmMapper平台获取各活性成分的预测靶点,并从OncoDB.HCC数据库收集人肝癌疾病靶点,将两者取交集后得到共同的肝癌靶点。借助String平台和Cytoscape软件展示和分析肝癌靶点相互作用网络(PPI)。借助DAVID平台对肝癌靶点进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。应用分子对接软件对关键靶点和活性成分进行虚拟对接和打分。结果纳入研究的活性成分共有17个,主要作用于35个靶点,涉及10条信号通路。网络分析结果显示:虎杖可作用于MAPK1、MMP9、ALB、ESR1和CASP3等关键靶点和调控TNF、Rap1、ErbB、GnRH、PI3K-Akt等信号通路而发挥抗肝癌作用。分子对接显示共有13个成分能与MAPK1发生对接(分数>100);其中7个成分为蒽醌类化合物。结论初步揭示了虎杖治疗肝癌具有多靶点、多通路的作用特点;蒽醌类成分可能是其抗肝癌的主要物质基础。

虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量标准值与不确定度评估分析方法研究

目的利用国家级有证纯度标准物质的量值传递,采用高效液相色谱(HPLC)技术和多家协作分析方法,完成中药材虎杖中的虎杖苷和白藜芦醇成分含量标准值及不确定度评估方法研究。方法通过对检测方法中的各种影响因素分析,建立了不确定度评估的数学模型,实现对复杂中药材体系中两种化学成分含量的标准值及不确定度评估研究。结果采用HPLC法,可同时完成对中药材虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量的标准值及扩展不确定度评估,虎杖苷含量为(1.47±0.04)%、白藜芦醇含量为(0.29±0.01)%。结论所建立的针对中药材复杂体系中两种化学成分含量的标准值及不确定度评估方法,可准确定量表征不同化学成分含量,为中药材或中成药中的相关成分质量控制,提供了与国际分析化学接轨的科学检测分析技术与新的检测评价分析方法,对于中药的标准化和质量控制具有重要的科学意义和应用价值。

3种中药成方制剂中何首乌、虎杖、决明子薄层鉴别方法的建立

目的建立中药成方制剂中含有何首乌、虎杖、决明子等药材的特异性成分的鉴别方法。方法采用薄层色谱法,何首乌以二苯乙烯苷、虎杖以虎杖苷、决明子以橙黄决明素为成分鉴别指标,对乙肝扶正胶囊、舒胆片、脂降宁片进行了药材鉴别研究,并与原方法进行了比较。结果新建立的薄层图谱成分斑点清晰,阴性样品无干扰。结论改进后的方法操作简单,结果稳定,特异性强,重复性好,可用于此3种中药成方制剂的质量控制。

基于网络药理学和分子对接探讨虎杖治疗脓毒症的作用机制

【目的】应用网络药理学探讨虎杖治疗脓毒症的作用机制,并通过分子对接技术进行初步验证。【方法】通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和相关文献获取虎杖主要化学成分并预测作用靶标,从GeneCards、OMIM数据库获得脓毒症的疾病靶标,将脓毒症靶标与虎杖有效成分靶标通过R软件处理并绘制韦恩图。利用Cytoscape 3.8.0软件和STRING数据库构建药物-成分-靶标网络、药物-疾病靶标蛋白互作网络(PPI)。对交集靶标进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后对核心靶标和有效成分采用分子对接验证。【结果】筛选出虎杖10个药物活性成分和63个潜在作用靶标。活性成分主要为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、毒扁豆次碱、大黄酚、儿茶酚、6,8-二羟基-7-甲氧基呫吨酮。TP53、IL6、ESR1、CASP3、HIF1A、VEGFA等是筛选出来的核心靶标。GO富集结果主要集中在氧化应激反应、活性氧代谢过程、凋亡信号通路的调控与负调控等功能。KEGG主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、晚期糖基化产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路。分子对接验证了网络药理学结果。【结论】虎杖可能通过β-谷甾醇、毒扁豆次碱、大黄酚等多种活性成分,作用于TP53、IL6、CASP3、HIF1A、VEGFA等多种关键靶标,发挥对PI3K-Akt、AGE-RAGE、MAPK等多个信号通路的调节作用,进而在干预炎症反应、细胞自噬、免疫应答等方面对脓毒症治疗产生积极作用。

超声波辅助提取虎杖中的白藜芦醇的工艺研究

[目的]优选超声波辅助提取虎杖中白藜芦醇的最佳工艺。[方法]采用超声波提取,通过正交试验考察提取时间、提取温度、超声功率对虎杖中白藜芦醇提取率的影响。[结果]虎杖中提取白藜芦醇的最佳工艺为:以无水乙醇为提取剂,超声波的提取温度为80℃,提取时间为45 min,提取功率为200 W。在此条件下,虎杖中白藜芦醇的提取率可以达到0.940%。[结论]用超声波辅助提取虎杖中的白藜芦醇,工艺稳定性好且简便易行,为有效提取白藜芦醇提供了一种安全可靠的方法。

虎杖提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的研究虎杖水溶性提取物对α-葡萄糖苷酶的作用。方法采用大孔吸附树脂柱色谱法进行虎杖水溶性总提取物初步分离,研究其总提取物和不同组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响及其抑制反应的类型。结果虎杖总提取物(RRPC)与30%醇洗脱物(RRPCⅡ)对α-葡萄糖苷酶的IC50分别为74、15μg/mL,而蒸馏水(RRPCⅠ)、50%乙醇(RRPCⅢ)、70%乙醇(RRPCⅣ)、95%乙醇(RRPCⅤ)洗脱物的IC50均大于200μg/mL。结论RRPC及RRPCⅡ能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,RRPCⅡ的抑制机制为可逆性的非竞争性抑制。

RP-HPLC法测定大鼠血浆中虎杖苷浓度及药动学研究

目的:建立大鼠血浆中虎杖苷浓度的RP-HPLC测定方法,研究虎杖苷在大鼠体内的药动学特点。方法:色谱柱为C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(26:74),流速1mL·min^(-1),检测波长为303nm。健康大鼠灌胃虎杖提取物,测定不同时间的血药浓度。血浆以10%三氯醋酸直接沉淀蛋白,离心取上清液进行HPLC法检测。采用3P97药动学软件对血药浓度-时间数据进行拟合,求算相应的药动学参数。结果:大鼠灌胃虎杖提取物后,其主要药动学参数为:T_(max)= (21.36±2.44)min,C_(max)=(1.33±0.12)μg·mL^(-1),k_a=(7.33±0.01)min^(-1),T_(1/2ka)=(9.60±1.33)min,T_(1/2a)=(21.11±4.28) min,T_(1/2β)=(35.18±14.65)min,CL=(0.53±0.04)L·min^(-1),V_d=(20.77±2.36)L·kg^(-1),AUC=(95.09±7.87)μg·min·mL^(-1)。结论:虎杖苷在大鼠体内的药动学过程符合二室开放模型,进入体内迅速分布,代谢消除也较快。

微乳液相色谱法测定虎杖中2种成分的含量

目的 建立虎杖中大黄素、大黄素甲醚含量的微乳液相色谱测定法。方法以微乳为流动相，色谱柱采用Hypersil BDS C185μm（4．6mm×150mm），检测波长为287nm，流速1ml／min，柱温30℃。外标峰面积法同时测定虎杖中大黄素和大黄素甲醚的含量。结果大黄素和大黄素甲醚的线性范围分别为5．3-53．0μg／ml（r=0．9999）和2．4～24．0μg／ml（r=1．0000），平均回收率和相对标准偏差（RSD）值（n=6）分别为97．7％，1．25％；97．6％，1．82％。结论本法简便快速精确，可用于虎杖中大黄素、大黄素甲醚的含量测定。

复方虎杖烧伤凝胶抗炎镇痛作用实验研究

目的:观察复方虎杖烧伤凝胶的抗炎、镇痛作用。方法:采用不同的炎症和疼痛模型观察复方虎杖烧伤凝胶对实验动物的抗炎、镇痛作用。结果:复方虎杖烧伤凝胶能有效降低小鼠毛细血管通透性,明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及蛋清所致的大鼠足趾肿胀。镇痛实验表明复方虎杖烧伤凝胶能使醋酸所致小鼠扭体次数明显减少,扭体反应的潜伏期显著延长,并提高小鼠对热刺激的痛阈值。结论:复方虎杖烧伤凝胶具有明显的抗炎镇痛作用。

高效液相色谱法测定复方虎杖烧伤凝胶中没食子酸的含量

目的建立以高效液相色谱法测定复方虎杖烧伤凝胶中没食子酸的含量。方法色谱柱:RromsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(15:85);检测波长:273nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:25℃。结果没食子酸在进样量为0.119～0.792μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.5%,RSD为1.93%(n=5)。结论该法灵敏度高、准确性高、重复性好,可作为复方虎杖烧伤凝胶的质量控制方法。

胆宁片中大黄与虎杖的定量研究

采用ＨＰＬＣ法测定了胆宁片中大黄酚和大黄素—６—甲醚的含量，前者标示了对大黄的定量分析；后者成分系同大黄和虎杖两味中药的贡献。为能正确地反映虎杖中该成分的含量，本研究通过对原药材大黄中的大黄素—６—甲醚和大黄酚的含量比值（Ｆ），以及胆宁片中该两成分的含量，推导了一个计算公式，以计算虎杖中大黄素—６—甲醚的含量，由该公式所测得的数据再经实验验证，证明本公式切实可行，并为中成药中同时存在二味具有相同有效成分的分别定量提供了一条新的分析途径。

复方虎杖烧伤凝胶的制备及质量标准

目的:制备复方虎杖烧伤凝胶并建立其质量标准。方法:以卡波姆-940为基质制备凝胶,用TLC法鉴别凝胶中五倍子、阿魏酸,采用HPLC法测定其中大黄素的含量。结果:复方虎杖烧伤凝胶外观良好、易涂展,pH适宜。薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰。大黄素在进样量为0.030 6～0.1734μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率为99.6%,RSD=1.55%(n=5)。结论:复方虎杖烧伤凝胶制备工艺简单、可行。五倍子和阿魏酸的薄层色谱鉴别方法可靠,大黄素含量测定方法灵敏度高、准确性高、重复性好,可作为复方虎杖烧伤凝胶的质量控制方法。

炮制对大黄、虎杖抗氧化作用的影响

目的 :研究炮制对大黄、虎杖抗氧化作用的影响。方法 :采用体外氧自由基生成系统和羟自由基诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化反应 ,评价炮制对大黄、虎杖抗氧化作用的影响。结果 :大黄、虎杖炮制品均可清除次黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶系统所产生超氧阴离子 (O2 ·)以及Fenton反应生成的羟自由基 (·OH) ,并能抑制羟自由基诱导的小鼠肝脏匀浆脂质过氧化 ,各炮制品EC50 之间有一定显著性差异。结论 :炮制降低大黄、虎杖抗氧化能力。

高效液相色谱法测定虎杖中的白藜芦醇含量

[目的]以乙醇为萃取剂,优化提取条件,建立高效液相色谱测定虎杖中的白藜芦醇的方法。[方法]色谱柱为phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为无水甲醇-(浓度0.25%)乙酸(65∶35,V/V)等梯度洗脱,流速为0.8 ml/min,检测波长306 nm,以白藜芦醇的提取得率为评价指标,采用单因素试验和L25(54)正交试验法筛选最佳工艺条件。[结果]提取白藜芦醇的最佳工艺为:乙醇浓度为60%,料液比为1∶30(g/ml),萃取温度为55℃,萃取时间为15 min;在此条件下,提取的白藜芦醇的提取得率达到0.826μg/g。[结论]该方法简便、快捷、准确性高,适用于虎杖中的白藜芦醇的测定。

复方虎杖烧伤凝胶的毒性实验

目的观察复方虎杖烧伤凝胶的毒性作用,评价其安全性。方法对家兔进行完整皮肤和破损皮肤的急性毒性试验、单次给药及多次给药的刺激性试验;对豚鼠进行过敏性试验。结果复方虎杖烧伤凝胶对家兔完整皮肤和破损皮肤均未引起毒性反应;单次给药及多次给药对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性;对豚鼠未产生致敏反应。结论复方虎杖烧伤凝胶皮肤给药使用安全。