虎杖根不同溶剂提取物的抗氧化活性研究

为探究虎杖根6种不同溶剂提取物的抗氧化活性,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、2,2-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)铵盐(ABTS)自由基清除法和总还原力检测法对6种不同溶剂虎杖根提取物进行抗氧化能力评价。选用抗氧化活性较强的95%乙醇提取物进行细胞层面内源性抗氧化能力的研究,评价其对抗氧化基因Nrf2、SOD、CAT、HO-1的调控作用。结果表明,相较于其他5种提取物,95%乙醇提取物的抗氧化能力最强且具有最高的多酚含量。95%乙醇提取物可显著增加Nrf2、SOD、CAT、HO-1等抗氧化基因的表达。95%虎杖根乙醇提取物具有较好的抗氧化活性,具有开发成为天然抗氧化剂的潜力。

利用基因转化提高虎杖毛状根中活性成分的含量

通过转白藜芦醇合酶（resveratrol synthase，RS）基因提高虎杖毛状根中主要活性成分——白藜芦醇（resveratrol，RE）和白藜芦醇苷（polydatin，PD）的含量。用改进的高盐低pH法提取葡萄基因组DNA，通过PCR扩增获得RS基因序列，构建表达载体pCAMBIA1300—35S—RS，然后采用冻融法转化发根农杆菌ATCC11325，继而浸染划伤的虎杖无菌幼苗叶片，PCR和RT—PCR法鉴定RS基因在虎杖毛状根中的整合与表达，高效液相色谱（highly effective liquid chromatography，HPLC）法测定转基因毛状根中RE及PD的含量。首次成功诱导获得转RS基因虎杖毛状根，经鉴定该基因已在虎杖毛状根中得到整合与表达，RE和PD的含量分别为17～187μg·g^-1DW和836～1970μg·g^-1 DW，而未转基因虎杖毛状根中RE和PD的含量分别为0～130μg·g^-1 DW和190～320μg·g^-1 DW。在所选取的不同根系中，转基因毛状根PD的含量均得到显著提高，最高含量是未转基因毛状根的5倍，而RE含量提高不显著。

激素诱导和非生物胁迫对虎杖根中白藜芦醇含量影响及虎杖根中白藜芦醇闪提工艺优化

用紫外辐射和水杨酸、乙烯利、H2O2溶液对新鲜虎杖根进行处理,探究其对新鲜虎杖根中白藜芦醇含量的影响。采用闪式提取法从虎杖根中提取白藜芦醇,在单因素实验的基础上进行正交实验探究最佳提取工艺条件,用HPLC对白藜芦醇进行定性定量分析。结果表明:紫外辐射15 min,暗处理24 h后虎杖根中白藜芦醇的含量达到最大值,较辐射前提高了72%。10 mmol/L水杨酸溶液浸泡24 h后虎杖根中的白藜芦醇含量提升到原来的4倍多。5%H2O2溶液浸泡24 h后虎杖根中白藜芦醇含量上升了34%。而乙烯利溶液浸泡则会降低白藜芦醇的含量。闪式提取法提取虎杖根中白藜芦醇的最佳工艺条件是:提取温度50℃,提取时间60 s,乙醇浓度80%,料液比例1∶30 g/m L,在此条件下,白藜芦醇得率为0.1877%。

中医解毒法优化干预对BALB/c结肠癌小鼠CEA、sCD44的实验研究

目的:探索中医解毒法协同化疗在结肠癌辅助治疗阶段的优化治疗模式,并初步探讨作用机制。方法:1)皮下接种CT-26细胞于50只BALB/c小鼠建立移植瘤模型,分为5组:提前干预组10只、延后干预组10只、单纯中药组10只、单纯化疗组10只、模型对照组10只。同时增设阴性对照组10只。2)5组移植瘤模型小鼠以及1组阴性对照组小鼠,治疗期间定期监测体重及瘤体变化。分组取血,分离血清,取瘤称瘤重,计算抑瘤率。3)ELISA法检测各组血清CEA、sCD44含量。结果:1)抑瘤率:两药合用组的抑瘤率约50%～60%,单纯化疗组约40%,单纯中药组约20%。抑瘤率从高到低依次为提前干预组、延后干预组、单纯化疗组、单纯中药组。2)小鼠去瘤体重变化:治疗末提前干预组、单纯中药组小鼠去瘤体重较治疗前增加,单纯化疗组、延后干预组、模型对照组治疗后体重下降。3)ELISA结果显示:各治疗组CEA、sCD44含量较模型对照组均有下降,两药合用组较单药治疗组下降明显。提前干预组、延后干预组、单纯化疗组的CEA、sCD44含量与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中医解毒法协同化疗能抑制肿瘤的作用机制可能与降低血清CEA、sCD44表达有关。

不同产地虎杖根FTIR主成分分析研究

借助于傅里叶变换红外光谱分析仪,采用主成分分析法对来自7个产地的虎杖根在植化组成上的相似性进行了聚类分析。结果表明:虎杖样品在4000～1700cm-1区域有相似的红外光谱特征,而在1700～900cm-1区域不同产地的样品又存在一定的差异。据此将虎杖的产地分为6个区,分区与各产地的地理位置和气候条件有一定的相关性,同一区内虎杖的化学组分相似。红外光谱法可以快速、简便、直观地对中药材进行聚类分析和质量鉴别。

C18色谱柱的高效液相色谱法分析植物多环芳烃环境毒素

拟建立一套快速、准确且能应用于常规实验室检测植物中多环芳烃（PAHs）的方法。采用常规C18色谱柱代替PAHs专用色谱柱,并通过单因素和正交实验对色谱条件进行优化。采用检测波长300 nm、柱温30℃、进量样20μL、流速0.7 mL/min、乙腈作流动B相以0~3 min（50%A＋50%B）、3~30 min（100%B）梯度洗脱程序,各多环芳径的峰面积与其浓度呈良好的线性关系,相关系数≥0.9990,相对标准偏差均≤2%。研究建立的以C18色谱柱代替PAHs专用色谱柱检测方法,不仅能快速、准确的检测植物中PAH,而且降低了检测设备成本。

药用植物虎杖毛状根DNA提取方法研究

采用高盐低pH法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法提取发根农杆菌ATCC11325感染蓼科多年生药用植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.etZucc.)叶片产生毛状根的基因组DNA,并进行了电泳分析、含量检测及特异PCR扩增.结果表明:改良CTAB法解决了虎杖富含多酚、多糖等类物质难以提取高质量DNA的问题,提取的DNA质量较好,纯度较高,能满足进一步的实验要求.

虎杖的化学成分研究

目的对虎杖根及根茎的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱进行分离,通过化学和波谱分析方法鉴定化合物结构。结果从其乙醇提取物的乙醚部分分离得到7个化合物,分别鉴定为大黄素甲醚(Ⅰ)、大黄素(Ⅱ)、黄葵内酯(Ⅲ)、β-谷甾醇(Ⅳ)、齐墩果酸(Ⅴ)、香豆素(Ⅵ)和2-乙氧基-8-乙酰基-1,4-萘醌(Ⅶ)。结论化合物Ⅶ为新化合物,命名为虎杖素A(cuspidatumin A),Ⅲ为首次从虎杖中分得。

虎杖根系脱土滑梳式辊指的设计与试验

根系脱土是中药虎杖收获的重要环节,采用直线梳刷式脱土辊指实现根土分离极为有效,然而直辊与根系作用时,常出现相互勾连、扯拉等不良状况,致使脱土功耗显著增加,为此该文融入滑切方式,设计了一种曲线滑梳式脱土辊指。根据滑切理论,确定了辊指滑梳的临界条件,利用对数螺线方程建立了辊指梳刃的曲线方程,通过辊指的动力学分析,建立了辊指作业的功耗模型,确定了辊指转速、辊指作业长度、辊指滑切角为功耗的主要影响因素,并根据摩擦角与滑切角关系,利用Matlab软件得到摩擦角和滑切角与功耗的伪彩色能量图,确定功耗最小所对应的辊指滑切角为67°。进行功耗及脱净率试验,利用多目标优化设计方法对试验结果进行综合评价。结果表明:在辊指转速为350 r/min、辊指作业长度为30 mm、辊指滑切角为67°时,脱土辊指的作业性能较优,此时脱净率为93.03%,功耗为76.73 W。研究结果可为虎杖根土分离部件的结构改进设计和作业参数优化提供依据。

反相高效液相色谱法测定虎杖根中白藜芦醇及其苷的含量

建立反相高效液相色谱法同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇含量。采用KromasilC18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-1.0%磷酸水溶液（50：50,v/v）,流速0.8mL/min,检测波长319nm,柱温为30℃。虎杖苷和白藜芦醇的进样量分别在0.716~7.160μg（r=0.9996）和0.740~7.400μg（r=0.9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率（n=6）分别为99.7%和98.5%。本方法快速简便,重复性好,专属性强,可作为虎杖根的质量控制方法。

烧伤新软膏质量标准研究

为了有效地控制烧伤新软膏的质量，采用薄层色谱法对其中虎杖、黄连、白芷进行鉴别，并用薄层扫描法测定其中大黄素的含量，加样回收率为１００．８６％，ＲＳＤ＝１．６％（ｎ＝６）．应用紫外分光光度法测定其中小檗碱含量，加样回收率为９８．３９％、ＲＳＤ＝０．５６％（ｎ＝６）．

发根农杆菌介导的虎杖转基因体系优化

为建立虎杖高效遗传转化体系,用携带有植物表达载体pCAMBIA1301的发根农杆菌ATCC15834侵染虎杖无菌苗获得毛状根。对影响虎杖毛状根诱导的因素(如外植体种类、农杆菌活力、培养基种类、超声波辅助时间)进行优化,以获得最佳培养条件;通过潮霉素筛选阳性毛状根,以确定最佳潮霉素浓度。结果表明:以叶片为外植体、1/2MS为培养基、菌液OD600=0.8、超声波辅助5 s时,虎杖遗传转化毛状根效果最佳;筛选出的毛状根经GUS染色和PCR分子鉴定,该方法的阳性转化率为92%。该研究优化了虎杖毛状根的培养条件,为后期试验探究建立了更加高效的虎杖转基因体系。

虎杖RGF多肽的系统进化分析及其在根发育中的功能研究

目的鉴定与分析了虎杖中RGF多肽序列特征,阐明虎杖RGF多肽对植物根型的调控作用,为虎杖优形优质新品种奠定了理论研究基础。方法利用生物信息学的方法鉴定了虎杖RGF编码基因,并对其基序进行了比对、偏好性分析及系统进化分析。利用模式植物拟南芥根发育的体系,研究了虎杖PcRGF对根发育的影响。结果从虎杖基因组中鉴定出5个RGF基因(PcRGF1-5),系统进化分析表明PcRGF2-5与拟南芥AtRGF1、AtRGF4的亲缘关系较近,聚类为一族。PcRGF1与其他虎杖PcRGF较为分散,同拟南芥AtRGF9、AtRGF6的亲缘关系较近。与对照组相比,PcRGF2及PcRGF5影响根的重力反应,抑制了根的波浪(waving)表型。PcRGF4处理后主根长度相对于对照组显著增加,表明其促进根的生长。结论揭示了虎杖RGF家族的序列特征和系统进化关系,初步探究了虎杖PcRGF的生物学功能,发现虎杖PcRGF具备调控根发育的保守功能。

虎杖根中黄酮类化合物对脂氧合酶活性抑制

从虎杖根中提取黄酮类化合物,并研究了提取出的虎杖根黄酮类化合物对大豆和毛尖茶叶中脂氧合酶活性的抑制作用,并与人工合成抗氧化剂BHA和BHT的抑制作用进行比较,结果表明:虎杖根中黄酮类化合物提取率为16.92%。虎杖根黄酮类化合物对大豆(毛尖茶叶)脂氧合酶活性抑制:IC 50=12.53(9.17)mg/mL;BHA:IC 50=1.89(1.98)mg/mL;BHT:IC 50=1.77(1.76)mg/mL,虎杖根黄酮类化合物对大豆脂氧合酶和毛尖茶叶中的脂氧合酶活性都有一定的抑制作用。

宝肝丹胶囊的薄层色谱鉴别

宝肝丹胶囊的薄层色谱定性鉴别。分别介绍了用薄层色谱法鉴别胶囊中主要成分人参和虎杖的方法。

松茸及多种植物提取物的美白功效研究

目的评价松茸、桑白皮、虎杖及葛根提取物对酪氨酸酶活性及黑色素合成的抑制作用,为美白类产品的开发提供试验依据。方法测定不同浓度松茸、桑白皮、虎杖及葛根提取物对酪氨酸酶活性,B16细胞增殖的影响及对B16细胞内黑色素含量及酪氨酸酶活性的抑制作用。以阳性药光甘草定作为对照。采用SigmaStat软件进行统计学处理。结果在B16细胞模型中,松茸提取物抑制活性优于桑白皮、虎杖和葛根提取物(P<0.05),高浓度(25 mg/L)松茸提取物对黑色素合成及酪氨酸酶活性的抑制率分别为(46.70±7.79)%和(65.73±0.58)%,与光甘草定的作用效果相当[抑制率分别是(30.48±3.05)%和(73.53±0.80)%]。结论高浓度松茸提取物对酪氨酸酶活性及黑色素合成的抑制作用与光甘草定相当,其作为天然来源的皮肤美白剂具有一定的开发潜力。

RP-HPLC同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇含量。方法:采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相甲醇-1.0%磷酸水溶液(50∶50),流速0.8 mL.min-1,检测波长319 nm,柱温为30℃。结果:虎杖苷和白藜芦醇的进样量分别在0.716～7.160μg(r=0.999 6)和0.740～7.400μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为99.7%,98.5%。结论:本方法快速简便,重复性好,专属性强,可作为虎杖根的质量控制方法。

虎杖的化学成分及药理作用研究进展

对近10年来中外期刊有关虎杖Polygonum cuspidatum的研究成果进行了检索,对从虎杖中分离并鉴定的化学成分及药理活性研究进展进行总结。虎杖中主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类、香豆素类以及一些脂肪酸类化合物,具有多种药理作用,包括抗炎、抗病毒、抗菌、调血脂、抗血栓、改变血流变、扩张血管、保护心肌、抗氧化、抗肿瘤,改善阿尔茨海默病及预防艾滋病等。多年来对虎杖的研究成果证明了其应用前景和开发价值,为更好地利用该资源提供依据。