虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.

超声波法虎杖中总黄酮提取工艺研究

目的确定超声波辅助方法提取虎杖中总黄酮的最佳工艺。方法采用正交实验优化影响虎杖中总黄酮类成分提取的4种主要因素:提取剂(CH3CH2OH)浓度、提取温度、超声时间以及料液比;并以芦丁为标准样品,利用紫外可见分光光度法测定虎杖中总黄酮的吸光度值,为确定最佳提取条件提供参考。结果通过正交实验得到从虎杖中提取总黄酮的最佳工艺为:乙醇浓度为75%,超声温度为50℃,超声时间为35min,料液比1∶40,其提取率可以达到7.68%。结论通过该实验确立了虎杖中总黄酮提取的最优工艺,提取效果良好、操作简便易行,节能环保。

反相高效液相色谱法测定中药材虎杖中白藜芦醇含量

提出了反相高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇含量的方法。以ODS-C18色谱柱(200mm×4.6mm,5μm)为分离柱,以乙醇-水(2+3)溶液作流动相淋洗,在紫外光检测波长304nm处进行测定。白藜芦醇的质量浓度在0.05～0.40mg.L-1范围内与峰面积呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为10μg.L-1。方法用于中药材虎杖中白藜芦醇含量的测定,标准加入平均回收率为98.5%,测定值的相对标准偏差(n=5)为2.6%。

酶联半仿生法提取虎杖中白藜芦醇工艺研究

目的:优选虎杖中白藜芦醇的酶联半仿生法提取工艺.方法:以白藜芦醇提取率为指标,在单因素试验基础上,根据星点试验设计原理,选取加酶量、酶解时间、酶解温度3个因素进行试验,利用响应面法优选提取工艺.结果:优选的提取工艺为加酶量1.7 mg·g^(-1),酶解温度55℃,酶解时间107 min.在此工艺条件下白藜芦醇提取率达5.91%,与预测值5.94%较为接近.结论:采用响应面法优选的提取工艺合理可行,具有良好的预测性.

药用植物虎杖内生放线菌的分离及抑菌活性的研究

采用平板涂布法从药用植物虎杖(Polygonurn cuspidatum)中分离出内生放线菌41株,以大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella typhl)、白色念珠菌(Monilia albican)为靶标菌,采用滤纸片扩散法研究了虎杖内生放线菌发酵液的抑菌活性。结果显示,共有13株内生放线菌对5种靶标菌表现了不同程度的抑菌活性,占分离总数的31.7%。有5株内生放线菌表现出较明显的抑菌活性,特别是PEA004和PEA013菌株对枯草芽孢杆菌的抑菌圈分别达17 mm,15 mm,并且对其它几种靶标菌也表现出不同程度的抑菌活性。

虎杖叶浸提物对亚硝酸盐清除和亚硝胺生成阻断的最佳浸提工艺

目的:研究虎杖叶浸提物清除亚硝酸钠及阻断亚硝胺生成的最佳浸提条件,为虎杖叶开发为防癌保健茶提供理论依据。方法:在模拟人体胃液(pH为3.0,温度为37℃)条件下,采用盐酸萘乙二胺和α-奈胺法,探究虎杖叶浸提液对亚硝酸盐的清除及亚硝胺合成阻断的能力。结果:虎杖叶在100℃、浸泡15 min、料液比1∶50条件下的浸提液对亚硝酸钠的清除效果最好,最大清除率可达86.12%。虎杖叶在100℃、浸泡5 min、料液比1∶50条件下的浸提液对亚硝胺合成阻断最好,最大阻断率可达90.02%。结论:虎杖叶浸提物具有较强清除亚硝酸盐及阻断亚硝胺合成的能力且受浸提工艺的影响。

虎杖不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用与酶动力学研究

目的:研究虎杖不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用与酶动力学。方法:质量浓度分别为200、100、50μg/ml的虎杖总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物与120μl黄嘌呤氧化酶(0.02 U/ml)作用于240μl黄嘌呤溶液(300μmol/L),采用高效液相色谱(HPLC)法测定黄嘌呤氧化酶-黄嘌呤反应体系尿酸生成量,计算抑制率。以40、20、10、5μg/ml虎杖乙酸乙酯提取物与100、80、60、40μg/ml虎杖正丁醇提取物作用于240μl黄嘌呤溶液,采用HPLC法测定尿酸生成量。酶动力学研究采用双倒数作图法确定有效溶剂提取物的抑制类型,采用二次作图法求药物对游离酶的抑制常数(K)i、药物对酶底物络合物的抑制常数(Kis)。结果:质量浓度为200、100、50μg/ml时,虎杖乙酸乙酯、正丁醇提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制率均大于50%;虎杖乙酸乙酯提取物的Ki和Kis分别为14.46、61.82μg/ml,虎杖正丁醇提取物的Ki和Kis分别为82.97、148.93μg/ml。结论:虎杖乙酸乙酯、正丁醇提取物对黄嘌呤氧化酶具有抑制作用,二者均为混合型抑制,对游离酶的抑制作用均强于对酶-底物复合物的抑制作用。该结论为虎杖治疗痛风的新药开发和抑制黄嘌呤氧化酶作用有效成分研究提供了依据。

虎杖中白藜芦醇提取纯化工艺研究

目的:研究虎杖中白藜芦醇的最佳提取纯化工艺。方法:采用碱提酸沉法,以CaO与原料的比例、料液比、酸的种类、浸提时间为考察因素,以白藜芦醇的含量和收率的加权平均值为综合评分指标进行正交试验。结果:最佳提取纯化工艺为CaO与原料的比例9:100,料液比1:8,酸为盐酸,浸提时间45 min。结论:所选工艺节约能源、操作简单,适合工业化生产。