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定性PCR方法检测转基因玉米MON810转化事件的研究 被引量:5
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作者 易小平 贺萍萍 +5 位作者 夏启玉 肖苏生 谢翔 杨小亮 李美英 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第12期2384-2390,共7页
转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在... 转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在建立MON810品系玉米的转化事件特异性定性PCR检测方法。根据MON810的插入序列信息,在3′端的侧翼序列处设计定性PCR检测的引物,检测MON810在其他几种常见转基因作物混合样品的特异性。结果表明,该方法具有很好的特异性。同时检测该引物系统的扩增灵敏度,结果表明,检测引物的灵敏度可达0.1%。建立的MON810特异定性PCR检测方法经全国7家实验室的验证,进一步证实该方法能够特异地检测出样品中的MON810转化事件,检测方法的灵敏度可达0.1%,且检测结果具有良好的可重复性和可重现性。MON810转化事件定性PCR检测方法的建立可满足于抗虫转基因玉米MON810及其衍生品种生物安全管理的需要。 展开更多
关键词 转基因玉米MON810 定性pcr 灵敏度 特异性
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应用复合PCR检测水稻种子的转基因成分 被引量:10
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作者 李伟丰 杨朗 黄鹂 《种子》 CSCD 北大核心 2007年第1期32-35,共4页
根据转基因水稻中常用的花椰菜花叶病毒(CaMV)35 S启动子、胭脂碱合成酶(NoS)终止子、β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)、潮霉素磷酸转移酶基因(Hpt)、新霉素磷酸转移酶基因(NptII)和B t毒蛋白基因(B t Cry 1 Ab)的序列,设计合成6对不同的引物... 根据转基因水稻中常用的花椰菜花叶病毒(CaMV)35 S启动子、胭脂碱合成酶(NoS)终止子、β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)、潮霉素磷酸转移酶基因(Hpt)、新霉素磷酸转移酶基因(NptII)和B t毒蛋白基因(B t Cry 1 Ab)的序列,设计合成6对不同的引物,用简单PCR方法检测了水稻种子中的转基因成分,同时建立应用一次PCR反应同时扩增检测两种或多种外源基因的复合PCR方法。通过对水稻样品进行PCR扩增,分析、比较复合PCR的检测结果与简单PCR的扩增结果,发现两者结果完全一致。表明复合PCR方法不但可以提高检测效率、降低检测成本,还可以有效防止假阳性,是一种值得推广的方法。 展开更多
关键词 转基因水稻 基因 复合pcr
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PCR直接测序法在脓肿分枝杆菌鉴定中的应用 被引量:2
3
作者 孙王伟 周燕菊 +2 位作者 谢怡萍 沙霞 王建军 《海南医学》 CAS 2014年第22期3342-3345,共4页
目的探讨聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)与DNA测序技术鉴定脓肿分枝杆菌的效果。方法利用细菌16S r RNA基因通用引物PCR扩增疑似分枝杆菌的16S r RNA基因的DNA片段并进行DNA测序分析。DNA测序获得序列经生物信息学比对... 目的探讨聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)与DNA测序技术鉴定脓肿分枝杆菌的效果。方法利用细菌16S r RNA基因通用引物PCR扩增疑似分枝杆菌的16S r RNA基因的DNA片段并进行DNA测序分析。DNA测序获得序列经生物信息学比对分析获得相关分枝杆菌的信息;针对相关分枝杆菌分别设计非同源区域特异性引物对1 500 bp的克隆DNA片段扩增验证。结果细菌16S r RNA基因通用引物扩增获得约1 500 bp的DNA片段,但DNA测序仅获得其中部分DNA序列约296 bp;部分DNA序列经生物信息学比对分析后获得四种同源性高达98%的分枝杆菌信息,并且四种分枝杆菌的特异性引物对1 500 bp的克隆产物进行扩增后仅在脓肿分枝杆菌中获得特异性PCR产物。结论疑似结核患者体内的抗酸染色阳性菌为非结核分枝杆菌中的脓肿结核分枝杆菌,并且PCR直接测序法可快速鉴定细菌的种属。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 DNA测序 16S rrNA 生物信息学 脓肿分枝杆菌
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两对引物PCR扩增黑斑蛙Sox基因
4
作者 陈艳秋 杜祥英 +3 位作者 相学军 张磊 张新蕊 朱必才 《徐州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第3期61-64,共4页
以人的SRY基因的HMG-box保守区设计的两对引物,对黑斑蛙Sox基因的扩增.结果如下:1)雌雄黑斑蛙均扩增出一条带,大小约为220 bp,说明Sox基因的长度在黑斑蛙雌雄个体间无性别差异;2)两对引物的扩增结果相同,表明Sox基因有高度保守性.
关键词 黑斑蛙 SOX基因 聚合酶链式反应(pcr)
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非同位素的PCR-RNA转录本分子杂交法检测急淋微小残留病
5
作者 肖燕 费洪宝 +2 位作者 梁欣荃 刘树茂 杨爱德 《同济医科大学学报》 CSCD 1998年第6期467-469,480,共4页
以T细胞抗原受体γ链重排基因(TCRγ)为标志,运用分别与V区和J区片段的保守序列一致,并带有T_7RNA聚合酶启动子序列的引物,将急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊期的骨髓标本进行PCR(聚合酶链反应).并将其产物转录成为RNA,以该RNA为探针... 以T细胞抗原受体γ链重排基因(TCRγ)为标志,运用分别与V区和J区片段的保守序列一致,并带有T_7RNA聚合酶启动子序列的引物,将急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊期的骨髓标本进行PCR(聚合酶链反应).并将其产物转录成为RNA,以该RNA为探针,与ALL缓解期骨髓标本DNA的PCR产物所转录的 RNA杂交,杂交体用RNA酶消化,消化产物行聚丙烯酰酰凝胶电泳(PAGE),尔后硝酸银染色观察检测结果。实验表明:该方法特异性强.灵敏度可达10^(-5)水平.具有快速、经济、没有同位素污染的优点,便于临床运用。 展开更多
关键词 白血病 微小残留病 ALL 聚合酶链反应 rNA杂交
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荧光定量PCR法对糖尿病大鼠肾脏BAX基因表达的检测
6
作者 罗镧 施辉 印其友 《交通医学》 2006年第6期650-652,共3页
目的:对单肾切除糖尿病大鼠肾脏中BAX基因mRNA的拷贝数进行精确定量,以探讨糖尿病肾病的发病机制。方法:以SYBRGreenI作为定量检测中荧光染料,采用实时荧光定量PCR法,对单肾切除糖尿病模型组和单肾切除对照组大鼠肾脏中BAX基因的转录水... 目的:对单肾切除糖尿病大鼠肾脏中BAX基因mRNA的拷贝数进行精确定量,以探讨糖尿病肾病的发病机制。方法:以SYBRGreenI作为定量检测中荧光染料,采用实时荧光定量PCR法,对单肾切除糖尿病模型组和单肾切除对照组大鼠肾脏中BAX基因的转录水平进行检测。结果:糖尿病模型组中BAX转录拷贝数明显高于对照组。结论:糖尿病大鼠肾脏中存在BAX基因的转录异常,细胞凋亡亢进可能参与糖尿病肾病的发生发展。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链反应 糖尿病肾病 BAX基因
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羔羊肝脏IGF-I和IGF-I R基因表达的发育性变化研究 被引量:12
7
作者 刘国庆 黄治国 +3 位作者 刘振山 王新华 刘守仁 杨利国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2577-2581,共5页
目的通过对羔羊IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因表达的发育性变化的研究,为羔羊生长发育规律提供理论依据。方法选择2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只(共54只,120日龄只有新疆细毛羊),测体重后屠宰,采取肝脏,用荧光实时定量... 目的通过对羔羊IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因表达的发育性变化的研究,为羔羊生长发育规律提供理论依据。方法选择2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只(共54只,120日龄只有新疆细毛羊),测体重后屠宰,采取肝脏,用荧光实时定量PCR法,以GAPDH基因为内标,检测IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR基因的发育性变化,并进行品种之间比较。结果(1)肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量都呈先升后降的趋势,其中雄性哈萨克羊肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量从2日龄到60日龄持续上升,60日龄后开始下降,90日龄的表达量显著低于前三个时期(P<0.05);雄性新疆细毛羊肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量从2日龄到90日龄持续上升,90日龄后开始下降,120日龄的表达量显著低于60日龄(P<0.05)。雄性哈萨克羊肝脏IGF-Ⅰ基因的表达量在2日龄时与新疆细毛羊差异不显著(P>0.05),在30~60日龄期间都显著高于新疆细毛羊(P<0.05),在90日龄时极显著高于新疆细毛羊(P<0.01);(2)肝脏IGF-ⅠR基因的表达量都呈现持续下降的趋势,其中哈萨克羊肝脏IGF-ⅠR基因在2日龄的表达量最高,然后就持续下降,2日龄时的表达量与其他各时期差异显著(P<0.05);新疆细毛羊肝脏IGF-ⅠR基因在2日龄的表达量最高,然后就持续下降,2日龄时的表达量与其他各时期差异显著(P<0.05)。哈萨克羊肝脏IGF-ⅠR基因的表达量在2和90日龄时都极显著低于新疆细毛羊(P<0.01)。结论羔羊肝脏组织中IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR的基因表达量有特定的发育模式,IGF-ⅠR的基因表达水平的变化不依赖IGF-Ⅰ的基因表达水平。 展开更多
关键词 羔羊 肝脏 IGF—I IGF—Ir 荧光实时定量pcr
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蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体基因表达的影响 被引量:8
8
作者 周成江 和彦苓 +2 位作者 周立社 张智燕 吴刚 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期186-189,共4页
目的观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响。方法制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物。体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药... 目的观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响。方法制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物。体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药童格勒格-1提取物对大鼠肝细胞体外毒性的量效关系,确定合适的用药浓度。将大鼠肝细胞分为5组,一组为对照组,其余四组为给药组。将四种粗提物以一定的给药浓度与正常大鼠肝细胞培养24 h后,用RT-PCR法测定大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA表达水平。结果蒙药童格勒格-1提取物中正丁醇和乙酸乙酯提取物作用后的大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体mRNA相对含量高于对照组,具有显著性差异(P<0.01)。乙醇和石油醚提取物与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论蒙药童格勒格-1正丁醇和乙酸乙酯提取物能明显增强大鼠正常肝细胞低密度脂蛋白受体基因表达,从而加快血中低密度脂蛋白的清除,起到调控血脂水平的作用。 展开更多
关键词 蒙药童格勒格-1(TGLG-1) 低密度脂蛋白受体(LDL-r) rT-pcr 基因表达
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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异野毒株与JXA1-R疫苗毒株快速鉴别方法的建立 被引量:5
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作者 何玲 裴仉福 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第1期198-201,共4页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异野毒JXA1的基因变异序列和疫苗株JXA1-R的基因遗传标志设计合成了2对特异性引物,结合快速RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立了JXA1变异野毒与... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异野毒JXA1的基因变异序列和疫苗株JXA1-R的基因遗传标志设计合成了2对特异性引物,结合快速RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立了JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒的快速鉴别体系,其目的片段大小分别为4002、90 bp,该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒的PCR检测结果均为阴性;对JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒RNA的最低检测量分别为103、104拷贝/μL。该方法敏感、特异,适用于临床样品的检测。 展开更多
关键词 PrrSV变异株 JXA1-r rT-pcr
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评价血清miR-335在肝细胞肝癌诊断中的作用 被引量:2
10
作者 张玉 邵建国 +2 位作者 陈琳 卞兆连 管海涛 《南通大学学报(医学版)》 2016年第3期174-178,共5页
目的:探讨血清mi R-335作为一种新的生物标志物在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的作用。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测50例HCC患者以及40例健康... 目的:探讨血清mi R-335作为一种新的生物标志物在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的作用。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测50例HCC患者以及40例健康人群血清mi R-335的表达量。统计学分析mi R-335作为一种新的HCC生物标志物的价值。进一步分析患者血清mi R-335的表达水平与临床病理参数之间的相关性。结果:HCC患者血清中mi R-335相对表达量明显低于健康对照组(P<0.05)。HCC患者血清中mi R-335相对表达量与性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移以及甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)无相关性(P>0.05),而与有无癌栓相关(P<0.05)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析确定了最佳的mi R-335相对表达量的临界值为1.28,灵敏度为78%,特异性为70%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.75。AFP诊断HCC的灵敏度为76%,特异性为97%,AUC为0.83;血清中mi R-335与AFP联合检测,灵敏度为84%,特异性为97%,AUC为0.93。结论 :HCC患者血清中mi R-335的表达降低,有望成为一种新的生物标志物用于HCC的诊断,且与AFP联合检测可提高HCC的诊断效率。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 血清 MI r-335 实时定量聚合酶链式反应
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LDL-R基因多态性与丙型肝炎易感性的相关性分析
11
作者 张青杨 金丹宁 +2 位作者 金国江 康辉 尚红 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1109-1113,共5页
目的探讨低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因rs688 C/T、rs5925 C/T单核苷酸多态性(SNP)与丙型肝炎易感性之间的相关性。方法采用聚合酶链式反应(PCR)结合高分辨率熔解曲线(HRM-PCR)的方法,对179例丙型肝炎病毒(HCV)感染者和178名体检健康者... 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因rs688 C/T、rs5925 C/T单核苷酸多态性(SNP)与丙型肝炎易感性之间的相关性。方法采用聚合酶链式反应(PCR)结合高分辨率熔解曲线(HRM-PCR)的方法,对179例丙型肝炎病毒(HCV)感染者和178名体检健康者或无病毒性肝炎史的其他疾病患者基因rs688和rs5929两个位点的单核苷酸多态性进行检测。结果在HCV感染组和未感染HCV对照组之间,LDL-R SNP中rs688和rs5925分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rs688和rs5925这两个多态性位点可能与丙型肝炎感染无相关性。 展开更多
关键词 低密度脂蛋白受体 基因多态性 高分辨率熔解曲线 聚合酶链式反应 丙型肝炎
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应用聚合酶链式反应快速特异鉴定假单胞菌和伯克霍尔德氏菌(R)-3-羟基酯酰载酯蛋白-辅酶A转酰基酶基因(英文) 被引量:2
12
作者 郑重 陈金春 +2 位作者 田鸿磊 贝锋锋 陈国强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期19-24,共6页
聚羟基脂肪酸酯 (PHA)是一类具有广泛应用前景的可降解生物塑料。因其可以以葡萄糖等廉价底物直接发酵生产PHA而日益受到重视。目前的研究表明在积累中长链PHA的假单胞菌中 ,由phaG基因编码的 (R) 3 羟基酯酰载酯蛋白 辅酶A转酰基酶 (P... 聚羟基脂肪酸酯 (PHA)是一类具有广泛应用前景的可降解生物塑料。因其可以以葡萄糖等廉价底物直接发酵生产PHA而日益受到重视。目前的研究表明在积累中长链PHA的假单胞菌中 ,由phaG基因编码的 (R) 3 羟基酯酰载酯蛋白 辅酶A转酰基酶 (PhaG)起关键作用 ,但目前为止对该蛋白还知之甚少。通过聚合酶链式反应 (PCR)建立了一种快速、特异鉴定phaG基因的方法 ,应用该方法成功地从两株积累不同PHA的假单胞菌Pseudomonasstutzeri 1317和Pseudomonasnitroreducens0 80 2中分别克隆得到phaG基因 ,并在phaG基因突变株PseudomonasputidaPHAGN 2 1中表达成功。同时 ,还首次报道了从非假单胞菌菌株BurkholderiacaryophylliAS 1 2 74 1中鉴定得到phaG基因 ,提示PhaG介导的中长链PHA合成途径作为一种通用的代谢模式在细菌中广泛存在 ,为进一步实现从廉价的非相关底物合成中长链PHA提供了必要的分子生物学基础。 展开更多
关键词 聚羟基脂肪酸酯 (r)-3-羟基酯酰载酯蛋白-辅酶A转酰基酶 聚合酶链式反应 Pseudomonas stutzeri(施氏假单胞菌) PSEUDOMONAS nitroreducens(硝基还原假单胞菌) Burkhohteria cadophylli(麝香石竹伯克霍尔德氏菌)
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纯合子NEO^r转基因小鼠品系的建立及鉴定 被引量:3
13
作者 曲玉秀 汤家铭 +2 位作者 连安 刘铁铮 成国祥 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第2期76-80,共5页
目的 建立清洁级Neor 转基因小鼠纯合子品系。方法 通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级NeorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCR、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果 选育出 4只纯合子 ,并建系... 目的 建立清洁级Neor 转基因小鼠纯合子品系。方法 通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级NeorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCR、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果 选育出 4只纯合子 ,并建系。该纯合转基因小鼠与野生型小鼠交配制备的胎儿成纤维细胞具有G4 1 8抗性 ,可作为ES细胞基因打靶培养中的饲养层细胞。结论 通过微生物学和遗传学上对Neor 转基因小鼠进行质量控制 ,使Neor 转基因小鼠达到了清洁级 ,并建立纯合子品系。 展开更多
关键词 纯合子 Neo^r 转基因 小鼠 品系 生物净化 聚合酶链反应
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Expressions of ICAM-1 and its mRNA in sera and tissues of patients with hepatocellular carcinoma 被引量:14
14
作者 Jing Xu1 Ming Hui Mei1 +3 位作者 Si En Zeng2 Qing Fen Shi3 Yong Ming Liu4 Li Ling Qin3 1Department of Hepatobiliary Surgery2Department of Pathology3Institute of Hepatobiliary Surgery4Department of Biochemistry, Guilin 541001, Guangxi Province, China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第1期120-125,共6页
INTRODUCTIONThe increased expression of ICAM-1 on a widerange of cells and in the sera of patients withmalignancies, chronic liver diseases andinflammation diseases has been described since thelate 1980s[1-22]. Recent... INTRODUCTIONThe increased expression of ICAM-1 on a widerange of cells and in the sera of patients withmalignancies, chronic liver diseases andinflammation diseases has been described since thelate 1980s[1-22]. Recently rapid progress in studieson expression of ICAM-1 in patients withhepatocellular carcinoma ( HCC ) have beenachieved, including clinical and experimentalresearches[23-31]. 展开更多
关键词 LIVEr neoplasms/diagnosis intercellular adhesion molecule-1 rNA messenger alpha-fetoprotein immunohistochemistry polymerase chain reaction radioimmunoassay CLC Number:r57 Document ID:A INTrODUCTIONThe increased EXPrESSION of ICAM-1 on a widerange of cells and in the SErA of PATIENTS withmalignancies chronic LIVEr DISEASES andinflammation DISEASES has been described since thelate 1980s[1-22]. recently rapid progress in studieson EXPrESSION of ICAM-1 in PATIENTS withhepatocellular carcinoma ( HCC ) have beenachieved including clinical and experimentalresearches[23-31].……
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Exosomal mi R-182 regulates the effect of RECK on gallbladder cancer 被引量:3
15
作者 Hong Zheng Jin-Jing Wang +2 位作者 Li-Jin Zhao Xiao-Rong Yang Yong-Lin Yu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2020年第9期933-946,共14页
BACKGROUND As the most common biliary malignancy,gallbladder cancer(GC)is an elderlybiased disease.Although extensive studies have elucidated the molecular mechanism of microRNA 182(miR-182)and reversion-inducing-cyst... BACKGROUND As the most common biliary malignancy,gallbladder cancer(GC)is an elderlybiased disease.Although extensive studies have elucidated the molecular mechanism of microRNA 182(miR-182)and reversion-inducing-cysteine-rich protein with kazal motifs(RECK)in various cancers,the specific role of exosomal miR-182 and RECK in GC remains poorly understood.AIM To explore the relationship between exosomal miR-182/RECK and metastasis of GC.METHODS Paired GC and adjacent normal tissues were collected from 78 patients.Quantitative polymerase chain reaction was employed to detect miR-182 and exosomal miR-182 expression,and Western blotting was conducted to determine RECK expression.In addition,the effects of exosomal miR-182/RECK on the biological function of human GC cells were observed.Moreover,the double luciferase reporter gene assay was applied to validate the targeting relationship between miR-182 and RECK.RESULTS Compared with normal gallbladder epithelial cells,miR-182 was highly expressed in GC cells,while RECK had low expression.Exosomal miR-182 could be absorbed and transferred by cells.Exosomal miR-182 inhibited RECK expression and promoted the migration and invasion of GC cells.CONCLUSION Exosomal miR-182 can significantly promote the migration and invasion of GC cells by inhibiting RECK;thus miR-182 can be used as a therapeutic target for GC. 展开更多
关键词 EXOSOME mir-182 rECK Gallbladder cancer Quantitative polymerase chain reaction Therapeutic target
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小鼠肾脏缺血-再灌注损伤miRNAs差异表达谱研究
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作者 吴奥 王水良 +1 位作者 祝玲 杨顺良 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期138-143,共6页
目的筛选小鼠肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)差异性表达的微小核糖核酸(miRNAs),为进一步深入阐明肾脏IRI发生、发展的分子机制奠定基础。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性肾缺血损伤模型,将15只小鼠分为IRI组和假手术组(E组),... 目的筛选小鼠肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)差异性表达的微小核糖核酸(miRNAs),为进一步深入阐明肾脏IRI发生、发展的分子机制奠定基础。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性肾缺血损伤模型,将15只小鼠分为IRI组和假手术组(E组),IRI组再分为A组(缺血时间45 min,再灌注时间24 h)、B组(缺血时间25 min,再灌注时间24 h)、C组(缺血时间45 min,再灌注时间4 h)、D组(缺血时间25 min,再灌注时间4 h),每组3只。采用肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果来鉴定各组小鼠的IRI程度;采用miRNAs芯片聚类分析对小鼠IRI特定缺血时间(25、45 min)和再灌注时间(4、24 h)下肾脏差异性表达差异表达的miRNAs进行筛选鉴定;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)对小鼠IRI后差异表达miRNAs芯片miR-695与miR-145进行验证。结果肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果显示成功建立IRI模型。与假手术组相比,肾脏IRI组共检出71种差异性表达显著的miRNAs,其中30种下调表达,41种上调表达。q RT-PCR法检测结果表明,以E组特定miRNAs的表达量标准化为1,miR-695及miR-145在肾脏IRI组的相对表达量分别为11.82和0.31(均为P<0.05),与芯片结果基本一致。结论肾脏IRI后,miRNAs表达谱发生差异性改变,这些差异性表达的miRNAs将可作为肾脏IRI的分子标志物而具有潜在的临床及科研应用价值。 展开更多
关键词 肾组织 肾动脉夹闭 缺血-再灌注损伤 微小核糖核酸(mirNAs) 芯片 mir-695 MIr-145 基因差异表达谱 实时定量逆转录-聚合酶链反应
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羊羔美酒大曲中乳酸菌多样性及分子鉴定 被引量:6
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作者 李艳 董振玲 +1 位作者 李佳 牟德华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第13期167-171,共5页
目的:分离和鉴定羊羔美酒大曲中的乳酸菌,探寻其菌群多样性,为酿酒工艺条件改进提供参考。方法:将酒曲进行梯度稀释、富集培养、平板画线等分离纯化,获取乳酸菌单菌落。采用菌落特征和个体形态特征结合的方法进行乳酸菌形态鉴定。乳酸... 目的:分离和鉴定羊羔美酒大曲中的乳酸菌,探寻其菌群多样性,为酿酒工艺条件改进提供参考。方法:将酒曲进行梯度稀释、富集培养、平板画线等分离纯化,获取乳酸菌单菌落。采用菌落特征和个体形态特征结合的方法进行乳酸菌形态鉴定。乳酸菌的分子鉴定采用重复序列聚合酶链式反应(repetitive sequence-based polymerase chain reaction,Rep-PCR)技术和16S r DNA序列分析法。结果:从羊羔美酒大曲中共得到65株乳酸菌,形态学分为9类。用Rep-PCR技术在75%的相似性上将其区分为5类,经基因序列分析,鉴定为分属于4个属的乳酸菌,分别为:片球菌属(Pediococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肠球菌属(Enterococcus)。结论:传统微生物分离技术与现代分子鉴定技术相结合,可快速准确鉴定出羊羔美酒大曲中乳酸菌的菌群组成和多样性。 展开更多
关键词 羊羔美酒大曲 乳酸菌 分子鉴定 重复序列聚合酶链式反应 16S rDNA序列分析
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人乳头瘤病毒感染与P53及肺耐药蛋白表达在非小细胞肺癌中的关系及其临床意义 被引量:1
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作者 郑少江 吴人亮 +2 位作者 郭峻莉 焦嫦亮 罗志飞 《海南医学院学报》 CAS 2005年第6期494-497,共4页
目的:探讨人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染在非小细胞肺癌(non-small-celllungcancer,NSCLC)发生中的病因学意义及其与P53蛋白和肺耐药蛋白(lungresistanceprotein,LRP)表达之间的相关性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)、免疫... 目的:探讨人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染在非小细胞肺癌(non-small-celllungcancer,NSCLC)发生中的病因学意义及其与P53蛋白和肺耐药蛋白(lungresistanceprotein,LRP)表达之间的相关性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)、免疫组化方法(IHC)分别检测76例NSCLC组织中HPVDNA及其E6、E7原癌蛋白,P53和LRP蛋白的表达情况。结果:NSCLC中HPVDNA及其E6、E7原癌蛋白的检出率分别为40.8%、43.4%,2种方法检测的符合率为78.9%;P53和LRP的阳性率分别为63.2%、59.2%,且HPV感染阳性组中P53蛋白阳性表达率(75.8%)显著高于阴性组(46.5%)(P<0.05);P53蛋白表达阳性组中LRP阳性表达率(68.8%)显著高于阴性组(42.9%)(P<0.05);而HPV感染阳性组与阴性组间LRP的表达无显著性差异(P>0.05)。HPV感染与高、中分化程度的NSCLC及吸烟有关;结论:HPV感染可能是NSCLC发生的另一重要病因学因素,且HPV感染可能导致P53基因突变,同时基因突变的P53可能促进肺癌耐药性的增加。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 非小细胞肺 基因 P53 蛋白质P53 聚合酶链反应 免疫组织化学
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大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素及其受体cDNA的克隆和序列测定 被引量:2
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作者 李臻 刘新平 张远强 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期186-190,共5页
目的 研究促甲状腺激素释放激素 (thyrotrophin- releasing hormone,TRH)及其受体 (TRH recep-tor,TRH- R)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用。 方法 以大鼠睾丸组织总 RNA为模板 ,依据大鼠下丘脑中的前 TRH和垂... 目的 研究促甲状腺激素释放激素 (thyrotrophin- releasing hormone,TRH)及其受体 (TRH recep-tor,TRH- R)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用。 方法 以大鼠睾丸组织总 RNA为模板 ,依据大鼠下丘脑中的前 TRH和垂体中的 TRH- R c DNA设计引物 ,进行反转录聚合酶链式反应 (reverse tran-scription- polymerase chain reaction,RT- PCR) ,对特异性片段进行序列测定。 结果 从大鼠睾丸组织中获得了前 TRH和 TRH- R的 c DNA片段 ,其核苷酸序列与大鼠下丘脑中的前 TRH和垂体中的 TRH- R c DNA序列完全一致。 结论 首次用 RT- PCR的方法从大鼠睾丸组织中获得了前 TRH和 TRH- R的 c DNA克隆。 展开更多
关键词 睾丸 大鼠 ppTrH CDNA TrH-r 序列分析
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TNF基因转导肿瘤浸润淋巴细胞的方法学研究
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作者 李彪如 徐铿 +3 位作者 钱关祥 张希衡 童善庆 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1995年第3期185-189,共5页
在总结Rosenberg建立的TNF-NeoR缺陷型逆转录病毒转染肿瘤浸润细胞(TIL)的基础上,选用美国国家卫生院重组DNA咨询委员会(RAC)批准的逆转录病毒(Mo-MuLV)的衍生物作载体,对肿瘤坏死因子转导T... 在总结Rosenberg建立的TNF-NeoR缺陷型逆转录病毒转染肿瘤浸润细胞(TIL)的基础上,选用美国国家卫生院重组DNA咨询委员会(RAC)批准的逆转录病毒(Mo-MuLV)的衍生物作载体,对肿瘤坏死因子转导TIL进行研究。实验结果提示:TIL处于静息期与对数生长后期,当TNF-NeoR缺陷型逆转录病毒转导TIL细胞时,TIL细胞增殖受到影响;最佳转导时间为TIL分离培养后9~25d。各病毒感染复数值病毒转导对TIL增殖倍数与生存天数影响不大,但病毒感染复数值越大,转导后TIL起始呈抑制现象越大;然而G_(418)筛选后证实,病毒感染复数值越大,转导成功率越大。L_(929)细胞检测转导后TIL呈高表达,PCR检测TNF目的基因已插入宿主DNA中。 展开更多
关键词 肿瘤浸润 淋巴细胞 转导 肿瘤坏死因子 方法学
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