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Innate Cytokine Responses and Toll-Like Receptor Induced by Recombinant Porcine Rotavirus VP6 and VP7 Proteins Expressing in <i>Lactobacillus plantarum</i>NC8 Strain Colonization in Mice
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作者 Seria Masole Shonyela Wentao Yang +1 位作者 Guilian Yang Chunfeng Wang 《World Journal of Vaccines》 2020年第1期17-31,共15页
The significant function of Toll-like receptors (TLR) is the detection of microbes by host guard cells that guide to the innate immune responses and to the successive adaptive. The current study patterns of TLR2, TLR3... The significant function of Toll-like receptors (TLR) is the detection of microbes by host guard cells that guide to the innate immune responses and to the successive adaptive. The current study patterns of TLR2, TLR3 and TLR9 expressing antigen presenting cells (APCs) in blood of mice after colonization with L. plantarum NC8 strain were assessed. The power of L. plantarum on serum innate cytokine and TLR responses stimulated by recombinant NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep, NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep and NC8-pSIP409-pgsA were also assessed. We confirmed that L. plantarum NC8 stimulated powerful TLR2 expressing APC responses in blood Recombinant strain stimulated a TLR3 response in spleen, and TLR9 responses were stimulated in blood or in spleen. Recombinant NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep, NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep on TLR2 and TLR9 expressing APC responses has a preservative outcome, reliable with the DCpep adjuvant outcome. In serum the recombinant NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep, NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep has increased the IL-4 and IFN-γ responses, except that on the TLR3 and TLR9 expressing CD14 APC responses it had an oppressive consequence in spleen and the IFN-α response in serum-stimulated by PRV. Our results give details that following PRV infection after immunization with NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep, NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep, the systemic TLR2, TLR3, and TLR9 expressing cDC and macrophage/monocyte responses. 展开更多
关键词 TOLL-LIKE Receptors RECOMBINANT porcine rotavirus Lactobacillus plantaram MICE
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PEDV、PoRVA和PDCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立与初步应用 被引量:1
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作者 胡泽奇 李润成 +5 位作者 谭祖明 谢秀艳 王江平 秦乐娟 李荣 葛猛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2267-2272,共6页
旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-... 旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-VP6和PDCoV-M基因设计了引物和探针,条件优化后进行性能评估,并与商品化试剂盒检测对比。结果显示:本研究建立的三重RT-qPCR方法具有良好特异性,对PRRSV、PCV_2和PRV等阳性核酸不发生扩增;具有较高的敏感性,PEDV、PoRVA和PDCoV的最低检测限均达1 copies·μL^(-1);重复性良好,组内和组间变异系数均小于1%;样本适应性广,检测不同样本类型时,变异系数均小于1%。与商品化试剂盒对比,本研究建立的方法PEDV和PoRVA的检测符合率为92.5%和97.5%,并对PDCoV的检测范围更广,对其变异毒株仍有较好的检测效果。本研究建立的检测方法具有特异性好、敏感性高、稳定性强和样本适应性广等优势,为临床腹泻样本提供了一种好的检测方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪A群轮状病毒 猪丁型冠状病毒 三重RT-qPCR
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猪轮状病毒Rotavirus A pig/China/NMTL/2009/G9P[23]株的分离与鉴定 被引量:8
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作者 时洪艳 陈建飞 +3 位作者 王承宝 张志榜 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期681-684,共4页
A群轮状病毒(GAR)是引起人类和多种动物腹泻的主要病原体,病原的分离与鉴定是轮状病毒(RV)流行病学、病原学等研究的基础。本研究采用接种MA104细胞的方法,从内蒙古某猪场患病猪腹泻粪便中分离一株病毒,经3次蚀斑克隆纯化后,采用电镜观... A群轮状病毒(GAR)是引起人类和多种动物腹泻的主要病原体,病原的分离与鉴定是轮状病毒(RV)流行病学、病原学等研究的基础。本研究采用接种MA104细胞的方法,从内蒙古某猪场患病猪腹泻粪便中分离一株病毒,经3次蚀斑克隆纯化后,采用电镜观察、PCR鉴定和序列测定进行分析,结果表明该分离株为猪轮状病毒(PoRV)。致病性试验表明该分离株能够引起仔猪急性腹泻,RT-PCR扩增其VP4、VP6和VP7的基因节段并进行序列测定,按照A群RV的最新分类方法,确定该分离株的VP6、VP7和VP4基因型分别为I5型、G9型和P[23]型。因此,将该分离株命名为Rotavirus A pig/China/NMTL/2009/Q9P[23]。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 分离 鉴定
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食淀粉乳杆菌联合芦丁干预PoRV感染后肠道紧密连接蛋白及其相关因子变化 被引量:3
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作者 魏萍 耿天颖 +1 位作者 王琦 张萍 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期43-50,共8页
通过益生菌联合多酚共同对抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)感染,利用食淀粉乳杆菌和芦丁干预PoRV感染清洁级中国昆明鼠乳鼠,分为正常对照组(Control组)、病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌预防组(SR组)、芦丁1 mg·kg^(-1)预防组(LR... 通过益生菌联合多酚共同对抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)感染,利用食淀粉乳杆菌和芦丁干预PoRV感染清洁级中国昆明鼠乳鼠,分为正常对照组(Control组)、病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌预防组(SR组)、芦丁1 mg·kg^(-1)预防组(LR组)、芦丁20 mg·kg^(-1)预防组(HR组)、食淀粉乳杆菌联合1 mg·kg^(-1)芦丁预防组(SLR组),应用实时荧光定量PCR和免疫组化检测Occludin和Claudin-4 mRNA相对表达量及蛋白分布,ELISA定量检测RV、胰蛋白酶、PAR-2、TGF-β和MMP-9含量。结果表明,RV组病毒含量最高,RV组Occludin mRNA相对表达量显著低于其他组,Claudin-4 mRNA相对表达量显著高于其他预防组,Claudin-4蛋白在肠道组织中分布不均;其他组Claudin-4 mRNA相对表达量均降低,但蛋白分布无改变。RV组胰蛋白酶、PAR-2、TGF-β和MMP-9含量均高于其他组;SLR组TGF-β含量低于SR组,MMP-9含量低于SR组。说明食淀粉乳杆菌和芦丁通过增加Occludin蛋白表达,抑制Claudin-4蛋白过表达及异常分布,下调胰蛋白酶、PAR-2、TGF-β及MMP-9含量,改善感染PoRV后肠道内相关因子异常分泌,减弱肠道损伤。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 食淀粉乳杆菌 芦丁 紧密连接蛋白 细胞因子
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Effect of Rotavirus on Newborn Piglets
5
作者 Wang Zhenling 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2016年第6期344-345,348,共3页
[ Objectives ] To study the pathogenicity of rotavirns causing piglet diarrhea in Beijing area. [ Methods ] Six newborn piglets were randomly divided into two groups : three piglets in test group and three in control... [ Objectives ] To study the pathogenicity of rotavirns causing piglet diarrhea in Beijing area. [ Methods ] Six newborn piglets were randomly divided into two groups : three piglets in test group and three in control group. A total of 3 mL three-generation cell virus were evenly assigned to the three test piglets by both oral mode and subcutaneous injection, and the detoxification was observed. Anal swabs were collected at the 24^th, 48^th, 72^th and 96^th hours before and after the infection respectively, virus antigens were detected by RT-PCR, detoxlllcation was observed; small intestine, liver, spleen and other tissues of the 5-d-infected piglets were collected to observe the pathological changes. [ Results ] Anal swab detection showed that rotavirus could be detected in piglets at the 12^th after being in- fected, and the situation could continue to the 5^th d. Observation on tissue sections showed that piglet small intestinal epithelial cells and surrounding villi degenerated, epithelial cells became rounded, swollen; and enlarged nuclei and irregular cell margins could be observed. Degenerated cells fell off from matrix to lumen, at- rcphy villi was covered by flat epithelial cells, a small amount of cell debris could be observed in lamina propria. [ Conclusions ] The infection severity of porcine rotavirus depends on the atrophy degree and distribution of small intestinal villi. In addition, host, environment and other relevant factors also played an important role in the pathogenesis of porcine rotavirus. 展开更多
关键词 porcine rotavirus PATHOGENICITY
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猪轮状病毒病的鉴别诊断及防控措施
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作者 杨俊 谢凯 +5 位作者 江伟 杜丽飞 王慧 刘俊琦 李伟强 王红兵 《畜牧兽医杂志》 2024年第4期102-105,共4页
近期,湖南某规模化种猪场持续发生以产房仔猪腹泻为主要特征疾病,根据临床症状及经验,该场一直认为是猪流行性腹泻病毒引起,但经过对母猪产前免疫、返饲等措施进行防控,效果仍较差,为查明原因,采用RT-PCR方法对送检的20份腹泻粪便拭子... 近期,湖南某规模化种猪场持续发生以产房仔猪腹泻为主要特征疾病,根据临床症状及经验,该场一直认为是猪流行性腹泻病毒引起,但经过对母猪产前免疫、返饲等措施进行防控,效果仍较差,为查明原因,采用RT-PCR方法对送检的20份腹泻粪便拭子样品进行猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒病毒检测;结果显示,其中17份为猪轮状病毒核酸阳性,另外两种病原均为核酸阴性,提示该猪场引起仔猪腹泻的病原为猪轮状病毒,加上饲养管理方面存在的不足,导致该病在猪场的持续发生。近年来,由于猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒引起的腹泻较多,从而忽视对其他引起腹泻的病毒性疾病认识,延误了治疗,加大了损失,值得相关从业人员注意和借鉴。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 诊断 防控
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体外抗猪轮状病毒8种藏药的初步筛选
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作者 豆薇 赵龙 +8 位作者 郝峰 吕长荣 王栋 陈晨 高海慧 韩生义 顾庆云 李生庆 郭抗抗 《动物医学进展》 北大核心 2024年第5期18-24,共7页
为筛选具有抗病毒作用的藏药,对前期研究发现具有潜在抗病毒作用的诃子、甘青乌头、矮紫堇、甘青青兰、川西獐牙菜、短穗兔耳草、铁棒锤、瑞香狼毒等8种藏药的提取物进行了体外抗病毒研究。用水提法对8种藏药进行处理,通过浓缩、真空干... 为筛选具有抗病毒作用的藏药,对前期研究发现具有潜在抗病毒作用的诃子、甘青乌头、矮紫堇、甘青青兰、川西獐牙菜、短穗兔耳草、铁棒锤、瑞香狼毒等8种藏药的提取物进行了体外抗病毒研究。用水提法对8种藏药进行处理,通过浓缩、真空干燥后配制成不同浓度的水提物,以猪轮状病毒(PoRV)为受试对象,利巴韦林为对照。采用CCK-8测定药物安全浓度,用细胞病变效应(CPE)观察、实时荧光定量PCR、间接免疫荧光相结合的方法测定8种药物体外抗猪轮状病毒作用。结果表明,诃子、甘青乌头、甘青青兰、短穗兔耳草、川西獐牙菜、铁棒锤、瑞香狼毒、矮紫堇8种藏药提取物和利巴韦林药物对MA-104细胞的最大安全浓度分别为0.02、0.49、0.98、2.60、7.81、15.63、1.30、31.25、0.20 mg/mL。在药物与病毒预先作用的方式下,川西獐牙菜、瑞香狼毒、短穗兔耳草、铁棒锤、诃子5种藏药提取物和利巴韦林对猪轮状病毒的最大抑制率均超过50%,分别为87.37%、91.55%、86.19%、91.88%、63.74%、96.33%,能有效减轻病毒感染所致的细胞病变效应,其余3种藏药提取物对PoRV致细胞病变的最大抑制率均低于20%。对PoRV最大抑制率超过50%的5种藏药进一步试验发现,5种藏药提取物显著降低了病毒的复制增殖能力(P<0.001),有效减少了病毒在MA-104细胞的感染。研究结果证明5种藏药提取物对PoRV具有一定的抗病毒作用,为抗病毒藏药的筛选和机制研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 藏药 猪轮状病毒 抗病毒 体外试验
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中国不同地区猪轮状病毒的分离鉴定及分子流行病学分析 被引量:7
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作者 燕贺 孙玉洁 +5 位作者 赵文影 谢莉敏 黄柏成 田克恭 张云静 逄文强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期201-205,共5页
为鉴定国内不同地区猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRo V)并分析其分子流行病学特征,本研究将从我国不同地区收集病料中检测到的16份PRoV阳性仔猪粪便样品和小肠内容物处理后接种MA-104细胞,传代后进行荧光定量PCR (qPCR)和间接免疫荧... 为鉴定国内不同地区猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRo V)并分析其分子流行病学特征,本研究将从我国不同地区收集病料中检测到的16份PRoV阳性仔猪粪便样品和小肠内容物处理后接种MA-104细胞,传代后进行荧光定量PCR (qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,并经电镜观察。结果显示,其中7份样品F1~F3代病毒液qPCR Ct值均随着传代次数的升高而逐渐降低,IFA鉴定结果显示均能在细胞中观察到特异性荧光,电镜观察到直径约70 nm无囊膜的病毒粒子,表明本实验分离到7株PRoV。利用RT-PCR扩增7株分离株和其余9份PRoV的阳性样品的VP7基因并测序分析基因型,基于VP7基因进行同源性和遗传进化分析。结果显示,16份阳性样品包含3种G型,即G9(7/16)、G4 (6/16)和G3 (3/16),同时G9型FJ-2021分离株和G4型JS01-2021分离株与近两年流行株亲缘关系较近。统计16份样品中G型PRoV的地域分布,结果显示华东地区有G9、G4和G3型的流行,四川有G3和G9型流行,广东有G9型的流行,分别与华东地区、四川地区和广西地区报道的流行G型一致;除此之外,G9型在云南、辽宁、湖南均有流行,G4基因型在广西、广东、陕西、黑龙江、河南均有流行。本研究首次收集了来自我国12个省市的PRoV阳性临床样品并进行PRoV的分离鉴定,丰富了PRoV在国内的流行资料,对不同地区针对性的防控PRoV的感染提供了流行病学数据,同时为进一步研究不同G型PRoV的致病机制和疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 分离 鉴定
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猪轮状病毒G1P[7]株分离鉴定及多克隆抗体制备
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作者 李素芬 汤学超 +7 位作者 周金柱 王丹丹 朱雪蛟 陶然 李运川 郭容利 张雪寒 李彬 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期101-107,共7页
旨在明确猪场腹泻原因并分离猪轮状病毒(PoRV)。采集腹泻猪粪便,经RT-PCR检测为阳性的样品接种于单层细胞,通过细胞病变(CPE)和间接免疫荧光(IFA)来检测病毒增殖;RT-PCR扩增VP4和VP7基因并测序以确定G/P基因型,生物信息学软件分析VP4和... 旨在明确猪场腹泻原因并分离猪轮状病毒(PoRV)。采集腹泻猪粪便,经RT-PCR检测为阳性的样品接种于单层细胞,通过细胞病变(CPE)和间接免疫荧光(IFA)来检测病毒增殖;RT-PCR扩增VP4和VP7基因并测序以确定G/P基因型,生物信息学软件分析VP4和VP7基因的遗传进化特征;传代病毒灭活后制苗接种家兔制备多克隆抗体,测定中和抗体,并经Western blot和IFA鉴定其特异性。结果:猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、伪狂犬病毒(PRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)均为阴性,只有PoRV为阳性;过滤粪便样接种单层MA104细胞,连续传5代均可观察到以细胞圆缩、最后瓦解脱落为特征的CPE,IFA检测到PoRV的特异性荧光,表明病毒分离成功,命名为JSNJ2019;分离株连续传代,病毒滴度逐步升高,介于105~106.5 TCID50/mL;分离株JSNJ2019为G1P[7]基因型;3次免疫后家兔血清的中和抗体滴度最高可达211,Western blot出现特异性条带且IFA荧光亮而特异。本研究成功分离PoRV JSNJ2019(G1P[7])且免疫原性良好,制备的多克隆抗体特异性强,为研究PoRV致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 分离鉴定 基因型 免疫原性 多克隆抗体
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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 被引量:26
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作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期518-527,共10页
引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征... 引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(porv) 流行现状 防控措施
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猪轮状病毒重组VP6*蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
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作者 高力国 申翰钦 +3 位作者 陈诒全 陈胜 蔺文成 陈峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4021-4028,共8页
旨在建立猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)的抗体检测方法。本研究以PoRV截短的VP6*(aa149-332)蛋白作为检测抗原,建立PoRV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示:截短的重组VP6*(aa149-332)以包涵体和可溶性两种形式存在,大小为22.5 k... 旨在建立猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)的抗体检测方法。本研究以PoRV截短的VP6*(aa149-332)蛋白作为检测抗原,建立PoRV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示:截短的重组VP6*(aa149-332)以包涵体和可溶性两种形式存在,大小为22.5 ku。优化后的ELISA反应条件:VP6*(aa149-332)包被量为25 ng·孔^(-1),抗原4℃过夜包被,5%脱脂奶粉溶液37℃封闭2 h,待检血清1∶400稀释、37℃孵育30 min,酶标羊抗鼠IgG二抗1∶24000稀释、37℃孵育30 min,显色15 min。试验确定阴阳性临界值OD_(450 nm)=0.418,可检测到抗体的最大稀释度为1∶3200,批内和批间重复变异系数均小于10%,并具有较好的特异性。28份血清与Western blot结果符合率为96.42%。ELISA OD_(450 nm)值与中和抗体效价log2相关系数R^(2)=0.8785。综上所述,本研究建立的PoRV抗体间接ELISA具有较高的特异性和敏感性,可应用于PoRV的临床血清样本抗体检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 VP6*蛋白 间接ELISA 原核表达
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白藜芦醇对轮状病毒感染猪肠上皮细胞IPEC-J2的抑制效应
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作者 彭宁 梁雅旭 +2 位作者 龙菲 余东明 钟翔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4213-4225,共13页
旨在研究白藜芦醇对轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染猪肠上皮细胞的抗病毒作用。本试验以猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,先测定不同白藜芦醇浓度对IPEC-J2细胞活力的影响,再根据是否用PoRV或白藜芦醇(100μmol·L^(-1))处... 旨在研究白藜芦醇对轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染猪肠上皮细胞的抗病毒作用。本试验以猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,先测定不同白藜芦醇浓度对IPEC-J2细胞活力的影响,再根据是否用PoRV或白藜芦醇(100μmol·L^(-1))处理IPEC-J2细胞,分别设置阴性对照组、PoRV感染组和不同时间段添加白藜芦醇+PoRV感染组。通过实时荧光定量PCR技术、病毒滴度测定法和蛋白免疫印迹法检测PoRV在IPEC-J2细胞的复制与增殖情况。结果表明:1)在PoRV感染IPEC-J2的后期和全期添加白藜芦醇(100μmol·L^(-1))可显著抑制PoRV的感染和复制(P<0.05);2)与PoRV感染组相比,在PoRV感染IPEC-J2的全期添加白藜芦醇(100μmol·L^(-1))可极显著抑制IPEC-J2细胞上清液中炎症细胞因子IL-1β、IL-10、TNF-α和IFN-β的含量(P<0.01),后期添加白藜芦醇可显著抑制IL-10和IFN-β的含量(P<0.05);后期和全期添加白藜芦醇极显著抑制了IPEC-J2细胞中的免疫相关因子MDA5、RIG-I、TRIF、MAVS、LGALS9、EIF2 AK 2、IRF 9和IFI44L的mRNA相对表达量(P<0.01),极显著抑制了IPEC-J2细胞中可变剪接因子SRPK1、SRPK2、HNRNPC和HNRNPR的mRNA相对表达量(P<0.01);3)与阴性对照组相比,PoRV感染显著促进了IPEC-J2细胞中LGALS 9的5号外显子和EF2AK 2的2号外显子发生外显子跳跃,而在PoRV感染IPEC-J2的后期和全期添加白藜芦醇(100μmol·L^(-1))可显著抑制靶基因发生外显子跳跃。综上证实,本研究添加100μmol·L^(-1)白藜芦醇可抑制PoRV对IPEC-J2细胞的感染和复制,且在PoRV感染后的维持阶段发挥作用,可为预防和治疗仔猪病毒性腹泻提供新的依据和参考。 展开更多
关键词 白藜芦醇 猪轮状病毒 抗病毒 可变剪接
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2022年江苏省4种猪腹泻病毒分子流行病学调查
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作者 樊毛迪 李群 +7 位作者 侯闻闻 朱振邦 丁国伟 范娟 李智 曲向阳 陈昌海 李向东 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第8期44-58,共15页
为了解江苏省猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的遗传变异趋势,采集了2022年江苏省不同猪场的病猪腹泻病料36份,使用RT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV感染... 为了解江苏省猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的遗传变异趋势,采集了2022年江苏省不同猪场的病猪腹泻病料36份,使用RT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV感染情况,并对部分检测结果为阳性的PEDV、TGEV、PDCoV进行S基因扩增、测序和分析,对PoRV进行VP4、VP7基因扩增、测序和分析,共获得8个PESV S基因,1个TGEV S基因,1个PDCoV S基因,9个PoRV VP4及VP7基因序列。基于PEDV S基因的序列分析结果表明,2022年江苏PEDV流行毒株与我国2010年以来流行的GⅡ-b亚群变异株的序列同源性为97.0%~99.7%,属于同一亚群,而与CV777、SD-M等早期毒株亲缘关系较远;江苏PEDV流行毒株S1蛋白区域存在氨基酸的突变、插入及缺失,不同流行毒株之间存在一定的差异。基于TGEV S基因的序列分析结果表明,江苏TGEV流行毒株与中国毒株WH-1同源性最高,为99.9%;其S基因仅发生了3个氨基酸突变。基于PDCoV S基因的序列分析结果表明,江苏PDCoV流行毒株与CHN/HG/2017株的同源性最高,为98.2%,与来自中国、越南、老挝、泰国等东南亚国家的毒株亲缘关系较近,属于同一群;江苏PDCoV流行毒株的S1蛋白区域发生6个氨基酸的突变。基于PoRV VP4及VP7基因的序列分析结果表明,江苏PoRV流行毒株属于A群轮状病毒,具有G3[P13]型、G3[P23]型、G4[P13]型、G4[P23]型、G9[P13]型、G9[P23]和G11[P13]型7个不同的基因组合型。本研究结果为掌握江苏地区PEDV、TGEV、PDCoV、PoRV的流行情况、遗传进化趋势及其防控提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪δ冠状病毒 猪轮状病毒 S基因 VP4基因 VP7基因
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2021-2022年我国部分地区猪轮状病毒分子流行病学调查 被引量:1
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作者 何晓明 田小艳 +3 位作者 王东东 刘桂武 李春梅 叶敏慧 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期77-85,共9页
为了解我国部分地区猪场猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)的流行情况及分子特征,对2021-2022年我国部分省份的86个规模化猪场的6 472份腹泻样品进行检测,用RT-PCR方法调查PoRV的流行率,并对PoRV阳性样本进行VP7和VP4基因扩增、测序... 为了解我国部分地区猪场猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)的流行情况及分子特征,对2021-2022年我国部分省份的86个规模化猪场的6 472份腹泻样品进行检测,用RT-PCR方法调查PoRV的流行率,并对PoRV阳性样本进行VP7和VP4基因扩增、测序,使用MegAlign软件进行同源性分析,利用MEGA11.0构建系统进化树。结果显示,PoRV的样品阳性率为27.89%(1 805/6 472),猪场阳性率为65.12%(56/86);从98份阳性PoRV样本中扩增出76个VP7片段,G9为优势基因型(42.11%),基因型G5、G26、G3、G4、G1、G2和G11各占26.32%、9.21%、6.58%、6.58%、3.95%、2.63%和2.63%。扩增出的35个VP4基因片段,以P[13]型为主,占57.14%;其次为P[7]、P[23]、P[3]和P[6]型,分别占20%、14.29%、5.71%和2.86%。35个毒株成功鉴定出G/P基因型,G9P[13](28.57%)为优势组合基因型,其他基因型为G5P[13](11.43%)、G4P[13](8.57%)、G9P[23](8.57%)、 G26P[13](5.71%)、G1P[7](5.71%)、G26P[3](5.71%)、G5P[7](5.71%)、G3P[7](2.86%)、G11P[23](2.86%)、G5P[23](2.86%)、G11P[7](2.86%)、G3P[13](2.86%)、G5P[6](2.86%)和G4P[7](2.86%),其中G11P[7]为国内首次鉴定到的基因型。综上,目前PoRV的流行率高且基因型复杂,优势组合基因型为G9P[13]。该结果丰富了PoRV的分子流行病学资料,对我国猪PoRV感染的防控具有重要意义,也为新型疫苗研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 VP4基因 VP7基因 分子流行病学
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猪轮状病毒G9P[7]型云南株的分离鉴定及VP4和VP7基因测序分析
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作者 王修武 邓可辉 +5 位作者 马沐林 关金连 韩淑杰 郭智轩 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期1-7,共7页
为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性... 为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性样品处理后接种至MA-104细胞进行PoRV分离;对分离毒株进行间接免疫荧光、电镜观察、胶体金检测和VP4、VP6、VP7基因测序及遗传进化分析。结果显示,仔猪肠道组织样品经终浓度20μg/mL的胰酶在37℃孵育2 h,能在MA-104细胞上增殖传代,第3代出现稳定的细胞病变,盲传20代,每隔5代进行PoRV的检测;间接免疫荧光试验可见特异性荧光,胶体金和RT-PCR检测均为PoRV阳性,电镜观察可见病毒粒子直径约为65 nm,呈车轮状,符合PoRV粒子典型形态特征,将该分离株命名为PoRV YN-A株。基因同源性比较和遗传进化树分析显示,YN-A株的VP6基因序列与国内A群GD株的同源性为99.93%,VP7与中国G9型NJ2012株的同源性为99.12%,VP4与美国P[7]型OSU株的同源性为98.91%,确定该分离株为猪A群轮状病毒G9P[7]型。YN-A株VP7序列在9个氨基酸位点存在点突变,即aa9(I→V)、aa16(V/T→I)、aa44(A→V)、aa100(D/E→N)、aa212(T/A→K)、aa221(N→S)、aa225(V→A)、aa271(I→V)、aa267(D→E)。首次从云南地区的腹泻仔猪小肠组织中成功分离到1株G9P[7]型的新基因型PoRV毒株,为PoRV的致病性、分子生物学特性研究及PoRV G9优势基因型新疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 分离鉴定 G9基因型 基因测序 电镜观察
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猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
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作者 李妍花 周兵强 +11 位作者 康笃利 郝丽影 汪志艳 赵少若 黄甜 庞杏豪 刘俊阳 楚园园 张云静 高晓静 邓均华 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1223-1231,共9页
【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测... 【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(porv) 胶体金检测试纸条 快速检测
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鸟苷酸结合蛋白GBP1和GBP2抑制猪轮状病毒体外复制
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作者 陈姝宇 朱雪蛟 +5 位作者 周金柱 陶然 张雪寒 索朗斯珠 贡嘎 李彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期245-257,共13页
本研究旨在探究鸟苷酸结合蛋白1(guanylate-binding protein-1,GBP1)、鸟苷酸结合蛋白2(guanylate-binding protein-2,GBP2)的全长、片段、GTPase酶活性对猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)复制的影响。以猪肾细胞cDNA和GBP1、GBP2质... 本研究旨在探究鸟苷酸结合蛋白1(guanylate-binding protein-1,GBP1)、鸟苷酸结合蛋白2(guanylate-binding protein-2,GBP2)的全长、片段、GTPase酶活性对猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)复制的影响。以猪肾细胞cDNA和GBP1、GBP2质粒为模板,PCR扩增出GBP1、GBP 2基因的全长和截断体(G、M、E、ME区),克隆到pCDNA3.1(+)真核表达载体上。在恒河猴细胞(MA104)细胞上过表达或沉默GBP1、GBP 2基因,探究对PoRV复制的影响。设置不同的时间点,筛选GBP1、GBP2对PoRV复制产生影响作用的时间点。应用泛GTPase酶抑制剂(CID-1067700)探究GBP1、GBP2的GTPase酶活性对PoRV的作用。通过免疫印迹法Western blot、荧光定量PCR、病毒毒价测定等方法检测GBP1、GBP2蛋白的表达情况,并研究其抗病毒功能。结果表明:成功构建pCDNA3.1(+)-GBP1-HIS和pCDNA3.1(+)-GBP2(47aa-592aa)、(131aa-592aa)-HIS重组质粒,经验证能够表达。PoRV在蛋白和mRNA水平上能显著促进GBP1、GBP2基因表达上调。过表达GBP1、GBP2基因能显著抑制PoRV复制,沉默GBP1、GBP2基因的表达能显著促进PoRV复制。成功构建并表达了GBP1、GBP2蛋白的G、M、E、ME结构域截断体。过表达截断体基因发现GBP1、GBP2的G区域抑制PoRV的复制。通过泛GTPase抑制酶活性,发现GBP1、GBP2抑制PoRV复制需要依赖GTPase酶活性。GBP1、GBP2蛋白能够抑制PoRV的复制,该抑制作用依赖GBP蛋白GTPase酶活性区域。研究结果为PoRV寻找新的药物靶点和研发新型疫苗提供理论依据。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 GBP1 GBP2 抗病毒 结构域
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猪轮状病毒疫苗研究进展
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作者 陈少聪 吴允昆 《现代畜牧兽医》 2024年第7期75-79,共5页
猪轮状病毒(PoRV)是导致仔猪患病毒性腹泻的主要病原体之一,可对养猪业造成巨大的经济损失。目前,疫苗接种被认为是防治PoRV感染最有效的手段。为了更好地预防和控制PoRV感染,文章总结了目前用于防控PoRV感染的不同类型疫苗,包括灭活疫... 猪轮状病毒(PoRV)是导致仔猪患病毒性腹泻的主要病原体之一,可对养猪业造成巨大的经济损失。目前,疫苗接种被认为是防治PoRV感染最有效的手段。为了更好地预防和控制PoRV感染,文章总结了目前用于防控PoRV感染的不同类型疫苗,包括灭活疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗,并对其应用研究进展进行了综合评述,通过分析各类疫苗的优缺点以及治疗效果,以期为未来PoRV疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(porv) 病毒性腹泻 病毒感染 新疫苗研发
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猪轮状病毒OSU株对乳鼠的致病性
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作者 桑卡娜 杨绒娟 +4 位作者 胡惠君 卞愧 徐倩 褚何红 周德刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期47-53,共7页
为建立猪轮状病毒(PoRV)OSU株感染乳鼠致腹泻模型,研究PoRV对乳鼠的致病性,本试验选用40只4日龄昆明乳鼠,将其随机分为3个攻毒组和1个空白对照组,攻毒组乳鼠经口灌胃不同剂量的PoRV培养液,分别为攻毒组1(50μL)、攻毒组2(100μL)和攻毒... 为建立猪轮状病毒(PoRV)OSU株感染乳鼠致腹泻模型,研究PoRV对乳鼠的致病性,本试验选用40只4日龄昆明乳鼠,将其随机分为3个攻毒组和1个空白对照组,攻毒组乳鼠经口灌胃不同剂量的PoRV培养液,分别为攻毒组1(50μL)、攻毒组2(100μL)和攻毒组3(150μL),病毒滴度为10~(5.2)TCID_(50)/100μL,空白对照组按同样的方法灌服细胞培养液。在感染后不同时间点观察乳鼠的临床症状、腹泻和死亡情况、解剖症状,采用苏木精-伊红(H.E.)染色进行肠道组织病理学检查,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测乳鼠肠内容物中PoRV含量。结果显示,乳鼠在接种PoRV后24 h出现明显腹泻症状,攻毒后3~4 d时发病最严重,4 d时乳鼠的腹泻率介于62.5%~100%,7 d时恢复正常,乳鼠的死亡率介于44.4%~90.0%。与空白对照组比,攻毒组小鼠在给予PoRV后,肠道出现明显的病理变化,主要表现为水肿和充血、肠上皮完整性破坏。RT-PCR检测结果显示,攻毒组部分乳鼠的肠内容物中检出PoRV。本试验利用PoRV OSU株成功建立了乳鼠腹泻模型,阐明了其致病特征。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 乳鼠 腹泻 动物模型 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
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PEDV、TGEV和PoRV三重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:5
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作者 蒲翠敏 冯旭芳 +7 位作者 张双翔 胡兴义 张海 丁尊俄 王开功 周碧君 文明 程振涛 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期19-25,共7页
为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)三重PCR检测方法,根据GenBank登录的PEDV S基因、TGEV M基因和PoRV VP7基因参考序列,设计3对特异性引物,以克隆的质粒为模板,进行反应条件... 为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)三重PCR检测方法,根据GenBank登录的PEDV S基因、TGEV M基因和PoRV VP7基因参考序列,设计3对特异性引物,以克隆的质粒为模板,进行反应条件的优化以及特异性、敏感性试验。结果采用所建立的方法能够扩增出PEDV、TGEV和PoRV特异性片段,且不能检出PCV2、CSFV、PRRSV;对PEDV、TGEV和PoRV质粒模板的最低检测量分别为1×10~2拷贝/μL、1×100拷贝μL、1×10~3拷贝/μL;对10~2份临床病料进行检测,结果 PEDV、TGEV和PoRV的检出率分别为37.25%、1.96%和6.86%,与单项PCR检测结果进行比较,符合率均为100%。结果表明,所建立的三重PCR检测方法可为猪病毒性腹泻病的快速诊断及流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 三重PCR
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