miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P<0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

系统性红斑狼疮患者血液中PRDM1和CD138＋浆细胞表达的研究

目的;探讨系统性红斑狼疮(SlE)患者和正常人之间PRDM1和CD138+浆细胞的差异。方法:40例SLE患者血液标本,30例健康体检血液标本,抽取RNA、利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究PRDMl基因表达;收集外周血单个核细胞,利用流式细胞技术研究CDl38’浆细胞量的差异。结果:SLE患者组血液中的PRDM1表达量明显高于健康体检组(p<0.05),并且CD138+浆细胞的量也多于健康体检组。结论:SLE实验组中的PRDM1明显高于体检对照组,CD138+浆细胞的量也高于对照组,提示SLE患者中浆细胞数量的增多与PRDMl高表达相关,这为进一步了解SLE发病机制提供了一个新的方向和靶点。

内部核糖体进入位点(IRES)调控细胞血清饥饿应激条件下PRDM13的翻译

PRDM13是锌指蛋白转录抑制因子（positive regulatory domain zinc finger protein,PRDM）家族中的一员,其在细胞分化、肿瘤的发生和恶性转化中起着重要的作用。而对于PRDM13基因侧翼序列是否含有内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）及其功能所知甚少。本研究对PRDM13 5＇端的非翻译区（5＇UTR）进行IRES结构与功能分析,探索其在细胞血清饥饿应激条件下对PRDM13翻译的影响。实验发现,在血清饥饿的条件下,肝癌细胞Bel7402/WT中PRDM13的蛋白质水平增加,但是其mRNA水平基本没有变化。将PRDM13 5＇UTR的序列插入双顺反子的报告载体（pRL-FL）中,并且将构建的载体（pRL-PRDM13-FL）转染进细胞中,结果显示,PRDM13 5＇UTR含有IRES,且发现PRDM13 5＇UTR中的105 nt（53~157）对其IRES的功能至关重要。在帽依赖的翻译（cap-dependent translation）机制被抑制时,IRES这种机制可有效维持PRDM13蛋白合成。本研究提供了在细胞压力条件下调节PRDM13蛋白合成的一种新的解释。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对伯基特淋巴瘤NAMALWA细胞株增殖及阳性调控区锌指蛋白1α基因表达的影响

目的探讨DNA甲基化抑制剂5．氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对伯基特淋巴瘤NAMALWA细胞株增殖及抑癌基因阳性调控区锌指蛋白10[（PRDM101）表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测5-Aza．CdR对NAMALWA细胞株增殖的影响，SYBRGreen相对定量反转录聚合酶链反应方法检测PRDM10α基因表达水平。结果5-Aza．CdR可抑制NAMALWA细胞的增殖，且表现为浓度依赖性，在终浓度为0．01、0．0625、0．1、0．125、0．25、0．5、1、2和4μmol／L时对NAMALWA细胞株的抑制率分别为21．93％、39．23％、47．69％、50．37％、53．54％、57．72％、62_31％、65．68％和67．87％，且不同药物浓度间吸光度值比较，差异有统计学意义（均P〈0．01）。同时，5-Aza—CdR能使NAMALWA细胞株中PRDM1α重新表达，0．5、1、2μmol／L加药组与对照组比较，△Cf之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DNA甲基化抑制剂5-Aza—CdR能显著抑制伯基特淋巴瘤NAMALWA细胞株增殖，可能与其诱导的PRDM1α基因的去甲基化和PRDM1α的再表达有关。

PRDM14在肺癌细胞系中的表达

目的检测PRDM14在肺癌细胞系中的表达及分布情况。方法采用RT-PCR技术和免疫荧光方法分别检测人支气管上皮细胞系(HBE)和6个肺癌细胞系中PRDM14mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示PRDM14与GAPDH电泳条带的平均光密度比值在肺癌细胞系中显著高于HBE细胞系(P<0.001);免疫荧光结果显示PRDM14蛋白表达的平均荧光强度在肺癌细胞系中高于HBE细胞系(P<0.05),PRDM14蛋白荧光信号主要定位于细胞浆。结论 PRDM14在HBE细胞系低表达,在肺癌细胞系高表达,主要分布于细胞浆,PRDM14可能在肺癌的发生发展中发挥作用。

PRDM1和ZEB2在子宫内膜癌中的表达及预后评估

目的探讨正性调控域锌指蛋白1(PRDM1)和E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)在子宫内膜癌中的表达。方法选取2013年1月-2014年1月什邡市人民医院肿瘤科收治的87例行肿瘤切除术子宫内膜癌患者进行研究,收集癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测两组PRDM1和ZEB2表达,分析二者表达与临床病理参数关系,二者表达相关性及对预后评估的价值。结果子宫内膜癌组织中PRDM1阳性率为63.22%,高于癌旁组织的22.98%(P<0.05);ZEB2阳性率为50.57%,高于癌旁组织的18.39%(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织中PRDM1和ZEB2表达与年龄无关(P>0.05),而与癌组织分化、肌层浸润、病理分期、淋巴结转移相关(P<0.05);子宫内膜癌患者PRDM1和ZEB2表达呈正相关(r=0.343,P=0.001)。随访5年,子宫内膜癌组织中PRDM1阳性患者中位生存时间为(43.74±2.22)个月,低于阴性患者(52.33±2.42)个月(P<0.05),阳性患者预后5年存活率为38.18%,低于阴性患者的68.75%(P<0.05);ZEB2阳性患者中位生存时间为(42.25±2.25)个月,低于阴性患者(51.52±2.15)个月(P<0.05),阳性患者预后5年存活率为36.36%,低于阴性患者的65.12%(P<0.05)。结论子宫内膜癌患者组织中PRDM1和ZEB2均呈阳性表达,与临床病理参数相关,二者表达呈正相关,PRDM1和ZEB2阳性率高患者中位生存时间短,预后较差。

锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性

目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14（positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14）5忆非翻译区（5忆untranslated region,5忆UTR）内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5忆UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RL-PRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5忆UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5忆UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5忆UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5忆UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。