缺血预处理和吡那地尔预处理对NF-κB的影响及其心肌保护作用

目的:观察缺血预处理和吡那地尔预处理对心肌核转录因子(NF-κB)活性的影响,进一步探讨预处理心肌保护机制。方法:健康日本大耳白兔80只随机分为5组,分别为空白对照组(C组)、去极化组(K组)、缺血预处理组(I组)、吡那地尔预处理组(P组)和格列本脲阻断组(G组)。建立离体心脏Langendorff模型,待心率平衡10min后全心缺血40min,复灌60min或120min。分别于平衡10min和复灌15min、30min、60min和120min时检测心功能指标;平衡10min和复灌30min时冠脉流量(CF);平衡10min、复灌60min和120min心肌NF-κBP65的表达情况。结果:(1)复灌后I组和P组各项心肌功能和CF恢复率均优于C组和K组(P<0.05或P<0.01)。(2)复灌后60min和120min时,I组和P组心肌细胞胞核NF-κBP65平均灰度值高于C组和K组(P<0.05或P<0.01);G组心肌细胞胞核NF-κBP65平均灰度值较P组降低(P<0.05)。结论:缺血预处理和吡那地尔预处理均能对心肌起到良好地保护作用,其保护机制可能是通过开放ATP敏感性钾通道直接或间接抑制NF-κB激活,进而减轻心肌缺血再灌注损伤。

ATP敏感性钾通道、酪氨酸激酶和NF-κB参与高铁血红素诱导的大鼠心肌保护作用

通过诱导血红素氧化酶1(Hemeoxygenase1,HO1)可增强大鼠对抗心肌缺血复灌损伤。本文探讨线粒体ATP敏感性钾通道(MitochondrialATPsensitivepotassiumchannel,mitoKATP)、酪氨酸激酶(Proteintyrosinekinases,PTK)和核因子κB(NuclearfactorkappaB,NFκB)是否参与其中。SD大鼠腹腔注射HO1的诱导剂高铁血红素(hemin)50mg/kg,24h后取离体心脏给予30min缺血和120min复灌。结果发现,hemin可改善缺血-复灌(Ischemiareperfusion,IS)心脏的收缩功能,缩小心肌梗死面积;而HO1的抑制剂ZnPP可抑制hemin引起的HO1活性增加,并抵消hemin诱导的心肌保护作用。在腹腔注射hemin前给予mitoKATP通道阻断剂5HD(5mg/kg),与hemin+IS组相比,心脏的收缩功能明显下降,心肌梗死面积增大,LDH和CK释放增加。而在hemin预处理后24h,30min缺血前给予5HD灌流(100μmol/L)同样可阻断hemin诱导的心肌保护作用。hemin诱导的心肌保护作用亦可被PTK抑制剂genistein(10μmol/L)或NFκB抑制剂PDTC(100μmol/L)所取消。结果提示:hemin可诱导心肌HO1增加,保护心肌缺血-复灌性损伤,其作用可能与PTK和NFκB的激活有关,而mitoKATP通道在hemin诱导的心肌保护作用中可能扮演了启动因子和终末效应器双重角色。

龙血素B碳桥结构修饰对其选择性调节离子通道蛋白功能的影响

为了对龙血素B碳桥结构进行改造,得到对钾、钠离子通道蛋白功能调节选择性更强的衍生物,以2,4,6-三甲氧基-4′-苄氧基查尔酮和2,4,6-三甲氧基苄胺为原料合成了OB(碳桥具有α,β-不饱和双键的龙血素B衍生物)和AB(碳桥具有酰胺键的龙血素B衍生物),通过核磁共振与质谱技术对合成的化合物进行了结构表征,并在HEK-293T细胞和急性分离的小鼠背根神经节细胞(dorsal root ganglion,DRG)当中进行了全细胞膜片钳实验,观察改造的龙血素衍生物对钾通道和钠通道的作用.OB对Kv1.3通道的抑制活性与龙血素B相当,但对DRG细胞河豚毒素敏感型钠通道及Nav1.7通道的活性有所降低.AB对DRG钠通道和Nav1.7通道的作用相比龙血素B略有减弱,但几乎丧失了对Kv1.3通道的抑制活性.以上结果表明,对龙血素B的碳桥进行结构修饰,能够改善其相应产物的理化性质,提高部分产物对离子通道蛋白的选择性.

刺五加皂甙B对心肌线粒体ATP敏感性钾通道的作用

研究刺五加皂甙B(Sb)对心肌线粒体ATP敏感性钾通道 (mitoKATP)的作用。用酶解法获取兔心室肌细胞 ,分为对照组、0 .1mmol/LSb组、0 .5mmol/LSb组、1mmol/LSb组、格列本脲组和格列本脲 +1mmol/LSb组。用罗丹明 (Rhodamine 12 3)染色 ,激光扫描共聚焦显微镜 (多光子模式 )观察线粒体荧光强度变化。结果 :①观察 15min对照组线粒体荧光强度无明显变化。② 0 .1,0 .5和 1mmol/LSb组均可见用药后线粒体荧光强度明显增加 ,分别增加 10 .3%± 6 .78%、18.4 %± 5 .5 1%和 2 4 .1%± 7.6 4 % ,荧光强度的增加以前 5min为主。③ 3μmol/L格列本脲不影响线粒体荧光强度 ,但可以阻断Sb对线粒体荧光强度的作用。结论 :Sb对mitoKATP有开放作用。

柯萨奇B_3病毒对心肌细胞离子通道电流的影响

目的 :探讨柯萨奇B3病毒 (coxsackievirusB3,CVB3)对大鼠心肌细胞离子通道的影响 ,以了解病毒感染导致细胞电生理活动异常的机理。方法 :酶消化法获得单个心肌细胞后利用膜片钳全细胞电流记录技术观察CVB3对L型钙通道电流、钠通道电流、外向钾电流和内向整流性钾电流的影响。结果 :CVB3感染使L型钙通道电流、外向钾电流增加 ,内向整流性钾电流减小 ,对钠通道电流无明显影响。结论 :CVB3对L型钙通道电流、外向钾电流和内向整流性钾电流的影响可能是病毒感染后细胞损伤和产生异常电活动的原因。

人B淋巴细胞电压依赖性K^+ 通道及ATP敏感性Cl^- 通道的膜片钳研究(英文)

研究人Ｂ细胞电压依赖性钾通道（Ｋｖ） 及ＡＴＰ敏感性Ｃｌ－ 通道的存在及其调节。以人Ｂ细胞（Ｄａｕｄｉｃｅｌｌｓ）为研究对象，膜片钳技术做全细胞记录。结果表明，①全细胞ｖｏｌｔａｇｅｒａｍｐｐｒｏｔｏｃｏｌ 证实有Ｋｖ 通道的存在，该Ｋｖ 通道对钾通道阻断剂ｑｕｉｎｉｎｅ １００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 及ｃｈａｒｙｂｄｏｔｏｘｉｎ（ＣＴＸ）１００ｎｍｏｌ·Ｌ－ １ 敏感。②灌流液中加入ＡＴＰ１ｍｍｏｌ·Ｌ－ １ 后，Ｋｖ 失活，并激活一外向性整流电流。在有ｑｕｉｎｉｎｅ 或ＣＴＸ存在时，该外向性电流仍然存在，但可被Ｃｌ－ 通道阻断剂ＤＩＤＳ１００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 及Ｐ２ 受体阻断剂ｓｕｒａｍｉｎ １００μｍｏｌ·Ｌ－ １ 阻断。③电极液中加入ＰＩＰ２ ５μｍｏｌ·Ｌ－ １ ，也可明显削弱该外向性电流。提示人Ｂ细胞膜上有Ｋｖ 通道及ＡＴＰ敏感性Ｃｌ－ 通道的表达，Ｐ２ 受体及ＰＩＰ２ 可能参与其信息转导过程。

肝细胞癌患者Eag1表达与临床病理特征的相关性

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者中Eag1表达与临床病理特征、外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)的相关性。方法采用免疫组织化学(IHC)法检测186例HCC组织芯片中Eag1的表达。分析Eag1的表达与患者临床病理特征、NLR、PLR及预后的相关性。结果IHC结果显示,Eag1在HCC组织中的阳性表达率为82.3%(153/186),高于其在癌旁组织中的阳性表达率56.5%(105/186),差异有统计学意义(P<0.01)。HCC中Eag1阳性表达与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、血清甲胎蛋白(AFP)、肝硬化、肿瘤分级、脉管内癌栓、术后复发因素相关(P<0.05或P<0.01)。治疗前外周血NLR、PLR与HBsAg、AFP、肝硬化、肿瘤分级、脉管内癌栓、术后复发因素相关(P<0.05或P<0.01)。HCC组织中Eag1阳性表达与NLR、PLR呈显著正相关(P=0.001)。结论在HCC恶性进展中,Eag1高表达可能是关键的分子事件之一。Eag1作为肿瘤特异性分子标志物,其表达能反映肿瘤的恶性状态,有助于评估HCC患者的预后。HCC中Eag1高表达可影响外周血中NLR、PLR,提示其参与乙型肝炎病毒感染导致的肝炎、肝硬化、肝癌的发生过程。Eag1或是HCC靶向治疗的有效靶点。

成年大鼠心房肌牵张激活钾通道的牵张敏感性和门控机制

目的探讨成年大鼠心房肌细胞牵张激活钾通道（stretch-activated K^＋-selective channels，SAKCs）的电生理学特性，确定皮质细胞骨架在通道门控机制中的作用，对从通道水平阐明机械-电反馈具有重要的理论和实际意义。方法联合应用单通道膜片钳技术和压力钳技术，在急性分离的成年大鼠心房肌细胞上，采用细胞贴附（cell-attached）方式记录SAKCs的活动。结果实验所记录的通道为SAKCs，通道闪烁样开放，无整流特性。当细胞外液为高K^＋液（140mmol／L）时，翻转电位为0mV。钳制膜电位＋60mV时单通道的电导值为（59±5）pS，-60mV时为（51±8）ps。通道约在负压刺激开始700～800ms内被快速激活，刺激解除后，通道快速在500ms内去激活。超过-30mmHg（1mmHg=0．133kPa）的刺激可使多个通道同时开放。实验中未观察到通道活动达到饱和现象。单通道电流幅度不受负压刺激的影响。随膜片钳电极内负压的增加，通道开放概率增大，呈刺激强度依赖性。Cytochalasin B不改变SAKCs的电流幅度，但增加SAKCs的开放概率，增强SAKCs的背景活动和对机械刺激的敏感性。结论我们推测生理状态下细胞皮质肌动蛋白内衬于细胞膜，可能作为细胞膜的并联成分承受部分细胞应力，并使脂质膜的应力减少，从而使SAKCs不易被激活。

Aβ_(1~42)诱导K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白表达的信号转导通路研究

目的分析探讨β-淀粉样蛋白_(1~42)(Aβ_(1~42))诱导ATP敏感性钾离子通道(K_(ATP))亚基SUR1/Kir6.2蛋白表达上调的潜在信号转导机制。方法采用免疫细胞化学法鉴定原代培养的大鼠皮质和海马神经元,实验组分别加入0.50μmol/L核因子-κB(NF-κB)抑制剂SN50、2μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580或者2μmol/L蛋白激酶C(PKC)抑制剂CTC,于30 min后分别加入2μmol/L Aβ_(1~42),培养72 h后采用Western blotting法检测K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白的相对表达量。结果(1)NF-κB抑制剂SN50:SN50+Aβ_(1~42)组SUR1/Kir6.2蛋白表达量低于对照组(t=6.237,P=0.010;t=7.136,P=0.004)和Aβ_(1~42)组(t=12.620,P=0.000;t=18.580,P=0.000),SN50组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=12.240,P=0.000;t=4.906,P=0.034)、Aβ_(1~42)组(t=18.620,P=0.000;t=16.350,P=0.000)和SN50+Aβ_(1~42)组(t=6.002,P=0.012)。(2)p38 MAPK抑制剂SB203580:SB203580+Aβ_(1~42)组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于Aβ_(1~42)组(t=13.010,P=0.000;t=8.506,P=0.001),仅Kir6.2蛋白相对表达量高于对照组(t=7.537,P=0.003);SB203580组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=8.089,P=0.002;t=19.380,P=0.000)、Aβ_(1~42)组(t=18.870,P=0.000;t=35.430,P=0.000)和SB203580+Aβ_(1~42)组(t=5.869,P=0.014;t=26.920,P=0.000)。(3)PKC抑制剂CTC:CTC+Aβ_(1~42)组SUR1蛋白相对表达量高于对照组(t=4.756,P=0.040)、但低于Aβ_(1~42)组(t=15.170,P=0.000),CTC组SUR1蛋白相对表达量低于对照组(t=24.000,P=0.000)、Aβ_(1~42)组(t=43.930,P=0.000)和CTC+Aβ_(1~42)组(t=28.760,P=0.000);CTC+Aβ_(1~42)组Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=15.000,P=0.000)和Aβ_(1~42)组(t=24.140,P=0.000),CTC组Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=9.429,P=0.001)和Aβ_(1~42)组(t=18.570,P=0.000)、但高于CTC+Aβ_(1~42)组(t=5.571,P=0.018)。结论NF-κB、p38 MAPK和PKC信号转导通路参与Aβ_(1~42)上调大鼠皮质和海马神经元K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白的表达。

尼可地尔对哮喘气道重塑大鼠肺组织Toll样受体4以及核因子-κB p65表达的影响

目的观察尼可地尔对哮喘气道重塑大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR-4)及核因子(NF)-κBp65的作用以及对Bax/Bcl-2的调节情况。方法 32只清洁级SD雄性大鼠,随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组和尼可地尔组。采用5点注射和雾化吸入鸡卵清蛋白+氢氧化铝的方法复制大鼠哮喘模型,地塞米松组予地塞米松0.5 mg.kg-1.d-1雾化吸入,尼可地尔组予尼可地尔3 mg.kg-1.d-1雾化吸入,正常组与哮喘组雾化吸入生理盐水,共4 wk。观察大鼠肺组织病理学改变,NF-κB p65、Bax、Bcl-2的含量,以及TLR-4 mRNA的表达。结果与哮喘组相比,尼可地尔组大鼠的肺部组织炎症细胞浸润较少,肺泡的组织结构较为完整。哮喘组大鼠肺组织NF-κB p65、Bcl-2、TLR-4 mRNA表达高于正常组,Bax表达量较正常组低,差异均有显著意义(P<0.05)。尼可地尔组和地塞米松组大鼠NF-κB p65、Bcl-2、TLR-4mRNA表达低于哮喘组,Bax表达量较哮喘组高,均有显著差异(P<0.05)。结论尼可地尔能逆转哮喘大鼠肺组织病理变化,降低TLR-4介导的NF-κB p65表达,改善Bax/Bcl-2表达失调为其可能机制。

HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究

目的：检测HERG（human ether-＆#224;-go-go-related gene）钾离子通道在骨肉瘤中的表达，并探索小干扰 RNA（siRNA）沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为：HERG-siRNA 处理为实验组，control-siRNA 处理为对照组，未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示，实验组[（75．34±4．45）％]与对照组[（100．60±5．31）％]和空白组[（100．00±5．66）％]的细胞增殖水平相比，差异有统计学意义（t ＝3．64，P ＝0．007；t ＝3．43，P ＝0．009）。克隆形成结果示，实验组（134．30±11．82）与对照组（225．30±11．56）和空白组（232．80±12．21）的克隆形成数相比，差异有统计学意义（t ＝5．51，P ＝0．002；t ＝5．80，P ＝0．001）。流式细胞凋亡结果示，实验组[（28．10±2．21）％]与对照组[（9．36±2．42）％]和空白组[（10．92±2．51）％]的早期凋亡所占比例相比，差异有统计学意义（t ＝5．72，P ＝0．005；t ＝5．14，P ＝0．007）。Tunel 法结果示，实验组[（31．57±2．08）％]与对照组[（10．35±1．82）％]和空白组[（7．96±0．88）％]的凋亡指数相比，差异有统计学意义（t ＝7．69，P ＝0．002；t ＝10．48，P ＝0．001）。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1（cIAP-1）、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Bcl-2和 Survivin 的活性，同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白（IκB）α和 NF-κB p65的表达水平。结论HERG 在骨肉瘤中高表达，其通过调控 NF-κB 信号通路参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡过程，有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。

抗GABABR抗体和抗KCTD16抗体双阳性自身免疫性脑炎(附1例报告及文献复习)

目的提高和拓展对抗γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)抗体和抗钾离子通道四聚体结构域蛋白16(KCTD16)抗体双阳性自身免疫性脑炎的认识。方法收集1例抗GABABR抗体和抗KCTD16抗体双阳性的自身免疫性脑炎患者的临床资料,总结诊断、治疗经过等临床特点,结合文献复习进行分析和讨论。结果患者男性,50岁,亚急性起病,表现为精神行为异常、记忆障碍和癫痫发作。脑脊液蛋白增高(1.10g·L^-1),细胞数正常,血清和脑脊液抗GABABR抗体阳性。头颅磁共振检查示双侧海马信号增高。诊断为抗GABABR脑炎。对糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白、血浆置换治疗反应良好,但经历多次复发。随访过程中,患者血清中检测到抗KCTD16抗体阳性。发病1年后,患者全身正电子发射计算机断层显像示右肺近肺门软组织结节,远端阻塞性炎症,氟代脱氧葡萄糖代谢异常增高,行肺结节穿刺未见异形细胞,支气管镜未见出血及新生物。后续随访患者肺部结节进一步增大,最终病理活检证明为小细胞肺癌。结论抗KCTD16抗体可存在于抗GABAbR脑炎患者中,且与小细胞肺癌密切相关。

心肌细胞感染病毒后钙、钾通道电流及其表达改变和牛磺酸的作用

目的 观察心肌细胞感染病毒后心肌细胞钙、钾通道电流及通道表达改变和牛磺酸的作用。方法 (1 )体外心肌细胞感染病毒 :用胰蛋白酶和胶原酶消化法分别获得大鼠、乳鼠培养和分离的心肌细胞并感染柯萨奇B3病毒 ,用于检测Ca2 +跨膜内流、电压依赖性钙通道电流 (ICa)和外向钾通道电流 (Iout)。 (2 )在体小鼠感染病毒 :BALB c小鼠腹腔内注射柯萨奇B3病毒 7d后取出心脏用于检测电压依赖性钙通道α1 亚单位抗原和电压调控性钾通道 (Kv)mRNA的表达。相应各组加入不同剂量的牛磺酸并观察其作用。结果 (1 )感染柯萨奇B3病毒后Ca2 +跨膜内流量及ICa增加 ,牛磺酸对其有抑制作用。 (2 )柯萨奇B3病毒感染使Iout明显增大 ,牛磺酸可使病毒感染后的Iout趋于恢复正常。(3)柯萨奇B3病毒感染后小鼠心肌出现强电压依赖性钙通道α1 亚基抗原阳性信号 ,Kv1 2、Kv2 1、Kv4 2mRNA与 3种探针的杂交信号亦明显增强 ,牛磺酸可使增强的阳性信号减弱。结论 柯萨奇B3病毒感染后心肌细胞钙、钾离子通道电流及表达均增加 。

信号蛋白中甲硫氨酸残基的可逆性氧化和甲硫氨酸亚砜还原酶

含硫氨基酸甲硫氨酸在体内易被胞内、外活性氧氧化为甲硫氨酸-R,S-亚砜。蛋白质肽链中的甲硫氨酸残基被氧化后,蛋白活性发生显著改变,如钙调素与钙调素结合蛋白亲和力的下降、钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ的激活、钾离子通道ShC/B失活动力学的改变。多数生物都存在一个msrA基因和1～3个msrB基因,编码两种序列和结构都明显不同的酶:甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)和甲硫氨酸亚砜还原酶B(MsrB),分别还原甲硫氨酸-S-亚砜和甲硫氨酸-R-亚砜。两种酶的催化机制基本相同,其活性中心结构互为镜像。两种还原酶分布于体内不同器官及各种亚细胞结构。对于MsrA活性的研究,已有30年的历史,最初主要集中在低等生物,已发现MsrA对于延缓衰老和神经退行性疾病具有重要作用,也是致病菌的主要毒力因子。最近10年对MsrB也进行了系统研究,并取得了重要进展。人们正在逐渐认识到这些酶在细胞信号蛋白分子活性调节中的重要作用。