PrPsc检测方法研究进展

海绵状脑病(prions)是人和动物中的一类致死性中枢神经系统疾病。现尚无理想的早期、快速的检测方法和防治措施。目前,组织病理学检测、动物试验和免疫学检测为较为常用的prions病检测方法,其它一些新兴的检测方法如毛细管电泳、光谱分析和高效液相色谱等也逐渐被开发研制,但因其本身缺陷,暂时无法得到广泛应用。

绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA转录水平研究

本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系。选用背景相似的6只内蒙绵羊,提取组织RNA,反转录RT-PCR构建cDNA模板;利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线,对组织中该受体mRNA水平进行Real-time(实时)荧光定量PCR检测。结果表明,大脑皮质中的受体表达水平最高(P<0.05),其次为心脏和脑干,中等表达的器官依次为海马、小脑、脾脏、丘脑、肠系膜淋巴结、肝脏和肾脏,表达量最低为肺脏(P<0.05)。结果提示,朊病毒受体——37kDa/67kDa LRP/LR在绵羊各组织中的表达量高低与朊病毒的复制程度有一定的相关性,受体LRP/LR表达量较高的区域朊病毒复制水平相对较高。结果提示朊病毒入侵机体后,组织器官PrPSc聚集程度可能与受体37kDa/67kDa LRP/LR表达水平相关。

朊病毒的生物学研究进展

朊病是一种人畜共患病,对人和动物的健康影响很大,是一种致死性疾病。由于该病的临床症状和组织病理学变化等已为人们所熟知,作者仅就朊病的病因、发病机理及诊断治疗方法的最新研究进行阐述,并从病原基因遗传结构特点、致病蛋白的结构特点、诊断方法的提高、治疗的前景作一综述,为该类疾病的防治提供理论依据。

朊病毒感染途径的研究进展

朊病毒病是一类能够感染人和其他动物的神经退行性传染病,其致死率高达100%,到目前为止尚无有效的治疗方法,该疾病直接威胁着人和动物的生命安全及健康。目前普遍认为该病的致病因子是一种结构异常的朊蛋白(PrPSc),其主要入侵宿主的中枢神经系统,研究发现PrPSc主要通过消化系统、血液循环系统和外周神经系统途径进行复制并传播,然后进入中枢神经系统导致疾病发生。本文对PrPSc从外周组织器官入侵神经系统的途径进行综述,以理解朊病毒神经入侵的机制。

朊病毒疾病的诊断技术

朊病毒疾病即海绵状脑病 ,是人和动物中的一类致死性中央神经系统疾病。介绍了朊病毒疾病的诊断技术 :病理诊断、基因诊断、免疫诊断和血液检测。

Creutzfeldt-Jakob病非侵入性诊断方法研究新进展

朊病毒是一种非常规意义上的传染性病原体,常导致致命性神经系统疾病,其中以Creutzfeldt-Jakob病(CJD)最为常见。CJD属于一种罕见的神经系统退行性疾病,临床进展迅速,致死性达100%。此疾病有多种类型,其中以散发型最为常见。目前此病的最大挑战即临床诊断。到目前为止临床确诊的金标准仍为脑组织活检,但将其作为诊断金标准仍存在一定局限性。随着研究的逐步进展,亟需探讨新的非侵入性的检测(手段),以利于疾病诊断。本文就有关CJD生物标记物检测、基因筛查、影像学检查及电生理检查等非侵入性手段的研究进展进行综述,旨在协助CJD的诊断,为CJD的确诊提供新的思路。

朊病毒致病机理研究进展

朊病毒是一种无核酸但具有感染力的异常朊蛋白,可引起人和动物的神经退行性病变,该病结局是死亡。作者就朊病毒中枢神经系统感染机理,局部组织P rP sc聚集分布与P rP sc对神经组织损伤的关系、朊病中正常P rP c生理功能、细胞死亡可能机制、朊病中的神经炎—小胶质细胞的反应、补体激活作用;朊病毒外周神经系统感染机理,入侵门户、胞内转运机制、外周感染靶器官、胞内聚集与复制、神经入侵及朊病进程中已发现的几种受体细胞的重要作用等作一综述,为进一步研究该病提供理论依据。

N2a细胞增殖的痒病小鼠适应毒株RML的致病特性分析

为鉴定细胞体外增殖的痒病小鼠适应毒株RML的致病特性,包括致病性和株系特征等,用RML感染的N2a(Sc-N2a)细胞裂解物接种C57BL/6J小鼠进行研究。结果显示:经(200±28)d的潜伏期后,C57BL/6J小鼠全部发病死亡,临床症状均表现为共济失调,而接种N2a细胞裂解物的C57BL/6J小鼠与接种Sc-N2a细胞裂解物的PrP基因敲除小鼠均正常存活。Sc-N2a细胞增殖的PrPSc与发病小鼠脑组织中PrPSc具有同样的糖基化模式,三种糖基化PrPSc具相同的迁移率,而且均是以单糖基化形式为主。发病小鼠的病理学研究结果显示:脑部的海绵状空泡主要分布于脑干、大脑、小脑、丘脑;脑部的PrPSc主要分布于大脑皮质、海马、丘脑,在小脑、四迭体、嗅球有少量的分布。小鼠回归试验表明:Sc-N2a细胞增殖的PrPSc对小鼠具致病性,并保留RML的株系特征,是TSEs研究的理想细胞模型。

感染性朊蛋白的毒性与糖磷脂酰肌醇(GPI)的相关性

海绵状脑病(朊病)是一类神经退行性脑病,目前是世界上研究的热点问题之一。引起该病的病原是一种朊蛋白质,它与宿主自身的正常朊蛋白的一级结构相同,只是二级结构的构象有所不同。对海绵状脑病的致病机理至今仍不太清楚,作者针对目前研究的朊蛋白的致病性与GPI的关系作一综述。

免疫治疗朊病的前景

神经元的死亡被认为是朊病的特点,这是由于细胞表面的唾液酸糖蛋白由正常的含有大量α螺旋的结构变成了异常的β折叠丰富的、具有蛋白酶抗性的结构。最近的研究结果表明,朊病的复制可以被抗PrP的单克隆抗体所抑制,能延长朊病毒的潜伏期,这增加了人们用抗体来治疗朊病的信心。

Protein A磁珠检测朊病毒方法的建立

建立Protein A磁珠法检测朊病毒,将朊病毒抗体IH2包被后的Protein A磁珠与蛋白酶K消化过的攻毒小鼠脑组织匀浆液混合,经免疫沉淀缓冲液温和洗脱杂蛋白,再经0.2M甘氨酸将目的蛋白洗脱并且利用聚丙酰胺凝胶电泳检测。通过聚丙酰胺凝胶电泳检测出25KD的目的蛋白带,经与正常未消化的朊蛋白条带相比较,证实检测出朊病毒。Protein A磁珠具有高效特异的与抗体IgG结合的特点,与多克隆抗体混合后可有效结合IgG。该方法较免疫组织化学和Western-blot技术简便快速,且磁珠可以回收再使用,使成本低廉。

传染性海绵状脑病污染环境引发的风险

传染性海绵状脑病（TSEs）又称朊蛋白疾病（Prion diseases）,是一组能够感染人和动物的慢性、致死性、神经退行性疾病。目前普遍认为是由体内正常的朊蛋白（PrPC）错误折叠成具有部分蛋白酶抗性的PrPSc引起的。该病可引起多种动物与人发病,如人类克雅氏病（Creutzfeldt-Jakob,CJD）、格氏病（Gerstmann-Scheinker,GSS）.

朊粒蛋白PrP^(Sc)寡聚体的形成与跨膜毒性

朊粒蛋白(prionprotein,PrP)传染致病机制一直是朊粒(prion)研究领域的焦点.由正常型朊粒蛋白(PrPC)向致病型朊粒蛋白(PrPSc)的转变是致病的关键步骤.本文综述了近年来PrPC向PrPSc转变的结构变化特征、PrPSc由单体形成寡聚体的组装机制、以及PrPSc寡聚体的跨膜机制与细胞毒性间的关系等方面的研究进展.

羊瘙痒因子263K感染的金黄仓鼠脑中PrP^(Sc)的动态沉积特点

目的 观察羊瘙痒因子 2 63K感染的金黄仓鼠脑中PrPSc的沉积特点。方法 颅内接种羊瘙痒因子 2 63K感染金黄仓鼠 ,分别于接种后第 2 0天、40天、50天、60天和 70天取脑组织 ,用免疫组化法检测PrPSc的沉积 ,HE染色观察病理变化 ,Westernblot检测蛋白酶抗性PrPSc。结果 颅内接种 2 63K后第 2 0天 ,脑组织中即可检测到耐热和耐蛋白酶K的PrPSc的沉积 ,呈散在分布 ;第 40天可见细胞内PrPSc的沉积 ,第 50天脑组织中出现灶性、颗粒状、细胞内PrPSc的沉积 ,累及部位扩大 ,第60 - 70天可见弥漫性呈桑葚状、斑块状沉积物。PrPSc主要沉积于大脑皮质Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层 ,海马锥体细胞层 ,小脑皮质颗粒层。HE染色结果显示大脑皮质海绵样病变在接种后 40天出现 ,随着接种时间的延长而加剧。Westernblot检测显示PrPSc在接种后 40天即可检出 ,PrP总量和PrPSc含量随着接种时间的延长而增加。结论 随着接种时间延长 ,羊瘙痒因子 2 63K感染的金黄仓鼠脑中PrPSc沉积累及的范围、程度扩大 ,IHC检测脑组织中PrPSc的沉积早于临床症状的出现 ,甚至其它检测方法的检出。

朊病毒研究进展

朊病毒是一种不含核酸的蛋白浸染子,主要引起人和动物的中枢神经疾病。目前,由其引起的朊病毒病在世界多国已有发生,危害严重,经济损失巨大,并对人类的健康构成很大威胁。该病毒蛋白是一种膜糖蛋白,至少有两种基本形式,即PrPc与PrPsc,PrPsc对紫外线及消毒剂有很强的抵抗力;朊蛋白基因是单拷贝基因,高度保守,但在物种间可能存在易感性相关基因。病毒的复制呈指数增长过程,需朊病毒结合因子参与。病毒的致病性在于正常的朊病毒蛋白PrPc转变为PrPsc,PrPsc是发病的直接原因。另外,对其检测和防治目前也有了新的方法及措施。文章就朊病毒概念、蛋白、基因、复制、致病机理及检测与防治作了综述。

Creutzfeldt-Jakob病神经影像学研究进展

Creutzfeldt-Jakob病（CJD）又称皮质-纹状体-脊髓变性，是由变异的朊蛋白（PrP）引起的一种罕见的可传染的、慢性、进展性、致死性神经退行性病变。其发病率为1/100万，CJD病因可分为外源性朊蛋白感染和内源性朊蛋白基因突变。健康人体内存在正常的朊蛋白，即PrPc当外来致病的朊蛋白或遗传性突变导致PrPc变为PrPsc时，PrPsc又会促进PrPc转化为越来越多的PrPsc，致使神经细胞逐渐失去功能，导致神经细胞死亡，从而引起中枢神经系统发生病变，而CJD患者的病理改变主要是大脑皮质神经细胞死亡、胶质细胞增生及这两者周围的组织结构发生海绵状变性。

蛋白质错误折叠循环扩增技术

目前发现有多种人类及动物疾病是由体内蛋白质的错误折叠引起的,其中朊毒粒病因具有传染性而备受关注。朊毒粒病研究的核心问题之一是正常细胞朊蛋白(PrPc)向异常致病朊毒粒(PrPSc)转变的机制。蛋白质错误折叠循环扩增技术(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)就是最新发明的在体外诱导朊蛋白(PrPc)产生错误折叠生成朊毒粒(PrPSc)的技术。该文将概要介绍此项技术的原理、技术要点及在诊断与基础研究方面的应用前景。

在前临床期检测金仓鼠羊痒病淋巴结中病理型朊蛋白PrP^(Sc)

12只雌性5周龄金仓鼠腹腔注射50μL羊痒病(SCRAPIE)263K株10%的脑组织匀浆。在临床前期,感染后第2、4、6、8、10、12周和临床末期第20周,金仓鼠被分别处死,取大脑、淋巴组织、脾脏、肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织,进行蛋白质免疫印迹杂交实验检测朊病毒病理型朊蛋白PrPSc。研究结果显示在临床前期,通过改进后的纯化技术,我们能够检测出淋巴组织和脾脏组织中的PrPSc,但是在肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织中仍然没有检测到PrPSc。