PRDM14在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

背景与目的锌指蛋白转录抑制因子(positive regulatory domain zinc finger protein,PRDM)是一个有关人类肿瘤形成的转录调节因子家族,在细胞分化和恶性变中发挥重要作用。PRDM14是PRDM家族的成员之一。本研究的目的是检测PRDM14在非小细胞肺癌组织中的表达情况并探讨其与非小细胞肺癌的临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学方法检测70例非小细胞肺癌标本和7例癌旁组织中PRDM14的表达。采用Western blot方法检测42例非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中PRDM14蛋白的表达。结果 7例癌旁肺组织中PRDM14弱表达,在70例非小细胞肺癌组织标本中,有8例为PRDM14阴性表达(11.43%),9例为PRDM14弱阳性表达(12.86%),36例PRDM14阳性表达(51.43%),有17例PRDM14强阳性表达(24.29%),PRDM14的表达情况与非小细胞肺癌的分化程度(P=0.046)和组织学类型(P=0.047)有关,PRDM14在高分化腺癌、鳞癌中表达最高,在中分化腺癌、鳞癌中表达次之,在低分化腺癌、鳞癌表达最低,PRDM14在腺癌中的表达高于鳞癌。Western blot结果表明PRDM14的蛋白在癌旁肺组织和肺腺癌、鳞癌组织的表达水平存在显著差异,PRDM14在非小细胞肺癌组织中的表达水平高于癌旁肺组织(P<0.001),而且与非小细胞肺癌的分化程度有关(P=0.017),在高、中分化腺癌、鳞癌中的表达高于在低分化腺癌、鳞癌中的表达。结论 PRDM14在癌旁肺组织中低表达,在非小细胞肺癌组织中高表达,其表达水平与非小细胞肺癌的分化、组织学类型有关,可能在非小细胞肺癌的发生发展中发挥作用。

PRDM14表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响

利用原位杂交和免疫组织化学检测89例食管鳞癌组织和对应的正常食管黏膜组织中PRDM14mRNA转录水平和蛋白的表达量,并分析其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响.结果显示,食管鳞癌组织中PRDM14mRNA转录水平和蛋白表达量高于正常食管黏膜组织,有显著性差异(P<0.05).PRDM14siRNA能下调EC9706细胞中PRDM14蛋白表达,其表达下调显著抑制EC9706细胞的增殖、改变细胞周期分布和降低侵袭力.此外,PRDM14表达下调降低EC9706细胞中cyclin D1、cdk2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达以及提高p21和E-cadherin蛋白的表达.上述结果表明PRDM14可能在食管鳞癌的发生、发展中发挥重要的作用,抑制其表达.有望成为食管鳞癌分子靶向治疗的新的策略.

青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用

青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先,将prdm14基因的部分编码区连接到p ET32a质粒中,构建重组表达载体p ET32a-prdm14?600。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,获得分子量为60 k D的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化,免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),6周后获得阳性抗体,最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下,可获得Prdm14重组蛋白的高效表达;制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在Hep G2细胞中过表达的青鳉Prdm14:EGFP融合蛋白。综上所述,研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体,该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具。

PRDM14基因在大肠癌中的表达及临床病理意义

检测大肠癌患者癌组织及癌旁组织正性调节区锌指蛋白-14(PRDM14)并对其进行了检测,分析其临床病理意义。方法 探讨PRDM14在结直肠癌中的应用价值,为结直肠癌的治疗提供依据。结果 PRDM14在人结直肠癌中的表达呈阳性,而在癌旁则呈阴性;PRDM14在高级别结直肠癌中呈强阳性表达;PRDM14的表达量与淋巴道转移相关,其高表达者大部分已有淋巴道转移,而低表达者大部分未有淋巴道转移;PRDM14的表达率与肿瘤的大小、分化程度、浸润深度、淋巴结分期、 TNM分期及血管侵犯等因素相关。结论 探讨PRDM14在人结直肠癌中的临床意义。PRDM14的表达可作为判断结直肠癌恶性程度及淋巴结转移的指标;本研究有望揭示PRDM14在结直肠癌发生发展中的作用及机制,并有望作为结直肠癌新的分子标志物及干预靶标。

PRDM14在肿瘤中的研究进展

正性调节区锌指蛋白14(PR domain zinc finger protein 14,PRDM14)具有1个PR结构域和6个锌指结构,是PRDM家族具有代表性的成员之一。PRDM家族与人类肿瘤形成相关,在细胞分化和恶变过程中发挥着重要作用。PRDM家族各个成员都有一个PR-domain区域,该区域与SET-domain具有高度同源性。国内外研究发现,在多种肿瘤发生发展过程中,PRDM家族成员均有异常表达现象。近年来关于PRDM14与肿瘤的研究逐渐增多,显示其在不同肿瘤类型中发挥不同作用,有研究表明PRDM14还可以作为恶性肿瘤的一个很好的药物靶标。本文介绍PRDM14的结构及功能,并重点阐述PRDM14在肿瘤发生发展中的意义及相关研究进展。

过表达PRDM14非小细胞肺癌肿瘤细胞株的构建

本研究通过克隆人的PRDM14基因,构建过表达PRDM14的真核表达载体,转染NCI-H1975细胞后得到高表达PRDM14的非小细胞肺癌细胞株。以人胚胎干细胞cDNA为模板,PCR扩增PRDM14基因编码序列,将其插入pcDNA3.1真核表达载体,经双酶切和测序验证后,将重组质粒转染到NCI-H1975肺癌细胞中,采用Western blot检测目的蛋白表达情况。结果表明,pcDNA3.1-prdm14重组载体构建成功,且目的蛋白能够在NCI-H1975细胞中正常表达。构建的过表达PRDM14非小细胞肺癌细胞株可以为后续研究该基因对非小细胞肺癌的调控作用及非小细胞肺癌的靶向药物研究等提供实验材料。

PRDM14在肺癌细胞系中的表达

目的检测PRDM14在肺癌细胞系中的表达及分布情况。方法采用RT-PCR技术和免疫荧光方法分别检测人支气管上皮细胞系(HBE)和6个肺癌细胞系中PRDM14mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示PRDM14与GAPDH电泳条带的平均光密度比值在肺癌细胞系中显著高于HBE细胞系(P<0.001);免疫荧光结果显示PRDM14蛋白表达的平均荧光强度在肺癌细胞系中高于HBE细胞系(P<0.05),PRDM14蛋白荧光信号主要定位于细胞浆。结论 PRDM14在HBE细胞系低表达,在肺癌细胞系高表达,主要分布于细胞浆,PRDM14可能在肺癌的发生发展中发挥作用。

PRDM14基因在猪早期胚胎和主要器官中的表达

PRDM14是一种具有调控基因表达功能的转录因子,在早期胚胎发育过程中可以促进多能性基因或抑制分化基因的表达,从而影响到整个生命体的发育进程。为了研究转录因子PRDM家族中PRDM14基因在猪早期胚胎过程中的表达变化以及在新生仔猪主要器官中的表达差异,本试验以猪为研究对象,首先利用预测序列设计引物,通过序列比确定基因,然后利用荧光定量PCR等技术,对PRDM14基因在猪早期胚胎各时期及新生仔猪主要器官中的表达进行了研究。结果表明:PRDM14基因在卵母细胞MⅡ期表达较高,经过孤雌活化后,在2细胞阶段有所下降,之后随发育表达逐渐升高,而在囊胚阶段又有所降低。在新生仔猪主要器官,睾丸和卵巢中表达较高,在其他器官表达较低。结果表明,PRDM14基因在猪早期胚胎及生殖器官发育方面发挥重要作用。

正性调节区锌指蛋白14的研究进展

正性调节区锌指蛋白14(PR domain zinc finger protein 14,PRDM14)是PRDM家族中的重要成员,PRDM14基因对维持细胞的完整性和控制细胞的分化、生长及凋亡起着关键作用,在原始生殖细胞的形成、干细胞全能性的维持和其他组织器官的形成中都发挥了重要作用。PRDM14具有1个PR结构域和6个锌指结构,PRDM14参与了组蛋白的去乙酰化及甲基化过程,通过启动子区甲基化水平的改变参与肿瘤的形成。PRDM14异常甲基化能够引起染色质结构、DNA构象及DNA与蛋白质作用方式的改变,使基因的转录和表达受抑制,这些改变引起了肿瘤的发生、发展及转移。本文根据国内外发表的相关文献对PRDM14的研究现状进行综述。

乳腺癌MCF-7细胞CD44^+CD24^-表达与放化疗抵抗及转移潜能相关性研究

目的明确乳腺癌MCF-7细胞CD44+CD24-表达是否具有放化疗抵抗性,并研究其转移潜能相关性。方法无菌条件下通过FACS分选出CD44+CD24-MCF-7和non CD44+CD24-MCF-7两组细胞,进行同种条件下传代培养,采用5-氟尿嘧啶(5-FU)及医用X射线对两组细胞进行干预,对比检测两组细胞经干预后的生物学特性差异、体外侵袭能力及侵袭关联基因表达差异。MTT实验检测两组细胞经不同药物浓度的5-FU处理后细胞增殖率差异;流式细胞术检测经同种药物浓度的5-FU处理后两组细胞的周期及凋亡;彗星实验检测两组细胞经医用X射线照射后细胞DNA的损伤;蛋白质印迹法检测两组细胞侵袭相关基因PRDM14表达;基质胶侵袭性实验用于对比两组细胞体外侵袭能力差异。结果CD44+CD24-MCF-7细胞增殖抑制率为(93.86±2.95)%,与non CD44+CD24-MCF-7细胞(334.21±4.20)%比较明显下降,其IC50值约为后者4倍,u=0.38,P<0.01;细胞凋亡率CD44+CD24-MCF-7细胞为(8.77±0.66)%,较non CD44+CD24-MCF-7细胞(28.64±1.25)%显著降低,u=0.42,P=0.014;静止期(G0/G1期)CD44+CD24-MCF-7细胞为(76.19±1.623)%,较non CD44+CD24-MCF-7细胞(49.74±3.214)%明显增多,u=0.35,P=0.025;DNA损伤(4Gy Olive尾距值)CD44+CD24-MCF-7为13.130 0±0.542 8,较non CD44+CD24-MCF-7细胞33.250 0±0.932 7轻,P<0.000 1;体外侵袭能力CD44+CD24-MCF-7为75.28±6.932,较non CD44+CD24-MCF-7细胞24.23±3.408更强,P=0.007 6;PRDM14蛋白表达CD44+CD24-MCF-7为0.95±0.62,较non CD44+CD24-MCF-7细胞0.33±0.44上调,P<0.01。结论 CD44+CD24-MCF-7细胞相比non CD44+CD24-MCF-7细胞具有明显不同的细胞生物学特性,表明CD44+CD24-MCF-7表达细胞不仅具有明显的放化疗抵抗性,而且具有一定的转移潜能,在乳腺癌的化疗耐药或晚期转移中可能扮演一定的作用。

锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性

目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14（positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14）5忆非翻译区（5忆untranslated region,5忆UTR）内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5忆UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RL-PRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5忆UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5忆UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5忆UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5忆UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。