HBV PreS2+S/IFN-α融合基因真核表达载体的构建及其表达

构建含HBVPrdS2 +S和IFN α融合基因的真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α并在真核细胞中进行表达。应用重叠延伸剪切技术 (splicingbyoverlappingextension ,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/IFN α ,回收后直接克隆到 pcDNA3.1V5 /HisTOPOTA克隆载体 ,得到真核重组载体pcDNA3.1.S2S/IFN α。然后用脂质体法转染VeroE6细胞。对重组载体进行了限制性酶切及PCR鉴定 ,证明连接正确 ;经间接免疫荧光检测证实该重组载体能在真核细胞中表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α的成功构建及在VeroE6细胞中的有效表达 。

Preβ-1高密度脂蛋白与心血管疾病关系的研究进展

动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理基础,延缓和防治动脉粥样硬化对于减少和降低心血管疾病的发病率及病死率具有重要意义。高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)通过参与介导胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)在抗动脉粥样硬化的形成和进展中发挥了重要作用。Preβ-1高密度脂蛋白(prebeta-1 high density lipoprotein,Preβ-1HDL)作为HDL的一种亚类,是外周细胞移出胆固醇的最初接受体,直接参与了RCT的起始步骤,并在随后的胆固醇酯化及转运中起着重要作用。本文就Preβ-1HDL的结构、代谢及其与心血管疾病的关系作一简要综述。

ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证

目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。

HBcAg基因和PreS1(1～65)肽基因真核重组载体的构建和鉴定

目的：构建并鉴定包含人乙型肝炎病毒（HBV）HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。方法：采用PCR法扩增HBcAg基因，并通过基因突变在79～80位氨基酸处生成一个NheⅠ酶切位点，然后将这段基因连接到真核表达载体pIRES2-EGFP启动子下游的EcoRⅠ和BamHⅠ之间。同时PCR扩增PreS1第1～65氨基酸基因，并在其两端分别引入NheⅠ酶切位点，通过酶切、连接，将这段基因插入到HBcAg基因的NheⅠ酶切位点上。将构建的重组载体pIREScS1转化大肠杆菌DH5α，分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果：酶切鉴定示，插入片段大小均与预计相符。测序结果与已知序列结果一致。结论：成功构建了HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。

雌激素及其代谢产物的UPLC-MS/MS法检测在绝经激素治疗女性中的应用研究

目的研究绝经激素治疗(MHT)女性雌激素及其代谢产物,指导临床精准治疗。方法选取17例绝经综合征妇女,根据治疗方法不同分为三组,其中口服雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片(1/10 mg)组(A组)5例,口服雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片(2/10 mg)组(B组)5例,对照组(未用药)(C组)7例。通过柱前衍生化-超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法检测绝经女性血清雌激素及其代谢产物水平,分析外源性雌激素补充后血清雌激素及其代谢产物的差异性。结果在接受雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片治疗后绝经女性血清中可以检测到22种雌激素及其代谢产物,其中发挥生物学效应的雌酮(E_(1))、雌二醇(E_(2))浓度明显高于其C2、C4、C16-轻基化游离型代谢产物;轻基化代谢产物主要以葡萄糖昔酸/硫酸酯复合物(-G/S)的形式存在,以2-径基雌酮-葡萄糖昔酸/硫酸酯复合物(2-OHE_(1)-G/S)、16α-释基雌酮-葡萄糖昔酸/硫酸酯复合物(16α-OHE_(1)-G/S)为主;甲基化代谢产物主要以2-甲氧基雌酮(2-MeOE_(1))、2-MeOE_(1)-G/S为主。与未接受MHT的绝经女性相比,雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片治疗后女性血清中雌激素代谢产物新增测到8种:2-甲氧基雌二醇(2-MeOE_(2)),2-MeOE_(2)-G/S,4-甲氧基雌酮(4-MeOE_(1))、4-MeOE_(1)-G/S、E_(3)、16α-OHE_(1)、16-表雌三醇-葡萄糖昔酸/硫酸酯复合物(16-epiE_(3)-G/S)、17-环雌三醇-葡萄糖昔酸/硫酸酯复合物(17-epiE_(3)-G/S),大部分以结合型或甲基化代谢物存在。结论雌激素及其代谢产物的UPLC-MS/MS法检测可以为MHT的个体化用药方案、风险评估提供数据支持。

全国名中医尤昭玲基于“以胞宫为中心的五脏一体观”诊治绝经前后诸证

绝经前后诸证对应西医学围绝经期综合征,或多种因素致卵巢功能衰竭而出现围绝经期综合征临床表现的患者。全国名中医尤昭玲基于《黄帝内经》“五脏一体观”,提出“以胞宫为中心的五脏一体观”,认为“五脏失调”为绝经前后诸证的主要病机,以“调和五脏”为治则,创制经验方更年方。以胞宫为中心,顺应胞宫藏泻有序的特点,绝经前分经期、排卵前、排卵后辨证施以耳穴辅助治疗,绝经后顺应胞宫藏而不泻的生理特性,辅以耳穴静养阴阳。分年龄配合药膳养巢煲或养生安神煲,临证中收获佳效。

董杰教授应用调补冲任法针药结合治疗绝经前后诸证经验

介绍董杰教授应用调补冲任法针药结合治疗绝经前后诸证经验。绝经前后诸证为临床上的常见病和多发病,且发病时间持续较长,给女性的身心都造成了较大的影响。绝经前后诸证的主要病机在于肾精亏虚,天癸耗竭,冲任失调,累及心、肝、脾等多脏,痰瘀互结亦可致病。董杰教授认为本病在临床上多见于肾虚肝郁证,治疗上以调补冲任法为大纲,补肾疏肝为大法,针药结合,内外调治,使肾精充足,任通冲盛,气机调畅,阴阳交通,同时强调心理调摄,临床上每获良效。

绝经前女性冠心病患者的临床和冠状动脉造影特点

目的:分析绝经前女性冠心病(CAD)患者的临床和冠状动脉(冠脉)造影特点。方法:对比2004-04至2007-12所有第一次因胸部不适而行冠脉造影的绝经前565例患者,根据造影结果分为绝经前冠心病组280例,平均年龄(44.12±4.48)岁,绝经前正常组285例,平均年龄(44.24±3.48)岁,绝经后经冠脉造影确定冠心病的患者为绝经后冠心病组721例,平均年龄(58.09±1.44)岁,分析其临床和冠脉造影特点。结果:绝经前冠心病组与绝经后冠心病组相比,高血压(55%比66%)、2型糖尿病(15.0%比31.5%)和高脂血症(23.9%比37.4%)的发生率显著减少,P均<0.05。绝经前冠心病组比绝经后冠心病组单支病变的发生率显著增高(43.2%比26.9%,P<0.001),差异有统计学意义;而三支病变的发生率则显著降低(20.4%比33.8%,P<0.001);左主干(2.9%比1.1%,P=0.048)和前降支近端(50.4%比38.6%,P<0.001)重度狭窄(狭窄≥90%)的发生率却显著增高,差异有统计学意义。结论:绝经前女性具有典型胸痛症状,冠脉造影常显示严重的冠脉狭窄病变,而且这些病变常位于左主干和前降支近端。

绝经前激素受体阳性乳腺癌辅助内分泌治疗的研究进展

内分泌治疗是激素受体阳性乳腺癌术后辅助治疗的主要手段之一。对于绝经前患者,术后五年的他莫昔芬(TAM)一直是辅助内分泌治疗的金标准,然而,随着诸多旨在提高辅助内分泌治疗疗效研究的发表与更新,辅助内分泌治疗取得较多的进展。本文围绕绝经前乳腺癌阐述当前辅助内分泌治疗的情况,主要分析他莫昔芬(TAM)、芳香化酶抑制剂(AI)、药物性卵巢功能抑制的地位、它们之间联合的优势人群、药物使用的时限等,探讨绝经前早期乳腺癌辅助内分泌治疗的研究进展。

绝经前子宫内膜癌临床特征及诊断

目的:分析绝经前子宫内膜癌的临床特征及其诊断。方法:回顾性分析2005年5月-2015年5月间208例绝经前子宫内膜癌(EC)病例,以提高EC的临床诊断水平。结果:绝经前EC患者共208例,占同期EC的28.97%(208/718)。以45岁为界,分A、B两组,A组为38.46%(80/208);B组为61.54%(128/208)。以"阴道异常出血"主诉最多(51.4%),且多为Ⅰ期,而以"腹部包块"为主诉多为Ⅲ-Ⅳ期;诊断符合率为58.8%,其中,A组患者较B组患者确诊时间短,B超检出率高(72.5%vs 58.19%),Ⅰ期患者诊断符合率明显高于Ⅱ-Ⅳ期患者。结论:绝经前EC大多于围绝经期发病,临床症状不典型,诊断符合率较低,确诊时间随年龄增加而延长。

绝经前子宫切除与自然绝经妇女骨代谢生化指标的临床观察

目的:观察绝经前子宫切除和自然绝经妇女骨代谢生化指标的变化。方法:对比观察绝经前行子宫切除妇女38例、自然绝经后妇女40例及生育期健康妇女40例的骨代谢血尿生化指标的变化。结果:绝经前子宫切除组和自然绝经组的尿钙、尿脱氧吡啶、血硷性磷酸酶、骨钙素明显高于生育期健康组(P<0.05);自然绝经组的尿钙、尿脱氧吡啶、血骨钙素高于绝经前子宫切除组(P<0.05),血硷性磷酸酶在两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:绝经前子宫切除和自然绝经后妇女骨生成和骨吸收均增加,自然绝经妇女骨转换率进一步升高。

更年期抑郁症的临床特征分析及护理对策探讨

目的:分析围绝经期及绝经后妇女的抑郁症发病率,并根据更年期妇女抑郁症的发病特点,找出指导患者控制或消除抑郁症的对策。方法:随机将围绝经期妇女分为绝经组和绝经前组,采用Zung抑郁量表对724例患者进行评定和静脉血内分泌激素FSH、LH、E2测定。Zung量表总分为80分,评分≥40分可诊断为抑郁。结果:绝经前组更年期抑郁症的发病率为13.3%,绝经组抑郁症的发病率为5.6%。绝经前组更年期抑郁症的发病率明显高于绝经后(x2=12.797,P<0.05)。结论:更年期抑郁症患者常有某些躯体或精神因素作为诱因而发生精神、躯体疾病;患者常常伴有生理和心理改变。对更年期抑郁症患者需从生物、心理及社会诸方面进行综合护理。

绝经前乳腺癌组织雌激素受体与血清雌激素水平相关性的初步探讨

目的:探讨绝经前乳腺癌雌激素受体(ER)表达与患者血清雌激素(E2)水平的关系。方法:使用全自动免疫分析仪化学发光分析法检测84例乳腺癌患者血清性激素6项(LH、FSH、PRL、E2、P和T)水平,免疫组化EnVi-sion二步法检测乳腺癌ER表达状态。据ER检测的结果,分为阳性及阴性两组,对其对应的雌激素数值进行统计学分析。结果:在P临界值设定为0.05水平下,进行t检验,t=-1.59912,P=0.11364,两组样本中显现的E2水平差异无统计学意义。结论:绝经期前乳腺癌患者ER表达可能与雌激素水平无关。

绝经前后诸证临床各家脏腑论治

对于绝经前后诸证的治疗,临床医家多从脏腑论治,且多具有各自独特的论治特点。从脏腑论治,脏腑兼证论治,及兼夹病理产物三方面探讨临床各家治疗绝经前后诸证的经验,结果表明,临床医家多从肾虚论治绝经前后诸证,亦有一些医家强调在肾虚的基础上从肝论治、从脾论治、从心论治,以及从夹痰瘀等病理产物论治等,治疗多以补肾为主,兼以疏肝、健脾、养心、祛痰化瘀等法。

维生素D受体基因型与骨密度的关系

目的 了解维生素D受体 (VDR)基因的BsmI多态性在中国人群中的分布 ,并进一步探讨其与骨密度 (BMD)的关系。方法 应用聚合酶链反应 -限制性片断长度多态性解析 (PCR RFLPs)技术检测了 1 86例在长春地区生活 1 0年以上的无亲缘关系的绝经前健康汉族女性VDR基因型 ,用双能X线骨密度仪 (DEXA)测腰椎BMD ,同时考察它们之间的关系。结果 VDR基因型分布频率为Bb:2 3例 (1 2 .4% ) ,bb :1 63例(87.6 % ) ,BB型缺如。b等位基因在本组人群中分布高达 93 .8%。各型的BMD值分别为 :Bb型 (1 .1 87± 0 .0 88) g/cm2 ,bb型 (1 .1 53± 0 .1 1 2 ) g/cm2 ,两组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。结论 中国长春地区绝经前汉族女性的VDR基因的BsmI多态性与骨密度间无相关关系。

催乳素水平与女性绝经前后乳腺癌的相关性研究

目的研究血清催乳素(prolactin,PRL)水平与女性绝经前后发生乳腺癌的关系。方法选取在我院手术治疗的乳腺癌96例及乳腺良性增生144例,将其分为绝经前乳腺癌组(RⅠ组,48例)、绝经后乳腺癌组(RⅡ组,48例)、绝经前乳腺良性增生组(ZⅠ组,88例)与绝经后乳腺良性增生组(ZⅡ组,56例)。采用电化学发光法检测患者外周静脉血血清的催乳素水平。结果 RⅠ组催乳素水平明显增高,与RⅡ组及ZⅠ组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。RⅠ组催乳素阳性率均高于RⅡ组、ZⅠ组,且差异均有统计学意义(P<0.001);RⅡ组与ZⅡ组间阳性率比较差异无统计学意义(P=0.776)。PRL检测在女性绝经前乳腺癌和绝经后乳腺癌对比中,敏感性(P<0.001)及准确性(P=0.003)均高。结论催乳素在女性绝经前乳腺癌发生、发展中有一定意义,检测催乳素有助于乳腺癌的早期诊断与预防。

未绝经汉族女性维生素D受体基因与骨钙素

目的 了解维生素D受体 (VDR)基因的限制性内切酶 (BsmI)多态性在中国长春地区未绝经健康女性中的分布 ,并进一步探讨其与骨钙素 (BGP)的关系。方法 应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性解析 (PCR RFLPs)技术检测 186例在长春地区生活 10年以上无亲缘关系的未绝经健康汉族女性的VDR基因型 ,用放免法测血清BGP ,同时考察它们之间的关系。结果 VDR基因型分布频率为Bb基因型 2 3例 (12 4 % ) ,bb基因型 16 3例(87 6 % ) ,BB基因型缺如。b等位基因在本组人群中分布高达 93 8%。各型的BGP分别为 :Bb型 (4 5 95± 1 135 )μg/L ,bb型 (4 5 34± 1 2 6 7) μg/L。 2组基因型的BGP比较 ,无显著性差异 (P >0 0 5 )。 结论 长春地区未绝经汉族女性的VDR基因型与BGP之间无相关关系。

绝经前后妇女宫内节育器知识现状调查分析

目的:通过问卷调查了解深圳市南山区各社区绝经前后已放置宫内节育器的妇女避孕知识知晓情况,并促进其及时将宫内节育器取出,降低并发症的发生。方法:利用2009年3月～2010年8月南山区各社区妇女健康普查平台,将年龄在45～62岁已采取宫内节育器避孕的妇女1595人,以自填式问卷进行避孕知识、宫内节育器相关知识调查分析。结果:实际问卷调查人数为1595人,无效问卷9份,有效问卷1586份。调查结果显示:社区绝经前后已放置宫内节育器的妇女超过50%以上知晓常见的避孕方法种类,其中45.63%的调查对象知晓宫内节育器的副作用、并发症及其优点;23.45%调查对象知晓各类宫内节育器的使用年限,87.14%的调查对象对宫内节育器满意。结论:已放置宫内节育器45～62岁的妇女避孕知识知晓率偏低,应加强放置宫内节育器妇女的避孕知识咨询、指导工作,以提高围绝经期及绝经后妇女生活质量。

绝经前全子宫切除对保留卵巢的影响

目的:探讨绝经前全子宫切除对保留卵巢的影响情况,以利于临床采取治疗措施。方法:选择2010年1月～8月住院尚未闭经患者57例,均行全子宫切除,同时选择正常月经妇女50例作为对照组,对照组和患者组在术前和术后6个月进行血清中的促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、垂体泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)进行检测。结果:子宫切除组术前和术后与对照组比较PRL、E2比较相对偏低,FSH、LH水平是比对照组升高,子宫切除组术前与对照组促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、垂体泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)比较,差异无显著性,P>0.05,术后结果与术前和对照组比较差异有显著性,P<0.05。结论:绝经前妇女子宫切除后,卵巢功能减退,甚至衰竭,使绝经前妇女出现更年期症状。

清心滋肾汤加减治疗心肾不交型绝经前后诸证临床观察

目的:观察清心滋肾汤加减治疗绝经前后诸证心肾不交型的临床疗效。方法:选择符合绝经前后诸证心肾不交型诊断患者60例,随机分为两组各30例,治疗组予清心滋肾汤加减治疗,对照组予坤泰胶囊口服,两组疗程均为3个月。观察两组治疗前后kupermann评分、性激素水平变化及临床疗效。结果:清心滋肾汤加减可有效降低血清FSH水平,升高雌二醇水平,效果与对照组相当(P﹥0.05);可有效降低kupermann评分,且优于对照组(P<0.05);临床总有效率90.0%明显高于对照组66.7%(P<0.05)。结论:清心滋肾汤加减治疗绝经前后诸证心肾不交型临床疗效确切。