乙型肝炎病毒preC/C基因在杆状病毒载体系统中的表达

通过ＰＣＲ获得长度为６４０ｂｐ的ＨＢＶｐｒｅＣ／Ｃ基因片段，将其克隆入转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４，构建出重组质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４－ｐＣ／Ｃ。利用共转染的方法，构建出既能形成多角体又能表达ｐｒｅＣ／Ｃ基因的重组毒株ＴｎＮＰＶ－ｐＣ／Ｃ－ＯＣＣ＋。该重组毒株中ｐｒｅＣ／Ｃ基因受到串联的双启动子－合成启动子和含ＨｉｎｄⅢ接头的ＸＩＶ启动子的双重调控。对感染重组毒株的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ，Ｓｆ）细胞及其培养上清分别进行ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｇ固相放射免疫检测，发现受感染细胞及其培养上清均呈ＨＢｅＡｇ阳性，ＨＢｃＡｇ阴性；进一步做Ｗｅｓｔｅｒｎ分析表明，受感染细胞总蛋白中２６ｋＤ及培养上清１５ｋＤ处，呈现与ＨＢｅＡｇ单克隆抗体特异性反应条带。结果表明，克隆的乙肝病毒ｐｒｅＣ／Ｃ基因在杆状病毒载体系统中得到正确表达和加工，加工产物能够有效分泌。

重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhⅡ/CP/PreC基因标准参照序列的初步建立

目的:建立重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列,为HBV变异的研究奠定基础。方法:测定15例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列,应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型/血清型,并拟定标准参照序列。结果:9株基因型B/血清型;adw2、3株基因型B/M清型ayw1、3株基因型C/血清型adrq+;建立的重庆地区HBV流行株(基因型B/血清型adw2)PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列与华东华南地区同亚型的标准参照序列比较分别有6个、1个核苷酸差异。结论:初步建立了重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhIICP/PreC基因标准参照序列。

HBeAg、抗-HBe、HBV DNA共存与PreC/C基因变异分析

目的分析HBeAg、抗—HBe、HBV DNA共存的产生原因、临床特点。方法 Abbott法检测HBV血清标志物,HBV DNA定量测定,PreC/C基因序列测定。结果本模式76％系HBV慢性感染,24％急性感染,均有活动性肝损害;HBV DNA定量中位数4.57 copies/ml,HBeAg(P/N)32.31±87.81,抗-HBe(P/N)0.55±0.26;PreC基因83,C基因14、104、158、203、233多位点基因变异,并产生2个终止码变异。结论检测灵敏度的提高、宿主免疫反应激活、病毒基因变异是产生本模式的原因。

重庆地区C/adrq+亚型HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列的初步建立

目的 建立重庆地区基因型C/血清型adrq +HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列 ,为HBV变异的研究奠定基础。方法 测定 18例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列 ,应用同源性分析和对齐比较等方法确定HBV亚型 ,并拟定基因型C/血清型adrq +HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列。结果 9株基因型B/血清型adw2、6株基因型C/血清型adrq + ,3株基因型B/血清型ayw1;建立的重庆地区HBV基因型C/血清型adrq+HBV流行株PreS/S、EnhI I/CP/PreC标准参照序列与东北华南地区同亚型的标准参照序列比较分别有 13个、2个核苷酸差异 ,可引起 4个、1个氨基酸差异。结论 初步建立了重庆地区基因型C/血清型adrq +HBV流行株PreS/S。

经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲体内HBV EnhII/CP/PreC基因变异研究

目的:通过对经母婴传播获得HBV感染的子女及其母亲慢性携带者体内HBV EnhII/CP/PreC基因序列研究,了解来源相同的HBV毒株在不同程度病毒血症情况下EnhII/CP/PreC基因变异特点。方法:选择15对母子AsC,根据HBV病毒血症高低分为3组,每组5对母子,即Ⅰ组(母子均为高病毒血症)、Ⅱ组(子女为高病毒血症、母亲为低病毒血症)和Ⅲ组(子女为低病毒血症、母亲为高病毒血症)。同对母子HBV亚型相同,各组中有4/5对母子为B/adw2、1/5对母子为C/adrq+亚型。应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-EnhII/CP/PreC、双酶切鉴定,每个病人选2个酶切鉴定正确的克隆测序并分析。结果:高病毒血症组间或低病毒血症组间HBV EnhII/CP/PreC基因变异数目及位点均无明显差异,低病毒血症病人变异数目及位点明显高于高病毒血症。高病毒血症中16例B/adw2亚型的32个EnhII/CP共有6个变异位点;4例C/adrq+亚型的8个克隆中有4个变异位点,均无热点变异;PreC无变异。低病毒血症中8例B/adw2亚型病人的16个克隆共有26个变异位点,变异与年龄无关。结论经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲无症状携带者中,HBVEnhII/CP/PreC变异与病毒血症高低有关,低病毒血症病人变异明显高于高病毒血症。HBV的低复制状态是CP、EnhII及X蛋白等结构和功能改变综合影响的结果,与年龄无关。

HBV DNA PreC／C和BCP片段基因多态性研究

目的：研究乙肝患者HBV DNA核苷酸（nt）1735～1965片段突变及其临床意义。方法：PCR扩增HBV DNA nt1735～1965片段，将产物进行HBV DNA测序。结果：在68例乙肝患者中。nt1735～1965突变阳性率为48．5％，检出点突变总数168个，频率前10位的是nt1764（58．8％）、1762（44．1％）、1799（20．6％）、1766（14．7％）、1896（13．2％）、1754（8．8％）、1899（8．8％）、1768（7．4％）、1814（7．4％）及1913（7．4％）。同时，首次检出nt1907、1922、1923位点突变。

HBeAg抗-HBe HBV DNA共存与PreC/C基因变异分析

目的 分析HBeAg、抗-HBe、HBV DNA共存的产生原因、临床特点。方法用AbbOtt法检测HBV&清标志物,PreC/C基因序列测定,HBV DNA定量测定。结果本模式76％系HBV慢性感染,24％急性感染,均有活动性肝损害;HBVDNA定量中位数4.57E拷贝/ml,HBeAg(P/N)32.31±87.81,抗-HBe(P/N)0.55±0.26;PreC基因83,C基因14、104、158、203、233多位点基因变异,并产生两个终止码变异。结论检测灵敏度的提高、宿主免疫反庆激活、病毒基因变异是产生HBeAg、抗-HBe、HBV DNA共存的原因。

中国献血人群感染乙型肝炎病毒PreC/BCP区的新变异

目的了解中国献血人群感染乙型肝炎病毒(HBV)基因组的PreC/BCP区变异特征。方法从参加REDS-Ⅱ中国项目的 5家血液中心(或中心血站)收集的HBsAg阳性标本中选取245份,提取HBV DNA,根据HBVDNA PreC/BCP区保守序列设计引物,采用巢式PCR法扩增HBV DNA的PreC/BCP区,双向测序后用Clustal X软件将其序列与标准株序列比对,分析其变异特征,用SPSS 11.0统计软件分析其变异与献血者人口地理特征和血清学特征的关系。结果 245份献血者标本中有228份成功扩增了HBV PreC/BCP区,其中16例(7.02%)发现了1825～1 826位核苷酸之间的片段缺失或插入,突变标本中仅1例HBeAg阳性,其余均为阴性,突变标本的病毒载量明显高于未突变标本。结论在中国献血人群中发现感染HBV PreC/BCP区的1种新变异,它可能与抑制HBeAg的表达和促进病毒复制有关。

Prec催化剂在工业本体装置上的应用

文章研究无须预聚直接聚合生产而不发生破碎的球形催化剂,使用该催化剂在工业本体上进行了丙烯聚合研究,研究了丙烯聚合过程中催化剂催化聚合产生热量和压力变化情况。结果表明:催化剂的初始聚合活性释放比较平稳。通过电子显微镜观测和粒度分析,表明催化剂具有良好的球形形貌,破碎少,粒径分布窄。DSC分析表明,催化剂具有较低熔点和较高熔融焓的特性。该催化剂不经过预聚依然能够在聚合过程中保持颗粒的完整性,得到形貌良好的聚丙烯颗粒,性能达到应用要求,可以进行大规模催化剂生产应用。

HBVpreC/C区基因突变与原发性肝癌预后的关系

目的研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)preC/C区基因突变与原发性肝癌患者预后的关系。方法收集81例乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌(hepatitis B virus associated hepatocellular carcinoma,HBV-HCC)患者的癌组织并提取基因组DNA,对HBVpreC/C区基因进行扩增和测序,并根据NCBI数据库鉴定出其突变位点,运用Kaplan-Meier和Cox回归等方法分析HBV-HCC患者的临床资料、突变位点与其术后生存期之间的关系。结果门脉瘤栓、肿瘤分期和肿瘤大小是与HBV-HCC患者术后生存相关的独立危险因素。1915、2134、2176、2221和2260突变位点被确定为预测HBV-HCC患者生存相关的独立危险因子,1979和2245突变位点与HBV-HCC患者生存具有临界统计学差异。结论门脉瘤栓、肿瘤分期和肿瘤大小以及HBVpreC/C区基因的以上7个突变位点被确定为与肝癌患者术后预后相关的独立危险因素。

基于PREC-IDA-EPI技术的黄芩中黄酮成分研究

黄酮是黄芩的主要活性成分,具有抗肿瘤、抗炎和抗菌等药理作用。黄芩中黄酮成分数量多,通常成分含量较低,常规的质谱全扫描模式较难快速识别低含量的黄酮成分。母离子扫描-信息依赖-增强型子离子扫描（PREC-IDA-EPI）技术靶向提供母离子和碎片离子信息,降低了基质效应对低含量化合物检出的影响可快速准确地完成对化合物的识别。因此该研究在对黄芩研究相关文献进行了调研总结后,明析了黄芩中已发现的黄酮成分和可能存在的黄酮成分。然后基于母离子扫描-信息依赖-增强型子离子扫描（PREC-IDA-EPI）技术建立了针对黄芩中黄酮苷元和其黄酮氧苷的靶向UPLC-MS/MS分析方法,并将其应用于黄芩提取物中的黄酮成分分析。利用该方法共对黄芩中的97个黄酮成分进行了鉴定,包括29个苷元,68个氧苷。黄芩中鉴定的97个化合物为阐明黄芩药效物质基础提供了支持。基于PREC-IDA-EPI技术制定待测化合物的个体化检测方案可快速有效用于未知化合物结构鉴定。

HBV prec/c shRNA慢病毒真核表达载体的构建和鉴定

目的构建针对HBV prec/c区的shRNA真核表达载体psiHBV,感染HepG2 2.15细胞后观察其对HBeAg表达的抑制作用,为探讨防治HBV感染的新措施提供实验依据。方法针对HBV prec/c基因序列,构建shRNA表达载体psiHBV1、psiHBV2和无关序列psiHBVc。psiHBV与慢病毒辅助系统质粒共转染293T细胞组装慢病毒颗粒后,感染HepG2 2.15细胞,RT-PCR检测prec/c mRNA的转录,微粒子化学发光分析仪(MEIA)检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达。结果重组质粒双酶切和测序鉴定与预期结果相符合;组装慢病毒颗粒感染HepG2 2.15细胞后,prec/c mRNA转录降低;与对照组比较,HBeAg的表达水平也显著降低,病毒颗粒对HBeAg表达的抑制作用差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建针对HBVprec/c的慢病毒载体psiHBV1、siHBV2,慢病毒介导的RNA i能抑制HBV表达,为应用RNA干扰技术治疗乙型肝炎提供了实验依据。

PKPM(PREC)软件考虑温度内力的预应力混凝土结构实用计算方法

现有的PKPM(PREC)软件进行预应力混凝土结构计算时还不能考虑温度内力的影响,这对纵向较长的厂房结构是偏不安全的。提出了采用PKPM(PREC)软件结合PKPM(PMSAP)软件考虑温度内力进行预应力混凝土结构的计算方法。得到了温度影响下的预应力筋配筋量及相应的裂缝宽度及挠度。使得用PKPM(PREC)软件进行预应力混凝土结构计算考虑温度内力的影响成为可能。此外温度内力计算时,考虑了预应力梁及其他相关构件的刚度折减,使计算所得的温度内力较常规方法减少较多,更符合实际情况。

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与 HBV PreC 基因 nt1896 突变

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与ＨＢＶＰｒｅＣ基因ｎｔ１８９６突变严新民华映坤董虹高建梅张平张丽平云南省自然科学基金资助课题作者单位：６５００３２昆明，云南省人民医院大剂量干扰素治疗慢性乙型肝炎是有效的，一些报道认为，ＨＢＶＰｒｅＣ基因ｎｔ１８９６的突变...

四种再分析资料与长江中下游地区降水观测资料的对比研究

为了获得对中国区域降水刻画能力较好的再分析资料,以长江中下游地区为例,将PREC/L、CMAP、GPCP及NCEP2四种再分析降水资料与台站降水观测资料进行了多年和逐年平均的年、季、月降水量距平的时空相关分析和方差分析,比较了再分析资料对该区降水刻画能力的差异。首先对该区域的观测资料、CMAP、GPCP及NCEP2资料进行插值,使所有资料具有相同的空间分辨率,在此基础上比较再分析资料与观测资料年、季、月平均的降水变化特征。结果表明,四种再分析资料与观测资料的距平相关系数(均方根误差)由大到小(由小到大)的变化次序为:PREC/L→CMAP→GPCP→NCEP2,四种再分析资料均能较好地刻画出长江中下游地区降水的时空分布特征,尤以PREC/L资料对该区域降水变化的时空演变规律描述得最好。最后,利用PREC/L资料与观测资料对该区域降水的时空特征进行了相关分析、EOF分析和功率谱分析,结果显示夏季平均降水量具有2.3和3.1年的显著周期,EOF分析的前两个模态的时间变化分别具有2.3和2.8年的显著周期,这些显著周期都通过了95%的红噪声检验。

五氮齿稀土配合物对小鼠腹水肝癌细胞及其实体瘤的光动力效应

目的 研究五氮齿稀土配合物（ＰＲＥＣ）光敏剂对昆明小鼠腹水肝癌ＡＨ 细胞株在体外及体内的光动力效应，为评价其作为一类第二代新型光动力治疗试剂提供实验依据。方法 选用五氮齿羧钆（ＰＧｄＣＯＯＨ）、五氮齿钆（ＰＧｄ）、五氮齿铕（ＰＥｕ）和五氮齿钐（ＰＳｍ） 四种自行合成的ＰＲＥＣ光敏剂，用ＭＴＴ法测定它们对ＡＨ细胞的暗毒性和在不同浓度、以波长７６０ ｎｍ 红光（ 功率密度１４ ｍＷ／ｃｍ２） 在不同照光时间条件下，对体外培养的小鼠腹水肝癌ＡＨ细胞的光动力效应；用流式细胞技术测定了ＰＧｄ 光敏作用对ＡＨ 细胞群体时相分布的影响；观察了荷ＡＨ实体瘤（ 平均体积为２２０ ｍｍ３）小鼠尾静脉注射ＰＧｄＣＯＯＨ、ＰＥｕ 或ＰＳｍ（ 剂量均为１２ ｍｇ／ｋｇ） 后２４ ｈ，用７３０～８００ ｎｍ 红光（ 功率密度为１０ ｍＷ／ｃｍ２） 照光，每次１ ｈ，每天１ 次，连续３ 天后肿瘤体积的变化，比较肿瘤长到照光前１０ 倍体积时所需时间的差别，并计算每组小鼠的平均生存寿命。另外还观察了ＰＧｄＣＯＯＨ、ＰＥｕ 和ＰＳｍ 对健康小鼠皮肤的光毒性作用。结果 ＰＲＥＣ的浓度低于１－０ μｍｏｌ／Ｌ时，ＡＨ细胞存活率高达９３％ 以上；

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的 :研究乙型肝炎病毒前 - C区 G1896 A突变和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗的影响。方法 :采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前 - C、基本 C区启动子区进行检测。结果 :1前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、G176 4 A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;2 G1896 A突变在发生 YMDD变异和未发生 YMDD变异的患者间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,发生 YMDD变异的患者很少伴有 G1896 A突变率低 (9% ) ;3出现治疗中病毒学反弹的患者 YMDD变异增加 ,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响 ;在 G1896 A突变株 YMDD变异减少 ;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响 ;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。

乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析

用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、1764双突变 (AT、GA) ,占 73 9% ( 17/ 2 3 ) ;nt1896点突变 (GA) ,导致终止密码产生 ,占2 1 7% ( 5 / 2 3 ) ;nt185 8点突变 (TC) ,占 2 1 7% ,其中标本 417、42 6、43 0同时在nt 185 6发生点突变 (CT)。其它的突变有nt1799点突变 (CG) ,占 47 8% ( 11/ 2 3 ) ,为无义突变 ;有 6例在nt1846发生点突变AT ,4例nt180 2 - 180 4发生突变 (TTCCGT) ;4例nt175 2位点突变 (AG) ;标本 43 2在nt175 1插入TG导致移码突变 ,并在nt1774- 1874发生缺失突变。说明HBVBCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见 。

基于ARM和FPGA的三维精密定位控制系统

针对基于步进电机驱动三维定位机械载物工作台的定位精度、定位速度问题,该设计在低成本的步进电机驱动的机械载物工作台的基础上,建立以光栅尺为测量反馈元件的全闭环系统,解决了ARM和FPGA的响应速度瓶颈问题,并通过时间细分克服了采用步进电机进行微步驱动时易出现的"爬行"和步距角过大的现象,实现了大行程、高速度、高精度(±1μm)的三维定位,并将其应用到三坐标测量机上。该系统硬件结构简单、可靠性强;并且可以灵活的实现定制应用。