IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PARs表达的调节作用

目的:检测白细胞介素29(Interleukin-29,IL-29)对胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体(Protease activated receptor,PAR)-1,2,3,4表达的调节作用。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的IL-29、胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,在不同时间点收集激发细胞,用流式细胞术(FCM)及实时定量PCR检测P815肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29单独作用能够下调肥大细胞PAR-1蛋白及mRNA水平的表达,上调PAR-3、PAR-4 mRNA的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);以IL-29预处理肥大细胞后,IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PAR-2、PAR-3、PAR-4表达起促进作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-29能够调节胰蛋白酶引起的肥大细胞PARs表达,从而参与肥大细胞相关的炎症反应。

类胰蛋白酶通过上调PAR-2和Rho激酶抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞凋亡

目的研究类胰蛋白酶(tryptase)对MH7A类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞表面蛋白酶激活受体2(PAR-2)、Rho信号通路及细胞凋亡的影响。方法采用流式细胞术检测MH7A细胞表面受体PAR-2的表达;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用Pull-down及Western blot法检测MH7A细胞Rho激酶的表达变化。结果类胰蛋白酶能够上调MH7A细胞表面PAR-2的表达,并剂量依赖性的抑制Fas介导的MH7A细胞的凋亡;同时,PAR-2抑制剂FSLLRY-NH2能够显著降低类胰蛋白酶对MH7A细胞的抗凋亡作用,其作用与活化Rho激酶的表达增加有关。结论类胰蛋白酶通过上调PAR-2和活化Rho激酶发挥很强的抗MH7A细胞凋亡的作用。

u-PA、u-PAR和PAI-1在睾酮联合hCG致多囊卵巢大鼠中的表达与意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、其受体(u-PAR)和其抑制剂-1(PAI-1)在PCOS发病机制中的作用。方法:采用睾酮或孕酮联合hCG刺激建立PCOS大鼠模型;免疫组化S-P法测定u-PA、u-PAR和PAI-1在模型动物卵巢组织中的分布与表达。结果:u-PA、u-PAR在PCOS组颗粒细胞和泡膜细胞中的染色比正常对照组明显减弱(P<0.05),PAI-1在泡膜细胞及间质细胞中的染色均比正常对照组明显增强(P<0.05)。结论:u-PA、u-PAR及PAI-1的表达异常可能参与PCOS的发病。

犬脑栓塞血浆u-PA和u-PAR变化的实验研究

目的观察犬脑栓塞前后血浆尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,u-PAR)的变化。方法自体动脉血凝固制备栓子,使用介入方法建立犬脑栓塞模型。观察栓塞前和栓塞后2h、3h血浆u-PA和u-PAR的变化。结果栓塞前和栓塞后2h、3h血浆u-PA和u-PAR水平差异无统计学意义,P>0.05。结论犬脑栓塞前和栓塞后3小时内血浆u-PA和u-PAR变化不明显。

蛋白酶激活受体2介导肥大细胞IL-4分泌

目的:探讨蛋白酶激活受体2(Proteinase activated receptor-2,PAR-2)的激活对肥大细胞P815介质分泌的影响。方法:肥大细胞培养后用PAR-2激动肽,胰蛋白酶、类胰蛋白酶、弹性蛋白酶结合PAR-2拮抗肽激发肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测组胺、IL-4和IL-6的水平。结果:PAR-2激动肽、胰蛋白酶、类胰蛋白酶以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4。PAR-2拮抗肽能阻断胰蛋白酶和类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P<0.05)。胰蛋白酶、类胰蛋白酶以及PAR-2激动肽对肥大细胞IL-6的分泌和组胺释放无明显影响。弹性蛋白酶对肥大细胞IL-4、IL-6分泌及组胺释放功能无影响。结论:PAR-2的激活介导肥大细胞P815分泌IL-4;胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌的发现为肥大细胞激活的自我放大机制提供了新的理论依据。

利用RNAi抑制PARs防治脑缺血性损伤的实验研究

目的:利用RNA干扰技术,通过重组腺病毒导入,抑制脑组织中PARs基因的表达,观察神经功能缺陷评分、缺血脑组织梗死体积的变化,为缺血性脑血管疾病的基因治疗提供实验依据。方法:雄性Wistar大鼠随机分组,以重组腺病毒介导的无序PARs基因shRNA片段、生理盐水进行干预,干预3天后以线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉永久闭塞模型,各组分别于线栓后24h、72h进行神经功能缺陷评分并断头取脑,应用4%TTC染色测脑梗死体积。结果:1.缺血后24h、72h同一时间点:①实验组分别与对照组、生理盐水组对比,神经功能缺陷评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减小(P<0.05);②对照组与生理盐水组对比,神经功能缺陷评分、脑梗死体积无明显差异(P>0.05)。2.各组组内缺血后24h、72h对比,神经功能缺陷评分、脑梗死体积各组均有明显差异(P<0.05)。结论:重组腺病毒介导的RNAi能有效抑制脑组织中PARs基因的表达,缩小脑梗死体积,改善神经功能缺陷评分。

癌症患者尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体检测的临床意义

目的 探讨癌症患者血浆中尿激酶型纤溶酶原激活物 (u -PA )及其受体 (u -PAR )检测的临床意义。方法 采用ELISA法测定 85例癌症患者血浆中u -PA和u -PAR水平 ,并与正常人进行比较。结果 肝癌、肺癌、大肠癌、胰腺癌和胃癌患者的血浆u -PA和u -PAR水平均同步升高 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;胃癌和肺癌患者u -PA和u -PAR水平在术后出现明显回落 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,复发时又升高 ;胰腺癌有转移者明显高于无转移者 (P <0 .0 5 ) ;鼻咽癌仅有u -PAR水平高于对照组 (P <0 .0 1)。结论 癌症患者血浆u -PA和u -PAR水平显著异常 。

蛋白酶激活受体-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察蛋白酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1,PAR-1)在胃癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:用免疫组化方法检测65例胃癌及其癌旁胃组织中PAR-1的表达情况。结果:PAR-1的表达在胃癌组织中高于癌旁胃组织,随癌组织浸润肌壁程度和淋巴结转移程度的提升而增高,均有明显的统计学意义(P<0.01);PAR-1的表达虽随着癌分化程度降低而增高,但无统计学差异(P>0.05)。结论:PAR-1的表达与胃癌发展及临床病理分期有关,可作为胃癌临床预后标记之一。

GM-CSF对肥大细胞P815蛋白酶激活受体表达的影响

目的蛋白酶激活受体(PARs),为G蛋白偶联受体(GPCR)家族中的新成员,参与过敏反应的发生,粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)具有调节免疫应答的功能,然而GM-CSF对肥大细胞PARs表达的影响还不甚清楚。因此本研究探讨GM-CSF对肥大细胞P815 PARs表达的影响情况。方法肥大细胞P815激发后,收集各时间点的细胞。细胞处理后采用实时定量PCR和流式细胞术的方法在信使核糖核酸(mRNA)和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4表达情况。结果GM-CSF上调PAR-2蛋白和mRNA在肥大细胞P815上的表达;GM-CSF上调PAR-1和PAR-3 mRNA在肥大细胞P815的表达;GM-CSF抗体的应用可以阻断GM-CSF对PARs蛋白表达的调节作用。结论GM-CSF能够调节肥大细胞PARs表达,二者可能在过敏反应和炎症中存在更加复杂的相互作用。

蛋白酶激活受体-1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察并探讨蛋白酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1,PAR-1)在结肠癌组织中表达的临床意义。方法:用免疫组织化学方法检测65例结肠癌及其癌旁肠组织中PAR-1的表达情况。结果:PAR-1的表达在结肠癌组织中高于癌旁肠组织,随肌壁癌组织浸润度和淋巴结转移程度的提升而增高,均有显著差异(P<0.01);PAR-1的表达虽随着癌分化程度降低而增高,但无显著差异(P>0.05)。结论:PAR-1的表达与结肠癌发展及临床病理分期有关,可作为结肠癌临床预后指标之一。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂降低心脏骤停后综合征兔血清炎性细胞因子的水平

目的：观察蛋白酶激活受体-1（PAR-1）拮抗剂对心脏骤停后综合征（PCAS）兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8的影响。方法大耳白兔30只，随机分为假手术组、PCAS组、PAR-1拮抗剂组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型。 PAR-1拮抗剂组在自主循环恢复后15 min给予PAR-1拮抗剂SCH79797（25μg／kg）静脉滴注，每天一次，其余各组给予等量生理盐水。48 h取股静脉血测定血清 ALT、cTnT、Cys -C 及 NSE，以监测器官功能的变化。采用ELISA测定血清TNF-α、MCP-1及IL-8水平。结果 PAR-1拮抗剂SCH79797可明显减轻心、脑、肝、肾功能障碍。 PCAS组血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显高于假手术组（ P＜0．01）。 PAR-1拮抗剂组TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显低于PCAS模型组（ P＜0．05）。结论 PAR-1拮抗剂SCH79797可降低PCAS兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平，改善心肺复苏后多器官功能障碍。

蛋白酶激活受体拮抗剂在抗血小板领域的研究进展

蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)是G蛋白偶联受体的家族成员之一。研究发现蛋白酶激活受体可经凝血酶激活诱导血小板的聚集,参与血栓形成过程。人类血小板主要表达蛋白酶激活受体-1和蛋白酶激活受体-4两种受体,因此蛋白酶激活受体-1和蛋白酶激活受体-4可作为抗血小板药物的新靶点。本文介绍了凝血酶诱导蛋白酶激活受体-1、蛋白酶激活受体-4活化的作用机制,并对近年来蛋白酶激活受体-1和蛋白酶激活受体-4小分子拮抗剂的结构、药理活性的研究进展进行总结。

蛋白酶激活受体在鼠肥大细胞的表达

目的检测蛋白酶激活受体(PARs)在鼠肥大细胞的表达。方法用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、流式细胞术及免疫荧光细胞染色分析方法,在mRNA水平和蛋白质水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在鼠肥大细胞P815和MC/9的表达。结果肥大细胞P815和MC/9在mRNA水平和蛋白质水平均表达PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。结论肥大细胞表达PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4,为进一步研究肥大细胞PARs的功能奠定了基础。

IL-29调节的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体表达分析

目的:检测白细胞介素(interleukin,IL)-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体(protease activated recep-tor,PAR)-1,2,3,4表达。方法:肥大细胞P815培养后以不同浓度的IL-29激发肥大细胞,在不同时间点收集细胞,给予透膜和非透膜处理后用流式细胞术检测肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29激发肥大细胞2、6和16 h后肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达与相应对照相比差异有统计学意义,而IL-29调节的膜表面PAR-1表达与胞浆内PAR-1表达相比,差异无统计学意义。IL-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达与相应对照相比,差异无统计学意义;而IL-29激发2 h肥大细胞膜表面PAR-2表达与胞浆内PAR-2表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发6 h肥大细胞膜表面PAR-3表达与胞浆内PAR-3表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发2、6和16h后肥大细胞膜表面PAR-4表达与胞浆内PAR-4表达相比,差异有统计学意义。结论:IL-29可以下调P815肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达,且IL-29引起的膜表面和胞浆内PAR-1表达无差异;尽管检测到PAR-2,3,4在膜表面和胞浆内的表达情况不同,但IL-29对膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达的调节作用不明显;流式细胞术检测的膜表面和胞浆内PARs表达结果均可反应IL-29调节的P815肥大细胞PARs表达情况。

人脐静脉内皮细胞表达蛋白酶激活受体

目的研究蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)在人脐静脉内皮细胞(Human umbil-ical vein endothelial cells,HUVECs)上的组成型表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术,检测PARs的mRNA和蛋白质表达。结果未经任何激活剂处理的HUVECs表达PAR1、PAR2和PAR3mRNA。PAR1、PAR2和PAR3的阳性细胞率分别为43.3%、49.2%和56.7%,其平均荧光强度分别为42.1、22.5和24.3。结论 HUVECs组成型表达PAR1、PAR2和PAR3,以为PARs的生理和病理生理功能研究提供依据。

大承气汤对PCAS兔心肺组织蛋白酶激活受体-1表达的影响

目的探讨大承气汤对心脏骤停后综合征（PCAS）兔心肺组织蛋白酶激活受体-1（PAR-1）表达的影响。方法将20只兔用来制备PCAS模型，另外10只作为正常对照组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS，窒息性心脏骤停采用气管夹闭诱导。18只复苏成功兔随机分为PCAS组和大承气汤组。大承气汤组在自主循环恢复（ROSC）后15min给予大承气汤16g／kg灌胃；其他两组同时间点灌胃等量生理盐水。各组48h后处死动物，取心肺组织，采用相对定量实时逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定PAR-1mRNA表达。结果与正常对照组比较，PCAS组兔心肺组织中PAR-1mRNA表达较正常对照组显著升高（均P〈0．01）。大承气汤干预后心肺组织中PAR-1mRNA表达均较PCAS模型组显著下降（P〈0．01或P〈0．001）。结论大承气汤对PCAS兔心肺组织PAR-1表达有抑制作用，这可能是大承气汤治疗多器官功能障碍综合征（MODS）的机制之一。

肝素对肾炎患者单个核细胞及其尿激酶型纤溶酶原激活剂受体的影响

目的 探讨肝素对肾炎患者尿液单个核细胞分布密度及其尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达的影响。方法 采用流式细胞术方法测定 87例肾炎患者肝素治疗前后尿液单个核细胞分布密度及其该类受体表达水平。结果 肝素治疗前肾炎患者尿液中CD3+、CD14 +和CD16+细胞分布密度显著高于正常组 (P <0 .0 1) ;肝素治疗后尿液CD3+、CD14 +和CD16+细胞分布密度显著减小 ,其中CD14 +和CD16+细胞下降比例较大 ;肝素治疗后尿液单个核细胞该类受体表达水平显著低于治疗前 (P <0 .0 1) ,降至治疗前的 1/4～ 1/3 ;尿液单个核细胞分布密度及其该类受体表达水平与 2 4h尿蛋白定量显著性相关。结论 肝素可显著抑制单个核细胞的免疫活性及其该类受体的表达 。

蛋白酶活化受体1在不同肿瘤中的研究进展

人蛋白酶活化受体1(PAR-1)是蛋白酶活化受体家族的成员之一.它活化方式特殊,生物学功能广泛.已经证实PAR-1在黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、鼻咽癌、前列腺癌癌旁间质、肝癌、结肠癌等组织中表达上调,在肿瘤细胞的增殖和转移过程中发挥重要作用,可作为患者临床病理分期及预后的标志物.

粉尘螨变应原（Der f I）对DC2．4细胞的作用及其诱发哮喘机制的初步研究

分别通过对DC2．4细胞白介素-12（IL-12）和IL-10的ELISA检测，蛋白酶激活受体（PAR-2）的基因表达和丝裂原活化蛋白酶（MAPK）p44／42的磷酸化来观察Der f I对DC2．4细胞的作用及其诱发哮喘机制的初步研究。Der f I作用于DC2．4细胞的结果显示，Der f I可促进DC2．4细胞IL-10的分泌（P〈0．01），抑制IL-12的分泌（P〈0．05），但信号通路抑制剂U0126可以逆转细胞因子的分泌模式；促进磷酸化p44／42MAPK的表达（尤其是促进p42的磷酸化）；抑制PAR．2受体的表达并呈时间依赖性。Th1／Th2失衡及Th2细胞功能亢进是过敏性哮喘的免疫基础，3312型免疫应答可能是哮喘发生的机制之一。本研究中由于Der f I作用于DC2．4细胞后抑制初始T细胞向Th1细胞分化而促使其向Th2细胞分化从而促使Th2型免疫应答，进而诱发过敏性哮喘，信号通路p44142MAPK的磷酸化加强和PAR-2受体表达的抑制也在诱发过敏性哮喘过程中起到促进作用。

CB1R拮抗剂对MPTP诱导PD小鼠运动行为影响

目的研究大麻素受体1(CB1R)拮抗剂NESS 0327对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠运动行为的影响。方法将24只8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、MPTP组和MPTP+NESS 0327组。对照组和MPTP组小鼠均双侧黑质致密部(SNpc)微量注射二甲基亚砜(DMSO)和Tween-80混合溶液,分别腹腔注射生理盐水和MPTP;MPTP+NESS 0327组小鼠则双侧SNpc微量注射NESS 0327,腹腔注射MPTP。小鼠连续5 d给药后进行旷场实验和爬杆实验检测小鼠运动能力的改变。结果旷场实验结果显示,3组小鼠总移动距离比较差异具有统计学意义(F=8.279,P<0.01),其中MPTP组小鼠总移动距离较对照组小鼠显著减少(q=5.705,P<0.01),MPTP+NESS 0327组小鼠总移动距离较MPTP组小鼠显著增加(q=3.504,P<0.05)。爬杆实验结果显示,3组小鼠下杆时间比较差异具有统计学意义(F=12.110,P<0.01),其中MPTP组小鼠下杆时间较对照组小鼠显著增加(q=6.790,P<0.01),MPTP+NESS 0327组小鼠的下杆时间较MPTP组小鼠显著减少(q=4.713,P<0.01)。结论SNpc给予CB1R拮抗剂NESS 0327可改善MPTP诱导的PD小鼠运动功能障碍。