PRM1基因SNP位点-190C-＞A多态性对精子畸形率的影响

目的:探讨鱼精蛋白基因1(protamine 1,PRM1)单核苷酸多态性(SNP)与畸形精子症的关系。方法:收集畸形精子症不育患者(病例组,n=157)和精子形态正常男性(对照组,n=37)精液样本,进行形态学分析并提取基因组DNA,应用Sequenom MassARRAY SNP分型技术对PRM1基因-190C->A SNP位点(rs2301365)进行基因分型,比较病例组与对照组基因型的分布差异及病例组不同基因型间精子形态参数的差异。结果:病例组中,基因型CC、CA、AA的分布频率及个体数分别为38.9%(61)、44.6%(70)、16.6%(26),对照组为45.9%(17)、51.4%(19)、2.7%(1),病例组AA基因型分布频率显著高于对照组(P<0.05)。病例组等位基因C、A的分布频率分别为57.6%、42.4%,对照组为71.6%、28.4%,病例组等位基因A的频率与对照组差异无显著性(P>0.05)。病例组基因型CC与CA、AA、CA+AA在精子形态学参数的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PRM1基因SNP位点-190C->A可能与中国汉族畸形精子症男性不育存在相关,该位点可能导致精子形态异常,但所致形态异常并无部位上的特异性。

PRM1,一个新的候选结肠癌相关CT抗原基因的识别及其在结肠癌组织中的表达分析

目的筛选新的肿瘤/睾丸抗原相关基因,为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。方法利用文献报道的大规模平行信号测序技术获得的人类33种正常组织的基因表达谱,经生物信息学分析筛选出睾丸富集表达基因。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,在15种人类正常组织中对候选基因进行验证,最后利用荧光定量PCR技术对睾丸特异基因在结肠癌组织和癌旁组织中的表达差异进行分析。结果在15种人类正常组织中,PRM2,PRM1,TNP1,AKAP4,TCP11为睾丸特异性表达,在其它组织中均无表达。其中PRM1基因在50%(6/12)的结肠癌组织中有明显的上调(>2倍)。其它基因在结肠癌中表达与癌旁组织比较无统计学差异。结论PRM1可能是一个新的CT基因,结果显示PRM1基因可能会在结肠癌的分子诊断或者免疫治疗中起到重要作用。

牦牛和雄性不育犏牛睾丸中Prm1和Prm2基因表达

为探索牦牛(Bos grunniens)杂交后代(犏牛)雄性不育的分子机制,比较了牦牛及其杂交后代睾丸中两种精蛋白(Prm)基因的表达。从成年牦牛(n=13)和犏牛(n=7)睾丸中提取总RNA,定量PCR分析表明,犏牛睾丸中Prm1和Prm2基因的m RNA水平均极显著低于牦牛(P<0.01),这将影响正常精子发生的过程,推测可能与犏牛雄性不育有一定关系。

关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达

【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GC1细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达。【结论】得到了关中奶山羊Prm1基因的表达规律及完整的CDS序列。

PRM1及ZNRD1表达在结肠癌生长侵袭转移中的作用研究

目的 :探讨鱼精蛋白(PRM1)及锌带蛋白(ZNRD1)在结肠癌中的表达及在结肠癌生长侵袭转移中的作用。方法 :RT-PCR检测PRM1及ZNRD1在结肠癌患者和正常人中的表达;ZNRD1过表达细胞系构建及慢病毒包装PRM1-RNAi;MTT法检测细胞活力,transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,western blot检测Bax,Bcl-2,基质金属蛋白酶(MMP 2),MMP 9的表达。结果 :与正常组比较,结肠癌患者中PRM1表达量过高,ZNRD1表达量较低,差异具有显著性。与正常组比较,PRM1表达下降及ZNRD1表达上升能降低结肠癌细胞RKO活力和迁移侵袭能力,并下调Bcl-2,MMP 2,及MMP 9表达,上调Bax表达。结论 :PRM1及ZNRD1在结肠癌表达异常,并参与结肠癌细胞的生长侵袭转移。

酿酒酵母细胞融合机制及交配信号通路的合成生物学应用

细胞融合是大多数真核生物发育中的一个基本生物过程。酿酒酵母作为真核生物基因组合成和转移的经典模式生物,其细胞融合机制不清楚,因此限制了它的合成生物学应用。在酿酒酵母的融合过程中,细胞对信息素做出反应,触发促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)级联反应以启动交配,随后细胞发生极化、细胞壁重塑、膜融合和核配。其中,研究可能的“融合酶”——受信息素调控的多跨膜蛋白(Prm1)为推动细胞融合可控性提供方向。酵母交配信号通路的合成生物学应用基于生物元件、生物装置与生物系统以及多细胞互作3个层次,本文分析了信息素诱导型启动子、G蛋白偶联受体、支架蛋白、转录因子、双稳态开关、调谐器、底盘细胞等在生物传感器及代谢工程等领域的应用。开发理性设计的模块化线路和优化交配途径来精确调控酵母交配的生理事件,对于细胞融合的人工可操纵性发展具有重要意义。

人鱼精蛋白1多态性与汉族男性生育力的相关性分析

目的研究人类鱼精蛋白1(PRM1)C321A多态性与汉族男性生育力的相关性。方法选取174例原发不育男性患者为观察组,172例生育男性为对照组,分别分析两组常规精液参数,采用限制性酶切及DNA测序技术对PRM1 C321A位点进行基因分型。结果不育患者PRM1 C321A位点AA基因型频率(8.05%)显著高于生育男性(2.33%)(P<0.01),分析显示AA基因型与男性不育的遗传易感性明显相关[OR=4.24(95%CI:1.33,13.51)]。AA基因型可使精子前向运动能力及正常形态比例等参数明显下降,可能是其导致男性不育的主要因素。结论 PRM1 C321A多态性改变与汉族男性生育力相关。

绵羊精子RNA提取方案的优化

为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子RNA回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子RNA,检测RNA的浓度、纯度和完整性,将RNA反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的RNA是否受体细胞RNA和基因组污染。结果表明:用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低。Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的RNA较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子RNA较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低。两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子RNA提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子RNA均能检测到PRM1基因,未检测出CDH1基因。说明Percoll密度梯度离心法纯化精子结合TRIzol(65℃)+试剂盒法提取精子RNA效果较好,无体细胞污染,且纯度较高。

鱼精蛋白1在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义

目的比较鱼精蛋白1(Protamines 1,PRM1)在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR法检测53例结肠腺癌及正常结肠组织中PRM1基因mRNA水平,并分析PRM1 mRNA检测对于结肠腺癌诊断的敏感性;SP免疫组化染色法检测组织中PRM1蛋白的表达水平。结果结肠腺癌组织中PRM1基因mRNA水平明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P<0.05),总体阳性率为96.23%(51/53);结肠腺癌组织高表达PRM1,且能够分泌入腺腔。结论结肠腺癌细胞在基因及蛋白水平均高表达PRM1,PRM1 mRNA检测对结肠腺癌的诊断具有参考价值。