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二氢杨梅素通过Prohibitin 2增强血管内皮细胞线粒体自噬 被引量:1
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作者 胡琴 申卉 +1 位作者 张婷 李亚斐 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期356-362,共7页
目的观察二氢杨梅素对血管内皮细胞线粒体自噬的影响,并探讨Prohibitin 2在其中的作用。方法用不同浓度(0、0.1、1、10、100μmol/L)二氢杨梅素处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)12 h后,流式... 目的观察二氢杨梅素对血管内皮细胞线粒体自噬的影响,并探讨Prohibitin 2在其中的作用。方法用不同浓度(0、0.1、1、10、100μmol/L)二氢杨梅素处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)12 h后,流式细胞术和荧光显微镜观测MitoTracker;Deep Red (MTDR)荧光强度,RT-PCR和Western blot分别检测Prohibitin 2 mRNA及其蛋白表达。用氯喹预处理HUVECs 1 h后,再用不同浓度二氢杨梅素处理12 h或10μmol/L羰基氰化物间氯苯腙(线粒体自噬激动剂)处理6 h,流式细胞术检测线粒体自噬。另用control siRNA或Prohibitin 2 siRNA转染HUVECs后,再用二氢杨梅素处理12 h,流式细胞术检测细胞线粒体自噬。结果与无二氢杨梅素(0μmol/L)处理相比,≥0.1μmol/L二氢杨梅素处理显著降低血管内皮细胞MTDR荧光强度;同时,二氢杨梅素处理可明显增加Prohibitin 2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);当以氯喹预处理抑制溶酶体功能后,与无二氢杨梅素处理相比,≥10μmol/L二氢杨梅素处理可以显著增加血管内皮细胞线粒体自噬,与羰基氰化物间氯苯腙效应相一致(P<0.05)。与control siRNA处理组相比,以siRNA转染沉默Prohibitin 2后二氢杨梅素对线粒体自噬的诱导作用被明显抑制(P<0.05)。结论二氢杨梅素可通过调控Prohibitin 2增强血管内皮细胞线粒体自噬。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 二氢杨梅素 prohibitin 2 线粒体自噬
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Prohibitin 2调节肌细胞增强因子2转录因子活性的分子机制 被引量:1
2
作者 孙陆果 马克威 +2 位作者 黄红兰 卫红飞 王丽颖 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期774-778,共5页
目的:探讨Prohibitin 2(PHB2)抑制肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor,MEF2)转录因子活性的分子机制,为进一步研究PHB2在其他MEF2阳性表达细胞中的调控作用提供依据。方法:利用脂质体转染方法将表达PHB2和MEF2的真核表达载体与荧... 目的:探讨Prohibitin 2(PHB2)抑制肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor,MEF2)转录因子活性的分子机制,为进一步研究PHB2在其他MEF2阳性表达细胞中的调控作用提供依据。方法:利用脂质体转染方法将表达PHB2和MEF2的真核表达载体与荧光素酶报告基因载体共转染入体外培养的Hela细胞中,转染36 h后,裂解细胞获取细胞裂解上清,Western blotting检测上清中重组蛋白的表达及利用发光检测仪检测上清中荧光素酶的生物发光活性。结果:转染PHB2细胞组与未转染PHB2细胞组中,MEF2调控的荧光素酶生物发光活性比分别为0.28±0.02和1.00±0.02,两组比较差异具有显著性(P<0.01),且降低程度与PHB2的表达量呈正比;在未转染PHB2细胞组,MEF2转录激活区调控的荧光素酶生物发光活性比为9.53±1.06,而在转染PHB2细胞组其为2.24±0.21,两组比较差异具有显著性(P<0.01);组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂TSA处理组与未处理组,共转染PHB2细胞中MEF2调控的荧光素酶生物发光活性比分别为0.98±0.12和0.38±0.04,两组比较差异具有显著性(P<0.01),提示TSA解除了PHB2对MEF2的抑制作用。结论:PHB2抑制MEF2转录活性的分子机制是通过作用于MEF2的转录激活区由HDAC介导完成的,该抑制作用非依赖于成肌调节因子MyoD,且与MEF2的DNA结合功能无关。 展开更多
关键词 prohibitin2 肌细胞增强因子2 转录抑制 组蛋白去乙酰化酶
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日本血吸虫PROHIBITIN 2克隆和表达及免疫保护效果评估
3
作者 杨珊珊 杨静云 +7 位作者 张旻 张倩 何静 黄明月 窦记晨 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期83-90,共8页
为研究日本血吸虫PROHIBITIN的生物特性,利用PCR和3’RACE扩增到日本血吸虫抗增殖蛋白2(Schistosoma japonicum Prohibitin 2,Sj PHB2)基因,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-SjPHB2,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,用Western blot检测其免... 为研究日本血吸虫PROHIBITIN的生物特性,利用PCR和3’RACE扩增到日本血吸虫抗增殖蛋白2(Schistosoma japonicum Prohibitin 2,Sj PHB2)基因,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-SjPHB2,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,用Western blot检测其免疫原性。将重组蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,ELISA检测其特异性抗体水平。结果显示:日本血吸虫Sj PHB2基因编码299个氨基酸,含PHB结构域;含GST标签的r Sj PHB2融合蛋白的分子量为59 kDa;r Sj PHB2能被GST单克隆抗体抗和免疫血清识别,表明其具有较好的免疫原性;将r Sj PHB2结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠可诱导较高水平的特异性IgG抗体,但未能诱导显著的减虫率和减卵率。本文结果为开展日本血吸虫Sj PHB2的表达特性和生物学功能提供了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抗增殖蛋白2 克隆 表达
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抑制抗增殖蛋白2增强非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼敏感性 被引量:1
4
作者 张婧 杨自更 +4 位作者 蔡文琴 曹维维 韦红梅 薛茜茜 吴宾 《基础医学与临床》 2024年第3期325-332,共8页
目的探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼(Erl)敏感性中的作用及其机制。方法在A549细胞中转染PHB2小干扰RNA(siPHB2),观察抑制PHB2表达对Erl诱导的细胞增殖和凋亡的影响。利用MitoTracker染色和感染绿色荧光蛋白... 目的探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼(Erl)敏感性中的作用及其机制。方法在A549细胞中转染PHB2小干扰RNA(siPHB2),观察抑制PHB2表达对Erl诱导的细胞增殖和凋亡的影响。利用MitoTracker染色和感染绿色荧光蛋白-微管相关蛋白(GFP-LC3)观察微管相关蛋白(LC3)和线粒体共定位,EdU实验检测细胞增殖,平板集落检测细胞集落形成能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,Western blot检测PHB2和LC3Ⅱ蛋白表达水平,用相应试剂盒检测线粒体膜电位、细胞色素c含量和呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性。结果与siPHB2组和siCtrl+Erl组相比,siPHB2+Erl组EdU阳性的细胞数显著减少(P<0.05),集落形成数显著减少(P<0.05),TUNEL阳性的细胞数显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),线粒体呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性均显著降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05),而细胞质内细胞色素c的增加(P<0.05)。结论抑制PHB2改善A549细胞对Erl的敏感性,其机制可能与抑制PHB2介导的线粒体自噬有关。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 厄洛替尼 非小细胞肺癌 增殖 凋亡
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耐力训练大鼠抗动脉粥样硬化线粒体自噬通路中抗增殖蛋白2的作用
5
作者 宋明箫 陈君顺子 +2 位作者 王宁伟 蔡欢 冯红 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第11期2294-2300,共7页
背景:运动可降低血脂,减缓动脉粥样硬化发展。动脉粥样硬化起始于线粒体功能障碍,而抗增殖蛋白2蛋白受耐力训练调控,参与线粒体自噬。目的:验证耐力训练干预动脉粥样硬化中抗增殖蛋白2蛋白在线粒体自噬通路中的作用。方法:将40只Wistar... 背景:运动可降低血脂,减缓动脉粥样硬化发展。动脉粥样硬化起始于线粒体功能障碍,而抗增殖蛋白2蛋白受耐力训练调控,参与线粒体自噬。目的:验证耐力训练干预动脉粥样硬化中抗增殖蛋白2蛋白在线粒体自噬通路中的作用。方法:将40只Wistar大鼠随机分为对照组、运动组、动脉粥样硬化组和动脉粥样硬化运动组,每组10只,后2组大鼠高脂饮食(9周)联合维生素D注射(第1,3,6周)构建大鼠动脉粥样硬化模型,同时2个运动组大鼠进行跑台递增训练干预9周。干预结束后进行血脂和病理检测观察造模及干预效果;酶标法和Western blot检测线粒体膜电位和自噬相关蛋白表达;免疫荧光观察主动脉中线粒体自噬蛋白的共定位情况。结果与结论:(1)血脂和病理切片显示,与动脉粥样硬化组相比,动脉粥样硬化运动组大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇水平和主动脉脂质沉积面积显著降低(P<0.001)。(2)线粒体膜电位显示,动脉粥样硬化运动组大鼠主动脉线粒体膜电位的显著降低得到逆转(P<0.01)。(3)Western blot显示,与对照组相比,动脉粥样硬化组大鼠线粒体抗增殖蛋白2、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1和Parkin蛋白表达显著升高(P<0.05),PARL和PGAM5蛋白表达降低(P<0.05);与动脉粥样硬化组相比,动脉粥样硬化运动组大鼠线粒体PINK1和Parkin蛋白表达显著降低(P<0.05),抗增殖蛋白2、LC3Ⅱ/Ⅰ、PARL和PGAM5蛋白表达显著升高(P<0.05)。(4)免疫荧光结果显示,动脉粥样硬化组较对照组LC3和PINK1与TOMM20共定位显著增加(P<0.05),动脉粥样硬化运动组较动脉粥样硬化组LC3与TOMM20共定位显著增加(P<0.05);动脉粥样硬化组较对照组LC3和PARL与抗增殖蛋白2共定位显著增加(P<0.01),动脉粥样硬化运动组较动脉粥样硬化组LC3与抗增殖蛋白2共定位显著增加(P<0.01),PARL蛋白与抗增殖蛋白2共定位显著降低(P<0.01)。(5)结果表明,耐力训练可诱导线粒体内膜自噬受体抗增殖蛋白2表达,促进抗增殖蛋白2与线粒体自噬接头蛋白的结合完成线粒体自噬,恢复线粒体功能,减缓动脉粥样硬化发生。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 耐力训练 线粒体自噬 动脉粥样硬化 线粒体
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稳定表达Prohibitin 2蛋白SW620细胞株的建立 被引量:1
6
作者 武标 徐丽丽 +2 位作者 王妍 汤玲 孙文旦 《江苏医药》 CAS 2015年第20期2373-2376,共4页
目的构建prohibitin 2(Phb2)蛋白基因的真核表达载体,并建立稳定表达Phb2蛋白的细胞株。方法扩增Phb2基因全长编码序列,经双酶切后克隆至真核表达载体pcDNA3中,将重组表达质粒pcDNA3-FLAG-Phb2转染至SW620细胞,用G418筛选阳性克隆,Weste... 目的构建prohibitin 2(Phb2)蛋白基因的真核表达载体,并建立稳定表达Phb2蛋白的细胞株。方法扩增Phb2基因全长编码序列,经双酶切后克隆至真核表达载体pcDNA3中,将重组表达质粒pcDNA3-FLAG-Phb2转染至SW620细胞,用G418筛选阳性克隆,Western blot检测Phb2蛋白的表达。结果经测序鉴定,成功构建了Phb2基因的真核表达载体。转染SW620细胞后能够稳定有效的表达Phb2蛋白。结论成功构建了稳定表达Phb2蛋白的细胞株。 展开更多
关键词 基因表达 prohibitin 2
原文传递
Prohibitin 2基因参与猪圆环病毒2型PK-15细胞感染的研究
7
作者 蒋一凡 罗旭英 +5 位作者 吴锐 符世豪 张佳鑫 余婉婷 李周勉 王乃东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期506-511,共6页
为探究Prohibitin2(PHB2)在PCV2感染细胞过程中发挥的作用,首先通过间接免疫荧光试验检测PCV2在PK-15细胞中的增殖变化,同时建立PHB2荧光定量PCR检测体系,然后以PCV2已知的宿主细胞互作蛋白gC1qR为对照,检测PCV2感染PK-15细胞后PHB2 mRN... 为探究Prohibitin2(PHB2)在PCV2感染细胞过程中发挥的作用,首先通过间接免疫荧光试验检测PCV2在PK-15细胞中的增殖变化,同时建立PHB2荧光定量PCR检测体系,然后以PCV2已知的宿主细胞互作蛋白gC1qR为对照,检测PCV2感染PK-15细胞后PHB2 mRNA的动态变化,最后鉴定PHB2 siRNA转染PK-15细胞中PCV2 Cap的表达。结果表明,PHB2在正常及PCV2感染的PK-15细胞中均有效表达。随着PCV2感染PK-15细胞,gC1qR转录水平在病毒感染3 h显著降低,感染6 h时升高,随后(12~48 hpi)转录水平下降;而PHB2转录水平在PCV2感染6 h内显著升高,随后(12~48 hpi)mRNA水平有所下降;RNA干扰PHB2对PCV2在PK-15细胞中复制起到显著的抑制作用。上述研究结果表明,PCV2可显著影响PK-15细胞中PHB2转录,而且PHB2对PCV2病毒复制具有调节作用。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 猪肾上皮细胞 gC1qR prohibitin 2 荧光定量PCR
原文传递
敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡 被引量:1
8
作者 张婧 杨自更 +4 位作者 韦红梅 宁海虹 薛茜茜 金玲 吴宾 《基础医学与临床》 2023年第10期1522-1529,共8页
目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、... 目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平;TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;MitoTracker染色评估线粒体分裂情况;用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果与shCtrl组相比,shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比,shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05),线粒体内细胞色素c增加(P<0.05)。结论抑制PHB2促进A549细胞凋亡,其机制可能与促进DRP1介导的线粒体分裂有关。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 线粒体分裂 非小细胞肺癌 动力相关蛋白1 凋亡
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Prohibitins, novel vitamin K2 target factors in osteoblast
9
作者 Tatsuya Uebi Makoto Umeda +3 位作者 Naoya Maekawa Satoshi Karasawa Hiroshi Handa Takeshi Imai 《Journal of Biosciences and Medicines》 2013年第3期1-4,共4页
Vitamin K2 (VK2, menaquinone) is a drug for osteoporosis. VK2 acts as a cofactor for γ-glutamyl carboxylase, which catalyzes the carboxylation of specific glutamic acid residues (γ-carboxylation) of substrate protei... Vitamin K2 (VK2, menaquinone) is a drug for osteoporosis. VK2 acts as a cofactor for γ-glutamyl carboxylase, which catalyzes the carboxylation of specific glutamic acid residues (γ-carboxylation) of substrate proteins. Here we demonstrate that VK2 also regulate osteoblastgenic marker gene expression. Using VK2-immobilzed nanobeads new target proteins were purified and identified from osteoblastic cell line. They are prohibitin 1 and 2 (PHB1 & 2), respectively. To confirm the PHBs function on VK2-dependent transcription, PHB1 & 2 were knock-down and osteocalcin gene 2 transcriptions were analyzed, indicating that PHBs regulate VK2-dependent transcription. Taken together PHBs are VK2 target proteins for osteoblastgenic transcription. 展开更多
关键词 VITAMIN K2 prohibitin OSTEOBLAST Runt-Related TRANSCRIPTION Factor 2 (Runx2)
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FOXM1通过靶向上调PHB2的转录改善线粒体功能障碍保护脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤 被引量:2
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作者 陈娟 陈拉斯 +3 位作者 陈丽 唐文庄 张琼果 王善志 《河北医学》 CAS 2022年第3期368-374,共7页
目的:探究FOXM1在脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用及其可能的作用机制。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,qRT-PCR和Western blot检测细胞FOXM1和PHB2表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1染色检测线粒... 目的:探究FOXM1在脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用及其可能的作用机制。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,qRT-PCR和Western blot检测细胞FOXM1和PHB2表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1染色检测线粒体膜电位;试剂盒检测细胞ATP含量;荧光素酶报告实验和ChIP-PCR实验检测FOXM1对PHB2启动子调控作用。结果:与对照组相比,LPS组细胞中FOXM1和PHB2表达、细胞活力、红/绿荧光强度比值和ATP含量明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+oe-NC组细胞中FOXM1和PHB2表达、细胞活力、红/绿荧光强度比值、ATP含量和细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与LPS+oe-NC组相比,LPS+oe-FOXM1组细胞中FOXM1和PHB2表达、细胞活力、红/绿荧光强度比值和ATP含量明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。FOXM1靶向结合PHB2启动子区域。与LPS+oe-NC+sh-NC组相比,LPS+oe-FOXM1+sh-NC组细胞中FOXM1和PHB2蛋白表达、细胞活力、红/绿荧光强度比值和ATP含量明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与LPS+oe-NC+sh-NC组相比,LPS+oe-NC+sh-PHB2组细胞中PHB2蛋白表达、细胞活力、红/绿荧光强度比值和ATP含量明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),FOXM1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);sh-PHB2可部分逆转oe-FOXM1对LPS处理的HK-2细胞的作用。结论:FOXM1通过靶向结合PHB2启动子区域促进PHB2表达,改善线粒体功能障碍,从而抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 脂多糖 Forkhead box M1 prohibitin 2 线粒体
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抗增殖蛋白2:一种线粒体和细胞核之间的重要媒介 被引量:3
11
作者 时颖 李铁松 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期32-37,共6页
抗增殖蛋白2(prohibitin2,PHB2)是抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)家族中的重要成员,是主要定位于线粒体内膜的多功能蛋白质,对维持线粒体形态和功能的稳定具有重要作用,同时也是细胞内稳态和细胞分化的重要调节因子。随着对PHB2的深入研究... 抗增殖蛋白2(prohibitin2,PHB2)是抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)家族中的重要成员,是主要定位于线粒体内膜的多功能蛋白质,对维持线粒体形态和功能的稳定具有重要作用,同时也是细胞内稳态和细胞分化的重要调节因子。随着对PHB2的深入研究,已发现PHB2是一种线粒体和细胞核之间重要的媒介。PHB2是细胞中必不可少的,它直接参与多种细胞进程并发挥重要作用,如调节转录因子的转录活性、调节细胞的分化与凋亡、维持线粒体形态和功能的稳定、调节姐妹染色单体的结合、神经细胞的修复和再生、轴突的发育形成和增强细胞氧化应激耐受性。近年来,PHB2在病理生理学中的作用及其在疾病治疗中的药靶地位受到高度重视。本文对PHB2研究的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 线粒体 细胞核 功能蛋白 细胞进程
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基于基因表达谱芯片杂交分析Lamprey-PHB2转染前后Chang liver细胞的基因表达差异
12
作者 时颖 李晴 +2 位作者 郭思呈 李庆伟 李铁松 《上海师范大学学报(自然科学版)》 2018年第5期558-564,共7页
选取了10个物种与本课题组前期克隆得到的东北七鳃鳗抗增殖蛋白2(Lm-PHB2)进行氨基酸序列相似性对比,检测PHB2基因进化水平,结果表明各物种的PHB2氨基酸序列在PHB结构域处高度保守,但在N-端和C-端氨基酸序列保守性较低.将重组质粒pEGFP-... 选取了10个物种与本课题组前期克隆得到的东北七鳃鳗抗增殖蛋白2(Lm-PHB2)进行氨基酸序列相似性对比,检测PHB2基因进化水平,结果表明各物种的PHB2氨基酸序列在PHB结构域处高度保守,但在N-端和C-端氨基酸序列保守性较低.将重组质粒pEGFP-N1-Lm-PHB2瞬时转染入张氏肝(CHL)细胞后,利用基因表达谱芯片技术分析基因的表达差异.结果显示CHL细胞中共有270条显著差异表达基因,其中显著上调基因共141条,显著下调基因共129条,涉及细胞信号转导、细胞周期调节、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等多个方面.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)对基因表达谱芯片分析结果进行验证,结果显示转染pEGFP-N1-Lm-PHB2质粒后,细胞周期基因CDC25C、氧化应激相关基因(CAT,SOD,GST)和抗细胞凋亡基因HAX1均有显著性差异. 展开更多
关键词 七鳃鳗 抗增殖蛋白2(PHB2) 基因表达谱芯片 基因表达
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抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌中的表达及其对A431细胞增殖的影响
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作者 孔晓芸 缪旭 +3 位作者 张冬梅 崔恒祥 施健 刘念念 《中国麻风皮肤病杂志》 2021年第8期499-505,共7页
目的:观察抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌、鲍温病、日光性角化病组织中的表达情况及其对A431细胞增殖作用的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测抗增殖蛋白2在40例皮肤鳞状细胞癌、18例鲍温病、17例日光性角化病组织以及9例正常皮肤组... 目的:观察抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌、鲍温病、日光性角化病组织中的表达情况及其对A431细胞增殖作用的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测抗增殖蛋白2在40例皮肤鳞状细胞癌、18例鲍温病、17例日光性角化病组织以及9例正常皮肤组织中的表达水平。采用CRISPR-Cas9法构建两组靶向敲除抗增殖蛋白2的皮肤鳞状细胞癌A431细胞模型(KO299组及KO320组),使用Western印迹法证实其敲除效果,通过CCK8法及细胞克隆形成实验分析其对细胞增殖的影响。使用Western印迹法对AKT蛋白表达及其ser473位点磷酸化产物水平进行分析。结果:抗增殖蛋白2在皮肤鳞状细胞癌(90.00%)、鲍温病(66.70%)、日光性角化病(41.18%)的表达高于正常组织(0.00%)(均P<0.05),皮肤鳞状细胞癌抗增殖蛋白2表达高于日光性角化病(P<0.05)。在不同性别、年龄、部位、病程、肿瘤直径、浸润深度、分化、Broder分级的皮肤鳞状细胞癌组织中抗增殖蛋白2的表达差异无统计学意义(均P>0.05)。两组抗增殖蛋白2敲除组A431细胞的蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数显著低于对照组(均P<0.05)。p-AKT表达随抗增殖蛋白2表达水平的降低而显著下调(均P<0.01)。结论:抗增殖蛋白2的表达可能促进了皮肤鳞状细胞癌的发生,并且其机制可能与促癌基因AKT蛋白活化相关。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 皮肤鳞状细胞癌 细胞增殖 蛋白激酶B
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抗增殖蛋白2在帕金森病发病线粒体机制中的作用
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作者 张泰瑜 冯红 《自然杂志》 2020年第6期471-474,共4页
帕金森病是第二大神经退行性疾病,目前发病机制尚不明确且无法治愈。抗增殖蛋白2参与维持线粒体形态和功能的稳定、凋亡等多种生物学进程。文章主要阐述抗增殖蛋白2与帕金森病之间的联系,进而探讨抗增殖蛋白2在帕金森病发病线粒体机制... 帕金森病是第二大神经退行性疾病,目前发病机制尚不明确且无法治愈。抗增殖蛋白2参与维持线粒体形态和功能的稳定、凋亡等多种生物学进程。文章主要阐述抗增殖蛋白2与帕金森病之间的联系,进而探讨抗增殖蛋白2在帕金森病发病线粒体机制中的作用。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 帕金森病 线粒体机制
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PHB2抑制低氧性肺动脉高压小鼠右心室重塑的作用
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作者 吴宾 张婧 +4 位作者 卫玮 蔡冰冰 张阳 袁铭 杨自更 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第1期25-30,共6页
目的:探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在低氧性肺动脉高压(HPH)诱导的右心室重塑中的作用及可能机制。方法:将普通8周龄的C57BL/6小鼠随机分为:对照组(Control)、HPH组、HPH+空病毒(HPH+vector)组、HPH+过表达PHB2(HPH+PHB2)组。HPH组、HPH+空病... 目的:探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在低氧性肺动脉高压(HPH)诱导的右心室重塑中的作用及可能机制。方法:将普通8周龄的C57BL/6小鼠随机分为:对照组(Control)、HPH组、HPH+空病毒(HPH+vector)组、HPH+过表达PHB2(HPH+PHB2)组。HPH组、HPH+空病毒组、HPH+过表达PHB2组置于低压低氧人工舱内维持4 w,对照组置于常压常氧环境中维持4 w。实验开始3 w前,尾静脉注射平滑肌特异性PHB2过表达的AAV9腺相关病毒及其对照病毒。评估小鼠右室血流动力学、右室重塑指标、炎症、氧化应激、血管活性物质水平以及肺组织PHB2和p-Stat3蛋白表达。结果:与对照组相比,HPH组和HPH+空病毒组RVSP、RVAW、RVHI显著增加(P<0.05),而RVID显著降低(P<0.05),右室CVF显著增加(P<0.05),血浆ET-1和BNP显著增加(P<0.05),血浆NO、总NOS和iNOS显著降低(P<0.05),右心IL-1β、IL-6及TNF-α显著增加(P<0.05),SOD和GSH-Px显著降低(P<0.05),肺组织PHB2表达降低(P<0.05),p-STAT3表达增加(P<0.05)。与HPH组和HPH+空病毒组相比,HPH+过表达PHB2组RVSP、RVAW、RVHI显著降低(P<0.05),而RVID显著增加(P<0.05),右室CVF显著降低(P<0.05),血浆ET-1和BNP显著降低(P<0.05),血浆NO、总NOS和iNOS显著增加(P<0.05),右心IL-1β、IL-6及TNF-α显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px显著增加(P<0.05),肺组织PHB2表达增加(P<0.05),p-STAT3表达降低(P<0.05)。结论:PHB2可减轻HPH诱发的右心室重塑,其机制可能与PHB2抑制STAT3的磷酸化水平有关。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 低氧性肺动脉高压 心室重塑 信号转导与转录激活子3
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PGRMC1在激素治疗中促进乳腺癌细胞增殖的机制研究 被引量:1
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作者 赵越 阮祥燕 +2 位作者 谷牧青 许新 程姣姣 《中国癌症防治杂志》 CAS 2022年第4期378-384,共7页
目的探讨孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane components 1,PGRMC1)在激素治疗中促进乳腺癌细胞增殖的作用机制。方法雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌MCF7细胞经雌孕激素处理后,用过表达PGRMC1、敲降ER抑... 目的探讨孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane components 1,PGRMC1)在激素治疗中促进乳腺癌细胞增殖的作用机制。方法雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌MCF7细胞经雌孕激素处理后,用过表达PGRMC1、敲降ER抑制因子PHB1(shPHB1⁃1和shPHB1⁃2)及其相应阴性对照的慢病毒液进行感染。采用免疫共沉淀联合质谱分析及GST pull⁃down实验检测PGRMC1与PHB复合体(PHB1和PHB2)的相互作用,免疫印迹法和RT⁃qPCR检测PHB1、PHB2和PGRMC1的表达情况,CCK⁃8和EDU实验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期情况,RT⁃qPCR检测ER信号通路下游靶基因THBS1、CXCL12和GREB1的表达情况。结果免疫共沉淀联合质谱分析发现,PHB1和PHB2均存在于PGRMC1的免疫共沉淀组分中;GST pull⁃down鉴定体外条件下PGRMC1与PHB复合体存在直接相互作用。与相应对照组相比,过表达PGRMC1和下调PHB1的乳腺癌细胞增殖速度均明显加快(均P<0.05),S期和G2/M期阳性细胞比例均明显增加(均P<0.05),且能够显著促进ER信号通路下游靶基因THBS1、CXCL12和GREB1的表达(均P<0.01)。PGRMC1过表达后MCF7细胞中PHB1与ER的相互作用减弱。下调PHB1后再过表达PGRMC1的细胞周期中,S期和G2/M期阳性细胞比例与单独下调PHB1相比无明显变化(均P>0.05)。结论PGRMC1可能通过与PHB复合体结合,并解除后者对ER信号通路的抑制作用,从而促进ER信号通路的活化和下游靶基因的表达,加速激素刺激条件下乳腺癌细胞的恶性增殖。 展开更多
关键词 乳腺癌 孕激素受体膜组分1 雌激素受体 ER抑制因子1 ER抑制因子2
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Prohibitin1和Prohibitin2在缺氧性肾小管上皮细胞损伤中的表达及作用 被引量:3
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作者 彭单单 覃远汉 +6 位作者 邵明斌 周添标 徐会凌 程会元 雷凤英 周春 黄韦芳 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期346-348,共3页
目的探讨Prohibitn1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)在缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达和作用。方法以体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为对象,NRK-52E细胞置于50 mL.L-1二氧化碳(CO2),37℃培养箱中孵育至80%,传代后随... 目的探讨Prohibitn1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)在缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达和作用。方法以体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为对象,NRK-52E细胞置于50 mL.L-1二氧化碳(CO2),37℃培养箱中孵育至80%,传代后随机分为正常组和模型组。正常组细胞继续培养,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器抽尽残余空气,充以配好的缺氧气体(950 mL.L-1氮气和50 mL.L-1CO2)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,分别于造模第12、24、36小时采用实时荧光定量PCR检测PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达,Western blot检测PHB1、PHB2蛋白表达。结果 1.与正常组比较,模型组各时间点NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及其mRNA表达均降低(Pa<0.05),缺氧时间越长,表达量越低;NRK-52E细胞的TGF-β1 mRNA表达均增高(Pa<0.05),缺氧时间越长,表达量越高。2.相关性分析:模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2 mRNA表达与TGF-β1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.97、-0.99,Pa<0.05)。结论缺氧所致NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及mRNA表达均降低,缺氧时间越长,表达量越低,NRK-52E细胞损伤越重。PHB1、PHB2可能参与RTEC损伤的发生发展。 展开更多
关键词 prohibitin1 prohibitin2 肾小管上皮细胞损伤
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全反式维A酸对缺氧性肾小管上皮细胞Prohibitin1和Prohibitin2表达的影响
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作者 徐会凌 覃远汉 +3 位作者 周添标 李正一 雷凤英 黄韦芳 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期333-336,共4页
目的探讨全反式维A酸(ATRA)对缺氧性。肾小管上皮细胞(RTEC)Prohibitinl(PHBl)和Pro—hibitin2(PHB2)表达的影响。方法购自上海生物细胞库的大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E,采用混有胎牛血清和双抗的培养基(100mL培养基中加... 目的探讨全反式维A酸(ATRA)对缺氧性。肾小管上皮细胞(RTEC)Prohibitinl(PHBl)和Pro—hibitin2(PHB2)表达的影响。方法购自上海生物细胞库的大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E,采用混有胎牛血清和双抗的培养基(100mL培养基中加5mL胎牛血清和1mL双抗)在37℃、50mL/L二氧化碳的培养箱中培养。传代3次后分为正常组、模型组和ATRA干预组。正常组细胞不做任何处理,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器吸尽残余空气,充入缺氧气体(950n,L/L氮气和50mL/L二氧化碳)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,ATRA干预组细胞中加入0.1μmol/LATRA后参照模型组的方法进行缺氧。于缺氧24h、36h采用实时荧光定量PCR法测定各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA表达,Westernblot法检测各组NRK-2E细胞PHB1、PHB2、TGF-β1的蛋白表达。结果1.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-2E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均〈0.05),缺氧时间越长,表达量越低;与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK一52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均〈0.05)。2.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均〈0.05),缺氧时间越长,表达量越高;与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均〈0.05)。结论ATRA可显著增强缺氧性RTEC中PHB1和PHB2蛋白表达量及其mRNA表达量,可能对缺氧性RTEC有保护作用。 展开更多
关键词 prohibitin1 prohibitin2 全反式维A酸
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肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的机制研究 被引量:2
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作者 徐一凡 周勇 +2 位作者 秦呈林 张业鹏 查文章 《解剖学研究》 CAS 2022年第6期532-538,共7页
目的探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱... 目的探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱导单核细胞代谢重编程的关键miRNA。通过HumanTargetScan在线分析预测以及遗传学筛选鉴定miRNA的靶标。结果缺氧环境下,肝癌细胞外泌体单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生(分别为34856±2944、174±16)高于正常肝细胞外泌体(分别为23454±2194、135±12)(P<0.05)。过表达miR-34b-3p、OMA1及敲低PHB2能够促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生(分别为22287±2207与36399±3123;121±10与158±17;22972±2330与32099±2017;121±11与161±16;24020±2156与37901±3084;110±10与151±16,均P<0.05);敲低miR-34b-3p、OMA1及过表达PHB2能够抑制单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生(分别为22287±2207与17541±1716;121±10与92±9;23827±2184与18891±1623;113±10与84±8;22469±2361与18801±1595;132±11与88±8,均P<0.05)。过表达miR-34b-3p能够降低PHB2的mRNA和蛋白表达水平(分别为0.22±0.03与0.05±0.01,P<0.05);敲低miR-34b-3p能够提升PHB2的mRNA和蛋白表达水平(分别为0.22±0.03与0.49±0.05,P<0.05)。敲低PHB2及过表达miR-34b-3p后,发现OMA1的表达水平上升(P<0.05);过表达PHB2及敲低miR-34b-3p后,发现OMA1的表达水平下降(P<0.05)。结论肝癌细胞外泌体中miR-34b-3p通过PHB2/OMA1轴促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生,诱导了单核细胞代谢重编程。 展开更多
关键词 肝癌 外泌体 单核细胞 代谢 miR-34b-3p 抗增殖蛋白2 与m-AAA蛋白酶1同源物重叠
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运动对高脂膳食诱导的IR小鼠骨骼肌线粒体内膜蛋白PHB2表达和线粒体自噬的影响 被引量:5
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作者 齐洁 牛书妍 +1 位作者 李纯 张钧 《北京体育大学学报》 CSSCI 北大核心 2022年第7期104-112,共9页
目的:探讨长期规律运动对预防高脂膳食引起的IR小鼠骨骼肌线粒体中抗增殖蛋白2(PHB2)的影响。方法:6周龄雄性C57BL/6N小鼠,随机分为正常饮食安静组(ND-Con)、正常饮食运动组(ND-Ex)、高脂膳食安静组(HFD-Con)和高脂膳食运动组(HFD-Ex),... 目的:探讨长期规律运动对预防高脂膳食引起的IR小鼠骨骼肌线粒体中抗增殖蛋白2(PHB2)的影响。方法:6周龄雄性C57BL/6N小鼠,随机分为正常饮食安静组(ND-Con)、正常饮食运动组(ND-Ex)、高脂膳食安静组(HFD-Con)和高脂膳食运动组(HFD-Ex),每组10只。通过10周高脂饲料喂养建立IR小鼠动物模型,同时对小鼠实施中等强度跑台干预。利用IGTT和IITT试验评价IR动物模型及运动预防IR的效果。通过DHE染色观察骨骼肌ROS水平,DCFH-DA试剂盒检测骨骼肌线粒体ROS生成速率,试剂盒检测骨骼肌线粒体CAT和T-AOC水平,western blot检测骨骼肌线粒体自噬相关基因PHB2、PINK1、Parkin、LC3蛋白表达水平。结果:1)与ND-Con组比较,IGTT和IITT试验结果表明HFD-Con组血糖曲线下面积(AUC)显著增加(P<0.01);与HFD-Con组相比,HFD-Ex组AUC显著下降(P<0.01,P<0.05)。2)与ND-Con组比较,HFDCon组骨骼肌ROS水平和线粒体ROS生成速率均显著增加(P<0.01),骨骼肌线粒体CAT、T-AOC水平均显著下降(P<0.01);与HFD-Con组比较,HFD-Ex组骨骼肌及线粒体氧化应激指标均显著改善(P<0.01)。3)与ND-Con组比较,HFD-Con组骨骼肌线粒体相关基因PHB2、PINK1、Parkin蛋白表达量以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著下降(P<0.01);与HFD-Con组比较,HFD-Ex组骨骼肌线粒体自噬相关蛋白表达水平均显著增加(P<0.01)。结论:10周跑台运动可抑制由高脂膳食引起的骨骼肌线粒体过度氧化应激,并上调骨骼肌线粒体自噬标志物PHB2表达水平,同时增强线粒体自噬途径PINK1/Parkin信号转导,预防高脂膳食诱发小鼠形成胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 长期规律运动 骨骼肌 线粒体胰岛素抵抗 活性氧 抗增殖蛋白2 PINK1/Parkin信号通路
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