FTY720对体外混合培养淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的观察FTY720对体外混合培养小鼠脾脏淋巴细胞的增殖、分化和凋亡的影响。方法将C57BL/6J小鼠与BALB/c小鼠的脾脏淋巴细胞体外混合培养5 d,培养液中加入不同浓度的FTY720。分别运用MTT法和流式细胞仪检测在不同浓度FTY720作用下,混合培养淋巴细胞的增殖状况、细胞表型和凋亡率。结果当FTY720为400 ng/mL时,体外混合培养淋巴细胞的增殖即受到明显抑制,抑制率为47.6%(P<0.05);当FTY720为3 200 ng/mL时,其抑制率达到为51.6%,呈剂量依赖性。FTY720为1 600 ng/mL时,混合培养淋巴细胞中的CD4+CD25+T细胞比例显著增加(P<0.05)。FTY720在200 ng/mL时,混合培养淋巴细胞的细胞凋亡率即显著增加(P<0.05)。结论在小鼠混合淋巴细胞培养体系中加入高浓度的FTY720,能显著抑制淋巴细胞增殖能力,增加调节性细胞的比例并促进细胞凋亡。

有氧训练对T细胞免疫功能的影响

目的 观察有氧运动刺激引起的T淋巴细胞功能的变化过程,探讨有氧运动对人体T细胞免疫功能的影响及机制.方法 随机选择未经体育训练的普通健康女大学生16名,进行连续56天的有氧训练,每日分别在功率自行车（90 w,60 r/min,15 min）和活动跑台（9 km/h,坡度为0°,15 min）上进行总时间为30 min的有氧运动.选择第1,7,14,28,42,56天作为测试日,测试运动负荷为活动跑台（9 km/h,坡度为0°,15 min）,于运动前、运动后即刻、运动后1 h抽取静脉血,用PHA刺激使淋巴细胞发生分裂增殖,用MTT比色法测定T淋巴细胞转化率,计算刺激指数SI值,来反映T细胞的活性和功能.结果 在第1天有氧运动后SI值表现为明显降低,从运动前1.117±0.174下降到运动后即刻的0.866±0.132（t=6.605,P〈0.01）,运动后恢复1 h为0.885±0.122 （t=7.037,P〈0.01）,未出现明显恢复.在第7,14,28,42,56天的应激反应中,SI在运动后均降低,第14天降低幅度达到最大,在第28,42,56天降低幅度逐渐减弱,运动前SI值在前4周处于持续明显降低,第28天运动前SI值为0.972±0.114（t=2.536,P〈0.05）,第42,56天运动前SI值恢复至1.114±0.124（t=0.651,P〉0.05）,1.125±0.097（t=0.225,P〉0.05）.结论 有氧运动刺激引起T淋巴细胞的活性降低,降低程度与机体对运动负荷的适应程度有关,T细胞免疫功能表现出前4周的免疫抑制和后4周的逐渐适应过程,依赖于体内神经内分泌免疫网络的调节作用,以及免疫细胞、免疫因子的调节作用.

小鼠CTLA4-Ig融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:在真核细胞中表达CTLA4鄄Ig融合蛋白,获得纯品并测定其生物学活性。方法:用电转染的方法将真核表达载体pREP7鄄CTLA4鄄IgG2c转染SP2/0细胞,经300μg/ml的潮霉素筛选得到阳性克隆;大量培养后收集含有重组CTLA4鄄IgG2c的细胞培养上清,用rProteinA亲和层析柱纯化CTLA4鄄Ig。用还原和非还原性SDS鄄PAGE和蛋白印迹进行鉴定。采用单向混合淋巴细胞培养(3H掺入法)测定CT鄄LA4鄄Ig对T细胞增殖的抑制效应。结果:阳性克隆大量培养的细胞上清经rPrtoteinA亲和层析后得到纯化CTLA4鄄Ig。还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot的结果显示在55KD出现目的蛋白条带;在非还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot在130KD处出现目的蛋白条带。混合淋巴细胞培养5d的结果显示,CTLA4鄄Ig浓度为10μg/ml时可以抑制T细胞的增殖;20μg/ml时抑制达到最大程度(P<0.05);继续增加CTLA4鄄Ig的浓度,其抑制作用不再增强。3、7d时的抑制作用不明显。结论:在SP2/0中表达了小鼠CTLA4鄄Ig融合蛋白,该融合蛋白能抑制T细胞的增殖。

罗红霉素对小鼠接触性皮炎及T细胞功能的影响

目的:研究罗红霉素对接触性皮炎及T细胞功能的影响。方法:使用2 ,4 ,6 三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎,以双向混合淋巴细胞反应及刀豆蛋白诱导脾T细胞增殖,MTT法检测活细胞数量。采用RT PCR方法检测细胞因子mRNA表达。结果:2 0mg·kg- 1罗红霉素效应相灌胃给药明显抑制2 ,4 ,6 三硝基氯苯诱导的小鼠接触性皮炎(P <0 .0 1)。2 5 μg·ml- 1罗红霉素显著降低双向混合淋巴细胞反应(P <0 .0 5 ) ,5、2 5 μg·ml- 1罗红霉素明显抑制刀豆蛋白诱导的脾细胞存活、增殖(P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)及T bet、IL 2及IFN γ的mRNA表达。结论:罗红霉素能抑制2 ,4 ,6 三硝基氯苯诱导的接触性皮炎,可能与其抑制T淋巴细胞存活、活化及增殖有关。

低能量氦氖激光照射对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响

目的 :本文研究低能量氦氖激光照射荷瘤小鼠 ,观察对荷瘤 T淋巴细胞增殖反应的影响。结果 :BALB/ C雄性小鼠腹腔接种 S180 接种后 ,进行激光照射小鼠内眼角 ,测定正常对照组、肿瘤对照组和 7.3 3、1 1 .0 0、1 4 .67、2 2 .0 0 J/ cm2 和 2 9.3 3 J/ cm2 五个剂量激光照射组小鼠的 T淋巴细胞增殖反应 ,结果表明1 1 .0 0 J/ cm2 、1 4 .67J/ cm2 、2 2 .0 0 J/ cm2 剂量的氦氖激光照射能提高 T淋巴细胞增殖反应 ;2 9.3 3 J/ cm2 剂量激光照射抑制 T淋巴细胞增殖反应。结论 :低能量氦氖激光照射对荷瘤小鼠 T淋巴细胞增殖具有双向调节作用。

离体CD4^+CD25^+调节性T细胞的扩增和混合淋巴细胞反应研究

为研究健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,CD4+CD25+Tregs)在协同刺激信号作用下的扩增反应及与CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞反应,采用免疫磁珠法分离CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25-T细胞,在抗CD3-mAbs和抗CD28-mAbs的刺激下行CD4+CD25+Tregs培养和CD4+CD25+Tregs+CD4+CD25-T细胞混合淋巴细胞培养72 h。然后加入CCK-8溶液孵育1 h,用酶标仪检测OD450值。结果为:CD4+CD25+Tregs组OD450值极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25-T细胞混合组OD450值也极显著性地低于CD4+CD25-T细胞组(P<0.01)。CD4+CD25+Tregs表现出无反应性特征,还可抑制CD4+CD25-T细胞扩增,因此,CD4+CD25+Tregs不只是很惰性的免疫细胞,而是对保持免疫耐受发挥了积极的调节作用。

免疫抑制剂对人外周血CD4^+和CD8^+ T细胞Tim3表达的影响及意义

目的:观察4种免疫抑制剂对正常人外周血中CD4+和CD8+细胞Tim3表达的影响。方法:选取6名正常志愿者外周血各30 ml,分离淋巴细胞,PHA刺激淋巴细胞增殖,按照免疫抑制剂分为CsA、MMF、FK506、RAPA及DMX单因素组和混合干预组,培养3 d后,流式细胞仪检测CD4+和CD8+细胞的Tim3表达,并在72h后检测各种干预因素作用后的细胞增殖情况。结果:在CD4+T细胞中,各单因素干预组Tim3+的阳性率与未干预组相比有显著差异(P<0.05),Tim3+最低的是CsA组和RAPA组,但无统计学差异;最高的是DMX组,与其它单因素4组比较有显著差异(P<0.05);复合干预组中,Tim3+最低的是CsA+RAPA+DMX组和RAPA+MMF+DM组,但无统计学差异。在CD8+T细胞中,各单因素干预组Tim3+的变化与未干预组相比,只有CsA组和RAPA组与对照组比较有统计学差异,两者间无统计学差异(P=0.511);而各个复合干预组与未干预组比较都有统计学差异,Tim3+最低的是CsA+RAPA+DMX组和RAPA+MMF+DM组,但无统计学差异(P=0.413);而最高的CsA+MMF+DMX组与CsA+RAPA+DMX和RAPA+MMF+DMX组比较有统计学差异(P分别为0.002和0.015)。在细胞增殖的结果中,各个干预组对外周血单个核细胞的增殖都有明显的抑制作用,CsA+RAPA+DMX组跟其它复合组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:不同的免疫抑制剂对Tim3分子的表达存在差异,无论是细胞亚型还是增殖结果都明显不同。

紫外线减毒弓形虫ZS1株滋养体在小鼠体内的细胞免疫反应

目的： 探讨紫外线减毒弓形虫ＺＳ１ 株在小鼠体内的免疫保护性和细胞免疫反应。方法： 用波长为２５３７°Ａ 的紫外线照射弓形虫ＺＳ１株滋养体， 照射高度为５ ｃｍ ， 照射时间６０ ｍ ｉｎ。小鼠于免疫后４５ ｄ 用同株滋养体攻击感染， 攻击后４ ｄ 剖杀， 与单免疫组、单感染组及正常对照组小鼠比较其脾Ｔ淋巴细胞增殖反应及其亚群的变化。结果： 小鼠接种紫外线减毒弓形虫ＺＳ１ 株滋养体后能正常存活， 于接种后４９ ｄ 各组织未查见滋养体、包囊或假包囊； 免疫组攻击感染后存活时间较单感染组延长； 体外特异抗原刺激后， 可诱导免疫组及免疫攻击组强的脾Ｔ淋巴细胞增殖反应； 免疫攻击组ＣＤ４＋ Ｔ细胞明显下降， ＣＤ４＋ ／ＣＤ８＋ 比率倒置； 免疫组、免疫攻击组及感染组的ＮＫ细胞活性均明显增强。结论： 紫外线减毒弓形虫ＺＳ１株滋养体疫苗能够诱导免疫小鼠产生一定的抗攻击感染保护力， 其中ＣＤ８＋ Ｔ细胞和ＮＫ细胞可能发挥着重要作用。

脑啡肽对大鼠海马白细胞介素－1α基因表达及脾淋巴细胞增殖反应的影响

研究了海马内微量注射脑啡肽对大鼠海马白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）基因表达及脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果发现：①双侧海马内微量注射甲硫或亮脑啡肽各１μｌ（１８ｍｍｏｌ／Ｌ）能明显增强刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）刺激的脾淋巴细胞增殖反应（Ｐ＜０．０１），而双侧海马内微量注射脂多糖（ＬＰＳ）各１μ（５０ｍｇ／Ｌ）则抑制脾淋巴细胞的增殖反应。②双侧海马内微量注射ＬＰＳ各１μｌ（５０ｍｇ／Ｌ），于９０ｍｉｎ后用逆转录－聚合酶链反应技术可检测到海马内有ＩＬ－１α基因表达，而皮层或脑室内注射ＬＰＳ，未检测到海马内有ＩＬ－１α基因表达；海马内预先给予甲硫或亮脑啡肽，则ＬＰＳ诱导的海马ＩＬ－１α基因表达受到抑制。结果表明脑啡肽在海马结构对机体免疫功能的调节中起着重要作用，其机制可能与抑制海马结构ＩＬ－１α基因表达有关。

原核表达、稀释复性的可溶性HLA-G1抑制混合淋巴细胞培养中T细胞增殖

目的：探讨原核表达体外稀释复性的可溶性人类白细胞抗原G1（soluble HLA-G1，sHLA-G1）对体外混合淋巴细胞反应中T细胞增殖的影响。方法利用原核表达的sHIA-G1的重链、轻链及人工合成的九肽，折叠形成正确构象的sHLA-G1．肽复合物；在混合淋巴细胞培养（MLC）体系中加入折叠所得的sHLA-G1-肽复合物及相同浓度的对照物，流式细胞仪检测T细胞的增殖情况。结果sHLA-G1．肽复合物加入到混合淋巴细胞培养中能够抑制T细胞的增殖，3个个体的抑制率分别为28．5％、32．5％及22．1％（Dunnett t检验，P〈0．05）；这种抑制作用可以被HLA-G特异性McAb（G11E5）所逆转。结论通过原核表达，体外稀释复性的方法可以大量制备正确构象的sHLA-G1-肽复合物，该复合物分子能够抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖。