Sevoflurane effects on cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,phosphorylated cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,and Livin expression in the cortex and hippocampus of a vascular cognitive impairment rat

BACKGROUND： Neuronal necrosis and apoptosis play important roles in the pathophysiology of cerebral ischemia and resulting cognitive impairment. However, inhibition of neuronal necrosis and apoptosis has been shown to attenuate cognitive impairment following cerebral ischemia. OBJECTIVE： To investigate the effects of sevoflurane on cyclic adenosine monophosphate response element binding protein （CREB）, phosphorylated CREB （pCREB）, and Livin expression in the cortex and hippocampus of a rat model of vascular cognitive impairment.DESIGN, TIME AND SETTING： A randomized, controlled experiment was performed in the Chongqing Key Laboratory of Neurology between June 2007 and July 2008.MATERIALS： Sevoflurane was provided by Abbott Laboratory, UK; Morris water maze was provided by Chinese Academy of Medical Sciences, China; goat anti-rat CREB, goat anti-rat pCREB and goat anti-rat Livin antibodies were provided by Biosource International, USA. METHODS： A total of 42 female, Wistar rats were randomly assigned to the following groups： sham operation, vascular cognitive impairment, and sevoflurane treatment. The vascular cognitive impairment rat model was established by permanent bilateral occlusion of both common carotid arteries, and 1.0 MAC sevoflurane was immediately administered by inhalation for 2 hours. MAIN OUTCOME MEASURES： CREB, pCREB, and Livin expression was measured in the cortex and hippocampus by Western blot and reverse transcription-polymerase chain reaction. Behavior was evaluated with Morris water maze. RESULTS： CREB, pCREB, and Livin expression in the sevoflurane treatment group was significantly greater than the vascular cognitive impairment group （P 〈 0.01）. However, expression of CREB and pCREB was significantly less in the sevoflurane treatment and vascular cognitive impairment groups, compared with the sham operation group （P 〈 0.01）. Livin expression in the sevoflurane treatment and vascular cognitive impairment groups was significantly greater than the sham operation group （P 〈 0.01）. Learning, memory, and behavior disorders were observed in the vascular cognitive impairment group. Sevoflurane treatment significantly improved these observed disorders. CONCLUSION： Sevoflurane improved cognitive impairment due to permanent bilateral occlusion of both common carotid arteries. Improved function was associated with increased CREB, pCREB, and Livin expression in the cortex and hippocampus.

凋亡抑制蛋白livin在人胃癌中的表达以及和survivin表达的关系

目的:探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白livin表达情况及其与各临床病理因素的关系,以及和凋亡抑制蛋白survivin表达的相关性。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌组织中livinα、livinβ和survivin的mRNA的表达,并用westernblot分析livin和survivin蛋白的表达。结果:40例胃癌组织中livin表达阳性率为47.5%、survivin为60%,而在正常和癌旁组未检出阳性结果;livin的表达与组织分化和淋巴结转移有关,组织分化差,淋巴结转移者livin表达率高(P<0.05);24例survivin阳性样本中有14例livin呈阳性。结论:livin在胃癌组织中表达增高,可作为胃癌的分子标志物,可能成为胃癌治疗的新分子靶点,livin表达和survivin表达在本实验中结果显示没有相关性(P>0.05)。

Livin在肺癌中的表达及与pro-caspase3的相关性分析初步探讨

背景与目的Livin是凋亡抑制蛋白新成员之一,目前研究表明Livin在各种恶性肿瘤(包括肺癌)中过度表达,并促进肿瘤发生发展。本研究目的在于探讨在蛋白水平凋亡抑制蛋白livin在肺癌组织中的表达及与肺癌组织类型、术前化疗、淋巴结转移的关系;探索livin蛋白表达与pro-caspase3蛋白的关系。方法采用Western-blot方法检测肺癌组织及对照组中livin及pro-caspase3的蛋白水平的表达。结果27例肺癌组织中livin蛋白表达阳性率为55.6%(15/27),明显高于对照组癌旁组织(20.0%)和良性疾病肺组织(16.7%)(P<0.01)。其中在肺腺癌、鳞癌(包括大细胞癌)组织中livin蛋白阳性率分别为76.92%,38.46%,1例小细胞癌阴性;livin蛋白在术前有无化疗肺癌组织中及淋巴结有无转移组织中表达无明显差异(P>0.05)。应用凝胶成像仪测量各指标灰度值后显示,肺癌组织livin蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);pro-caspase3蛋白在肺癌组织中表达高于对照组(P<0.01),livin蛋白表达与pro-caspase3蛋白表达呈正相关趋向。结论Livin蛋白可在不同病理类型肺癌组织中不同程度表达,livin蛋白表达与术前化疗及淋巴结转移无明显相关;livin蛋白表达与pro-caspase3蛋白呈正相关趋势,可能与其与pro-caspase3蛋白结合抑制其加工活化有关。

livin在肺癌组织中的表达及与caspase-3的相关性初步探讨

背景与目的livin是新的凋亡抑制蛋白家族成员之一,本研究目的在于探索livin两种异构体在肺癌组织中的表达及其与肺癌病理类型、化疗的关系和livin表达与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的相关性。方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测肺癌组织及对照组中livinα、livinβ及caspase-3的表达。结果27例肺癌组织中livinα表达阳性率为44.44%,livinβ为70.30%,显著高于对照组(P值均<0.01),其中在腺癌组织中分别为50.00%和64.28%,在鳞癌(含大细胞癌)组织中分别为33.33%和75.00%,1例小细胞癌两异构体均阳性。应用凝胶成像仪测量各指标灰度值后显示,肺癌组织两异构体表达水平明显高于对照组(P值均<0.05);livinα在腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05),而livinβ在腺癌、鳞癌中表达无明显差异(P>0.05);caspase-3在肺癌组织中的表达明显低于对照组(P<0.01),livin各异构体表达水平、两异构体水平总和皆与caspase-3表达水平呈负相关(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。livin两异构体在术前化疗的肺癌组织中表达似乎较未化疗者高,但差异无统计学意义(P>0.05),而且其表达与肺癌是否发生淋巴结转移亦无明显相关性(P>0.05)。结论livin两异构体在不同病理类型肺癌组织中表达不一致,可能与不同病理类型肺癌发生有关;livin表达与caspase-3表达呈负相关,可能与livin具抗凋亡作用有关;livin高表达似乎与化疗诱导有关,而与肺癌是否转移无明显相关。

COX-2和Survivin、cIAP-2、Livin在肝癌组织中的表达及相关性研究

目的研究肝细胞癌中COX-2和凋亡抑制蛋白Sur-vivin、cIAP-2、Livin的表达情况及相关性。方法采用组织芯片平台,应用免疫组织化学方法检测114例肝细胞癌中COX-2和凋亡抑制蛋白Survivin、cIAP-2、Livin的表达。结果肝癌组织中的COX-2、Survivin、cIAP-2、Livin的阳性率分别为71.05%、77.19%、63.46%、16.67%;COX-2和Survivin蛋白的表达成显著正相关(r=0.192,P<0.05),COX-2和cIAP-2、Livin蛋白的表达无相关性(P>0.05);COX-2和Survivin、cIAP-2、Livin的表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期均无相关性(P>0.05)。结论在肝细胞癌中COX-2、Survivin、cIAP-2均高表达,Livin为低表达。COX-2与Survivin的表达呈显著正相关,COX-2表达与cIAP-2和Livin的表达无相关性。

恶性肿瘤细胞及组织中凋亡抑制蛋白livin的表达及其临床意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白livin的两种异构体livinα、和livinβ在多种肿瘤细胞系及肿瘤组织中的表达及其与各类肿瘤临床病理的关系。方法:采用RT-PCR法检测HeLa、SBC-2等12种肿瘤细胞和50例不同肿瘤组织及20例癌旁组织中livinα和livinβ的mRNA的表达水平。结果:12个细胞系中8个细胞系的livin mRNA表达为阳性,分别为HeLa、SPCA-1、SBC-2、PC14、MKN45、LOVO、HHCC、A549,其中A549为弱表达,且livinα的表达强于livinβ;HL-7702、Hep-2、7721、K562四种细胞中livin表达为阴性;50例肿瘤组织中livin mRNA表达阳性率为64.0%,而在癌旁组织中为2%。Livin mRNA的表达与肿瘤患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期均无明显相关性。结论:Livin在肿瘤细胞系及肿瘤组织中表达的研究,为进一步研究livin与肿瘤的发生、发展的关系,及其以livin为靶位的肿瘤基因治疗研究提供了有力依据。

Livin异构体特异性基因沉默诱导肺腺癌SPC-A1细胞凋亡

目的:利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其在诱导SPC-A1细胞凋亡效应中的不同作用及价值。方法:在肺腺癌SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),观察SPC-A1细胞形态、增殖等生物学行为的改变,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:Livinα+β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞克隆形成能力较对照组显著下降(P<0.05);转染后SPC-A1细胞发生凋亡,TUNEL法显示细胞凋亡指数分别为(9.20±1.90)%、(6.75±1.20)%和(4.82±1.20)%,(流式细胞仪检测)细胞凋亡率分别为(7.48±1.30)%、(5.50±0.90)%和(4.16±0.70)%。结论:Livinα和β两种异构体均能作为诱导肺癌细胞凋亡的分子靶点,Livin基因沉默靶向诱导肺癌细胞凋亡可能作为手术、化疗、放疗等传统治疗的辅助手段。

一种新的凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 探讨一种新的凋亡抑制蛋白 (inhibitorofapoptosisprotein ,IAP)Livin两种异构体Livinα和Livinβ在非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC组织类型、放化治疗的关系。方法 采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)检测NSCLC组织中Livinα和LivinβmRNA的表达 ,并用westernblot分析Livin蛋白的表达。 结果 4 8例NSCLC组织中Livin表达阳性率为 2 2 .9% ,其表达与NSCLC组织学类型相关 ,腺癌中Livin表达阳性率达 4 5 .5 % ,明显高于鳞癌和大细胞癌 (P <0 .0 1 ) ,而癌旁组织和良性疾病肺组织未检出阳性结果 ;Livin表达还与肿瘤治疗相关 ,放化治疗可明显诱导Livin表达 (P <0 .0 1 )。结论 Livin异构体在非小细胞肺癌组织中表达 ,作为肺腺癌的分子标志物 。

原发性肝细胞癌组织中Livin和Smac蛋白的表达

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)组织中Livin和Smac蛋白的表达。方法:采用免疫组织化学法检测50例HCC组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中Livin和Smac蛋白的表达情况。结果:HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Livin阳性率分别为84.0%(42/50)、32.0%(8/25)和0,与非肝癌组织比较,HCC组织中Livin阳性率较高(χ2=27.840,P<0.01)。HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Smac的阳性率分别48.0%(24/50)、88.0%(22/25)、100%(15/15),与非肝癌组织比较,HCC组织中Smac阳性率较低(χ2=28.373,P<0.01)。Livin和Smac蛋白的表达均与HCC组织的分化程度无关(P>0.05)。HCC组织中Livin和Smac蛋白的表达呈负相关(rs=-0.236,P<0.05)。结论:Smac和Livin蛋白可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环。

Livin mRNA和Livin蛋白在食管癌组织中的表达

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosisprotein,IAP)家族中的新成员Livin在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床病理的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结合银染技术检测食管癌组织中Livinα mRNA和Livinβ mRNA的表达,并用westernblot分析Livin蛋白的表达。结果36例食管癌组织中Livin表达阳性率为50.0%,其表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移呈正相关(P<0.05),而与癌组织分化程度无关(P>0.05)。而18例癌旁正常食管组织中Livin低表达,阳性率为5.6%(P<0.01)。结论Livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。

livin基因在胃癌中的表达研究

目的:探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白livin表达情况及其与临床病理因素的关系。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌组织中livinα、livinβmRNA的表达。结果:45例胃癌组织中RT-PCR检测livin表达阳性率为48.8%、,而在正常和癌旁组未检出阳性结果;livin的表达与组织分化和淋巴结转移有关,组织分化差,淋巴结转移者livin表达率高(P<0.05)。结论:livin在胃癌组织中表达增高,可作为胃癌的分子标志物,可能成为胃癌诊断和治疗的新分子靶点。

食管鳞状细胞癌组织中凋亡抑制蛋白Livin的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中凋亡抑制蛋白家族新成员Livin及其2种异构体Livinα和Livinβ的表达情况。方法:采用实时逆转录PCR(real-time RT-PCR)方法检测46例食管鳞状细胞癌组织及其对应的癌旁正常组织中Livinα mRNA和Livinβ mRNA的表达,并用免疫组织化学方法检测Livin蛋白的表达。结果:46例食管鳞状细胞癌组织中Livinα mRNA、Livinβ mRNA和蛋白的阳性表达率分别为82.6%(38/46)、82.6%(38/46)和93.5%(43/46),而对应癌旁正常组织中Livinα mRNA、Livinβ mRNA和蛋白的阳性表达率分别为43%(2/46)、6.5%(3/46)和6.5%(3/46),均低于癌组织中的表达(P<0.05)。食管鳞状细胞癌组织中Livin2种异构体同时表达,且Livinβ mRNA与Livinα mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:食管鳞状细胞癌组织中存在LivinmRNA及蛋白高表达现象,可能与食管鳞状细胞癌的发生、发展密切相关。

膀胱癌组织中Livin的表达变化及意义

目的观察膀胱癌组织中凋亡抑制蛋白Livin的表达,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测69例膀胱癌组织及10例正常膀胱黏膜组织中Livin,分析其与膀胱癌临床病理指标的关系。结果 Livin在膀胱癌组织中的阳性表达率为65%(45/69),在正常膀胱黏膜组织中不表达;Livin表达与膀胱癌病理分级、临床分期及病灶数量无关(P>0.05),与肿瘤的复发有关(P<0.05)。结论膀胱癌组织中Livin呈高表达,其可作为膀胱癌诊断及预后判断的一项重要指标。

凋亡抑制因子Livin在肺癌围手术期检测的临床研究

目的:通过检测凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌患者围手术期血清中的含量,分析其围手术期变化趋势,探讨Livin在非小细胞肺癌诊断、分级、预后判断的临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)对40例非小细胞肺癌患者术前、术后血清中Livin的表达水平及20例正常健康人血清Livin水平进行检测。结果:非小细胞肺癌患者血清Livin水平明显高于健康对照组;术前(中位数526.49 ng/L,四分位间距357.93～825.57 ng/L)、术后(中位数286.49 ng/L,四分位间距157.93～515.57 ng/L),两组间存在统计学差异(P<0.05);血清Livin平均水平与非小细胞肺癌临床病理学的关系:Ⅰ、Ⅱ期(中位数326.49 ng/L,四分位间距201.54～623.19 ng/L)与Ⅲ期(中位数586.31 ng/L,四分位间距411.79～965.34 ng/L)之间存在统计学差异(P<0.05);肿瘤淋巴结转移11例(中位数562.03 ng/L,四分位间距382.64～982.61 ng/L)与无淋巴结转移29例(中位数344.59 ng/L,四分位间距167.27～646.20 ng/L)之间存在明显差异(P<0.05);组织学高、中、低分化三组间无明显差异(P>0.05)。结论:Livin作为一种新的凋亡抑制蛋白,对非小细胞肺癌诊断、分期具有一定的临床价值。

Livin在人脑胶质瘤中的表达及生物学意义

目的探讨Livin表达与人脑胶质瘤病理分级、分类和预后的相关性。方法采用免疫组化SP法,检测Livin在41例人脑胶质瘤和10例正常人脑组织中的表达。结果Livin在10例正常脑组织中均不表达,而在41例胶质瘤组织中表达阳性率为87.8%(P<0.01)。Livin表达与胶质瘤病理分级明显相关(P<0.05),与胶质瘤病理类型、是否复发无明显相关(P>0.05)。结论Livin在人脑胶质瘤组织中表达上调,提示Livin与胶质瘤病程发展、恶性程度明显相关,在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。

Livin在食管癌中的表达及与Bcl-2相关性研究

目的探讨凋亡抑制蛋白Livin在食管癌组织中的表达及其与Bcl-2之间的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测Livin和Bcl-2在食管癌组织和癌旁正常食管组织中的表达情况。结果Livin在食管癌组织中的表达明显高于癌旁正常食管组织(P<0.01)。Livin表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移呈正相关(P<0.05),而与癌组织分化程度无关(P>0.05)。Bcl-2在食管癌组织中表达明显高于癌旁正常食管组织(P<0.01)。在食管癌组织中Livin与Bcl-2表达呈正相关(P<0.01)。结论Livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。Livin基因与凋亡相关基因bcl-2的异常表达可能在食管癌癌变中起协调作用。

Livin和PTEN在肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Livin和PTEN在肾细胞癌(RCC)中的表达意义及两者的关系。方法应用免疫组化检测44例肾细胞癌组织和10例正常肾组织Livin和PTEN蛋白的表达情况。结果 Livin蛋白在肾细胞癌组织中的表达率为47.7%(21/44),在正常肾组织中不表达,两者有统计学意义(P<0.05);在肾细胞癌中,Livin的表达与临床分期、淋巴结转移均显著相关(P<0.05);PTEN蛋白在肾癌组织中的表达率为38.6%(17/44),在正常肾组织中表达率为100.0%,两者有统计学意义(P<0.05);在肾细胞癌中,PTEN的表达与临床分期、组织分级、淋巴结转移均显著相关(P<0.05);Livin在肾细胞癌组织中异常高表达,而PTEN低表达,两者表达呈显著负相关性(γ=-0.326,P<0.05)。结论 Livin和PTEN可能成为RCC的重要诊断指标和基因治疗靶点。

乳腺癌中Livin的表达与癌细胞凋亡相关性的研究

目的:探讨凋亡抑制基因Livin在乳腺癌组织中的表达与细胞凋亡的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测乳腺癌组织中Livin mRNA的表达,并用western blot分析Livin蛋白的表达。应用流式细胞术检测乳腺癌细胞的凋亡水平。结果:40例乳腺癌组织中有26例Livin表达,阳性率为65.00%,而13例癌旁正常乳腺组织中Livin低表达,阳性率为15.39%(P<0.01)。40例乳腺癌组织中,26例乳腺癌组织Livin表达阳性者,肿瘤细胞早期细胞凋亡率为(4.27±0.72)%;14例Livin表达阴性者,肿瘤细胞早期细胞凋亡率为(4.56±0.76)%,两者比较差异有显著性(P<0.05)。结论:Livin在乳腺癌组织中的异常表达与乳腺癌细胞凋亡有关,有望成为乳腺癌基因治疗的新靶点。

凋亡抑制蛋白Livin两种异构体真核表达载体的构建及表达鉴定

目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

突变型p53和凋亡抑制蛋白Livin在胃癌组织中的表达及其相关分析

目的:探讨突变型p53蛋白和凋亡抑制蛋白Livin在胃癌组织中的表达和临床意义以及二者的相互关系。方法:收集48例胃癌石蜡标本及20例癌旁正常组织标本,采用免疫组化法检测p53与Livin蛋白的表达,并分析不同临床、病理因素(性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结有无转移、临床分期)患者p53与Livin蛋白的阳性表达率。结果:胃癌组织中p53、Livin蛋白阳性表达率分别为50.0%、37.5%,两者在20例正常胃组织中无1例阳性表达,差异均有统计学意义(P<0.05);≥60岁、<60岁患者Livin蛋白阳性表达率分别为54.2%、20.8%,差异有统计学意义(P=0.017)。除此之外,其他各临床、病理因素患者胃癌组织中Livin、p53蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05);p53和Livin蛋白在胃癌组织中的表达存在正相关(χ2=8.888,P<0.05,r=0.395)。结论:p53和Livin蛋白在胃癌组织中特异性高表达,可作为诊断指标和治疗靶点,二者在胃癌发生、发展中相互影响。≥60岁胃癌患者Livin表达明显升高,提示凋亡抑制是老年胃癌患者重要的发病原因。