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My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达
1
作者
李晓华
郑升
+2 位作者
刘优萍
骆天红
罗敏
《上海医学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期739-742,762,共5页
目的探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得...
目的探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得融合蛋白,采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)、Western印迹法及质谱进行鉴定。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠杆菌BL-21胞质中,纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE、Western印迹法及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原核表达载体可获高效表达,为进一步研究其功能奠定基础。
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关键词
蛋白
my027
融合蛋白
原核表达
下载PDF
职称材料
脂肪细胞新蛋白My027原核表达、纯化及生物活性研究
2
作者
李晓华
郑升
+2 位作者
刘优萍
骆天红
罗敏
《医学分子生物学杂志》
CAS
CSCD
2008年第4期292-295,共4页
目的通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性。方法RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAG...
目的通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性。方法RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行鉴定。在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法检测产物乳酸谷胱甘肽的生成。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用。
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关键词
蛋门
my027
原核表达
生物活性
原文传递
人脂肪细胞新乙二醛酶的发现及结构功能分析
被引量:
2
3
作者
李晓华
郑升
+2 位作者
刘优萍
骆天红
罗敏
《中华内分泌代谢杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期239-242,共4页
目的通过蛋白组学技术筛选人脂肪细胞新蛋白,并对新蛋白的结构及功能进行分析。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT-PCR及原核表达证实该蛋白在脂肪细胞的表达,再利用生物信息学对新蛋白的结构...
目的通过蛋白组学技术筛选人脂肪细胞新蛋白,并对新蛋白的结构及功能进行分析。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT-PCR及原核表达证实该蛋白在脂肪细胞的表达,再利用生物信息学对新蛋白的结构,同源性及结构域进行预测。结果发现了脂肪细胞表达的新蛋白My027,证实了该蛋白的表达,生物信息学分析显示该蛋白定位于胞浆,具有高度保守的结构域。141-253氨基酸之间有一个完整的乙二醛酶(glyoxalse,GLO)功能域,与GLO的同源性为96.7%,144-244氨基酸序列与GLO I的同源性为95.7%。结论脂肪细胞表达的蛋白My027具有与GLO I基本相同的功能域,很可能具有同样的生理功能。
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关键词
脂细胞
蛋白
my027
结构/功能分析
原文传递
题名
My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达
1
作者
李晓华
郑升
刘优萍
骆天红
罗敏
机构
上海交通大学医学院附属瑞金医院
上海市内分泌代谢病研究所
上海交通大学附属第一人民医院内分泌科
出处
《上海医学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期739-742,762,共5页
基金
973项目及863项目子课题(2002BA711A05)
上海市重点学科建设(Y0204)资助项目
文摘
目的探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得融合蛋白,采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)、Western印迹法及质谱进行鉴定。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠杆菌BL-21胞质中,纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE、Western印迹法及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原核表达载体可获高效表达,为进一步研究其功能奠定基础。
关键词
蛋白
my027
融合蛋白
原核表达
Keywords
protein my027
Fusion
protein
Eukaryotic expression
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
脂肪细胞新蛋白My027原核表达、纯化及生物活性研究
2
作者
李晓华
郑升
刘优萍
骆天红
罗敏
机构
上海市内分泌代谢病研究所上海交通大学附属瑞金医院内分泌代谢病科
出处
《医学分子生物学杂志》
CAS
CSCD
2008年第4期292-295,共4页
基金
973项目子课题及863项目子课题(No.2002BA711A05)
上海市重点学科建设项目(No.Y0204)~~
文摘
目的通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性。方法RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行鉴定。在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法检测产物乳酸谷胱甘肽的生成。结果融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确。结论人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用。
关键词
蛋门
my027
原核表达
生物活性
Keywords
protein my027
eukaryotic expression
biological activity
分类号
R589 [医药卫生—内分泌]
原文传递
题名
人脂肪细胞新乙二醛酶的发现及结构功能分析
被引量:
2
3
作者
李晓华
郑升
刘优萍
骆天红
罗敏
机构
上海市内分泌代谢病研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院内分泌代谢病科上海市内分泌代谢病临床医学中心
出处
《中华内分泌代谢杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期239-242,共4页
基金
973项目子课题及863项目子课题(2002BA711A05)
上海市重点学科建设项目(Y0204)
文摘
目的通过蛋白组学技术筛选人脂肪细胞新蛋白,并对新蛋白的结构及功能进行分析。方法利用双向电泳及质谱技术观察人脂肪细胞蛋白表达谱,对发现的新蛋白先通过RT-PCR及原核表达证实该蛋白在脂肪细胞的表达,再利用生物信息学对新蛋白的结构,同源性及结构域进行预测。结果发现了脂肪细胞表达的新蛋白My027,证实了该蛋白的表达,生物信息学分析显示该蛋白定位于胞浆,具有高度保守的结构域。141-253氨基酸之间有一个完整的乙二醛酶(glyoxalse,GLO)功能域,与GLO的同源性为96.7%,144-244氨基酸序列与GLO I的同源性为95.7%。结论脂肪细胞表达的蛋白My027具有与GLO I基本相同的功能域,很可能具有同样的生理功能。
关键词
脂细胞
蛋白
my027
结构/功能分析
Keywords
Adipocytes
protein my027
Structure and function
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
My027融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌的表达
李晓华
郑升
刘优萍
骆天红
罗敏
《上海医学》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
2
脂肪细胞新蛋白My027原核表达、纯化及生物活性研究
李晓华
郑升
刘优萍
骆天红
罗敏
《医学分子生物学杂志》
CAS
CSCD
2008
0
原文传递
3
人脂肪细胞新乙二醛酶的发现及结构功能分析
李晓华
郑升
刘优萍
骆天红
罗敏
《中华内分泌代谢杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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