微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

含砷中药青黄散方案治疗超高龄伴TP53突变高危骨髓增生异常综合征1例并文献复习

骨髓增生异常综合征(MDS)是起源于造血干细胞的克隆性、髓系肿瘤性疾病,其伴原始细胞增多亚型及伴肿瘤蛋白53(TP53)基因突变均与高危疾病预后分层相关,其中TP53基因突变还与治疗耐药相关。高龄MDS患者的器官功能下降,合并症多,移植不可行,且多数不能耐受化疗、去甲基化药物治疗。患者为超高龄男性,确诊MDS伴原始细胞增多Ⅰ型,初诊时全血细胞进行性下降且需输血支持,修订版国际预后评分系统极高危,伴TP53基因突变。与同类患者比较,应用含砷中药青黄散方案治疗后中位生存期延长,血象三系有不同程度改善,生活质量提高,未发生治疗相关不良反应,耐受性良好,达到高龄MDS患者提高生活质量、延长生存期的治疗目标。本文回顾患者病历资料及应用含砷中药青黄散方案治疗过程,并结合国内外相关文献对高龄MDS的临床特点、治疗方法及相关基因突变特征进行分析,以期为高龄或超高龄预后不良MDS患者的治疗提供借鉴。

P^（53） PROTEIN OVEREXPRESSION IN PREMALIGNANT AND MALIGNANT LESIONS OF ORAL MUCOSA：IMMUNOHISTOCHEMICAL OBSERVATION

Ｐ^（５３） ＰＲＯＴＥＩＮ ＯＶＥＲＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＩＮ ＰＲＥＭＡＬＩＧＮＡＮＴ ＡＮＤ ＭＡＬＩＧＮＡＮＴ ＬＥＳＩＯＮＳ ＯＦ ＯＲＡＬ ＭＵＣＯＳＡ：ＩＭＭＵＮＯＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬ ＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＰ^（５３）ＰＲＯＴＥＩ...

P^(53) FUSION PROTEIN EXPRESSION IN PROKARYOTE AND PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODY TO P^(53)

Objective: Conventional immunohistochemistry (IHC) is available to assess P53 mutations, and expensive imported antiP53 monoclonal antibody has been used in China, it is necessary to study a new monoclonal antibody. Methods: The P53 DNA fragment enconding Nterminal 180 amiao acide was obtained by PCR and was cloned into PGEX2T plasmid expressing glutathione Stransferase (GST). The P53GST fusion protein expressed by JM109 was used for immunizing BALB/C mice. We have raised one hybridoma strain secreting McAb to human P53 (named M126). Results: The IHC analysis of 52 paraffinembedded sections from human breast cancer with M126 and PAB1801 (Zymed Co.) has showed that the positive immunoreactions were 25 cases (48%) and 22 cases (42.3%) respectively. The staining of M126 was stronger and preferable to PAB1801. Conclusion: M126 can be instead of PAB1801 for studying immunohistochemical analysis on P53 protein.

TP53INP1介导TGF-β1对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响

目的 分析肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1(TP53INP1)介导转化生长因子-β1(TGF-β1)对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响。方法 选取2019年3月至2022年3月膀胱癌切除术的患者癌组织、癌旁组织标本40例,检测TP53INP1、TGF-β1表达量。膀胱癌细胞传代培养后分为TP53INP1-NC组、TP53INP1组、TGF-β1-NC组、TGF-β1组、TP53INP1+anti-TGF-β1-NC组、TP53INP1+anti-TGF-β1组。分析各组细胞增殖、凋亡、迁移情况。结果 与癌组织比较,癌旁组织TP53INP1、TGF-β1表达量较低(P<0.05)。与TP53INP1-NC组比较,TP53INP1组TP53INP1、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、上皮性钙黏附素(E-cadherin)表达量、凋亡率水平较高,增殖率、细胞迁移数水平、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达量较低(P<0.05)。与TGF-β1-NC组比较,TGF-β1组TGF-β1、Bax、Caspase-3、E-cadherin表达量、凋亡率水平较高,增殖率、细胞迁移数水平、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达量较低(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,与TGF-β1-NC组比较,TGF-β1组WT-TP53INP1荧光素酶活性降低(P<0.05),对MUT-TP53INP1荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。与TP53INP1+anti-TGF-β1-NC组比较,TP53INP1+anti-TGF-β1组TGF-β1、Bax、Caspase-3、E-cadherin表达量、凋亡率水平较低(P<0.05),增殖率、细胞迁移数水平、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达量较高(P<0.05)。结论 TP53INP1可能通过靶向作用于TGF-β1而参与膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移,为膀胱癌诊治提供了新方向。

戊四氮致痫大鼠脑P^(53)蛋白表达与神经细胞凋亡关系的研究

目的 探讨戊四氮诱导癫痫发作大鼠脑 P53蛋白表达与神经细胞凋亡的关系。方法 采用戊四氮诱导癫痫发作大鼠模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)法和免疫组织化学方法分别检测大鼠脑海马 CA1 区神经细胞凋亡及 P53蛋白表达的动态变化。结果 戊四氮致痫后 6 h海马周白质出现 P53蛋白较弥散的表达 ,12 h时海马 CA1 区可见少量锥体细胞凋亡 ,细胞核出现 P53蛋白的微弱表达 ,2 4 h时凋亡的锥体细胞数明显升高 ,P53蛋白表达开始增加 ,至 4 8h两者同时达高峰 (P <0 .0 0 1) ,此后开始下降。结论 P53是调节戊四氮诱导癫痫发作大鼠脑神经细胞凋亡的重要分子之一。

达纳康抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后P^(53)蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的 研究达纳康在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用及其分子机制。方法 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉 ( MCAO)缺血 1h再灌注 2 4 h模型 ,18只雄性大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组和达纳康治疗组 ,每组 6只。采用 Zea- L onga评分法观察神经功能缺损程度 ,采用免疫组织化学方法、TUNEL 法分别观察各组 P53蛋白表达和细胞凋亡。结果 假手术组神经功能缺失评分为 0分 ,高倍视野下无 P53蛋白染色阳性细胞及凋亡细胞 ;达纳康治疗组神经功能缺失评分 ( 0 .4 8± 0 .3 7分 )、P53蛋白染色阳性细胞数 ( 5 .16± 1.84个 /高倍视野 )、凋亡细胞数 ( 4 .18± 1.2 1个 /高倍视野 )均较生理盐水对照组 ( 2 .76± 0 .82分、10 .4 3± 1.5 6个 /高倍视野、8.16± 1.5 0个 /高倍视野 )显著减少 ( P<0 .0 1)。结论 达纳康可明显减轻局灶性脑缺血再灌注损伤 ,其抑制神经细胞P53蛋白的表达 ,进而抑制细胞凋亡 ,是其脑保护作用的分子机制之一。

有和无内分泌分化大肠癌P^(53)和表皮生长因子受体表达的比较研究

目的：研究大肠癌内分泌分化与P53表皮生长因子受体（EGFR）表达的关系及意义。方法：采用免疫组织化学ABC法，检测79例大肠癌手术切除组织中嗜铬蛋白A（CGA），P53及EGFR的表达变化。结果：大肠癌组织中CGA，P53及EGFR的表达率分别为：35.4％（28／79〕，60．8％(48／79）和30．4％（24／79），有内分泌分化的大肠癌P53表达率及其免疫阳性细胞数分别为78．6％（22／28）和984．3士702．0／mm2，无内分泌分化者分别为51．0％和589．5士489．5／mm2，前者明显高于后者（P<O．025；P＜0．05）。有和无内分泌分化的大肠癌EGFR的表达率分别为46．4％（13／28）和21．6％（11／51），差异有显著性（P＜0．025）。结论：有内分泌分化的大肠癌P53及EGFR的表达明显高于无内分泌分化者。

亚低温对脑缺血区P^(53)蛋白表达的影响

目的 在尿激酶溶解大鼠脑血栓治疗中，研究亚低温对溶栓复流后大脑中动脉缺血区 Ｐ５３蛋白表达的影响。方法 应用肾血管性高血压大鼠（ Ｒ Ｈ Ｒ Ｓ Ｐ），用光化学法制成一侧大脑中动脉闭塞（ Ｍ Ｃ Ａ Ｏ）模型，在血栓形成后 ０．５ｈ 应用尿激酶静脉溶栓复流后，用免疫组织化学的方法研究 Ｐ５３蛋白的表达。结果 亚低温组 Ｐ５３蛋白的表达，明显弱于正常体温组。结论 亚低温降低脑缺血区域的 Ｐ５３蛋白的表达，可能是亚低温产生脑保护的机制之一。

神经生长因子对红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡和野生型P^(53)表达的影响

目的 探讨外源性神经生长因子 ( NGF)对癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡与野生型 P5 3 ( wt P5 3 )蛋白表达有无抑制作用。方法 采用 KA诱导癫痫发作大鼠模型。以 TUNEL方法标记 DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化 SP法检测 wt P5 3 蛋白。观察大鼠癫痫发作 4 0 h(注射 KA4 8h)后其海马 CA1神经细胞凋亡和 wt P5 3 蛋白表达情况及外源性 NGF对它们的影响。结果 大鼠急性癫痫发作后 ,其凋亡细胞和 wt P5 3 蛋白表达均明显增加 ,wt P5 3 蛋白表达与细胞凋亡呈正相关 ( r =0 .83 9,P <0 .0 1 ) ;给予 NGF,凋亡细胞数及 wt P5 3 表达均显著性降低 ( P<0 .0 1 )。结论 外源性 NGF对癫痫所致神经细胞凋亡有抑制作用 ,其抑制凋亡的分子机制可能是通过抑制 wt P5 3蛋白表达而实现的。

大鼠全脑缺血再灌流后脑组织P^(53)及P^(21)蛋白的表达

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌流后Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达及其与迟发性神经元死亡（ＤＮＤ）的关系。方法 在４ 血管闭塞法全脑缺血模型上，采用ＨＥ及ＬＳＡＢ染色法，观察脑组织病理改变，检测脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，以及蛋白合成抑制剂放线菌酮对其的影响。结果 全脑缺血１５ ｍ ｉｎ 再灌流后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，且两者分布接近。海马结构、丘脑、下丘脑等白质区（再灌流后６ ｈ）较皮层、海马的神经细胞核（２４ ｈ）先检测到Ｐ５３、Ｐ２１蛋白，７２ ｈ 表达达高峰。并且以缺血损伤最严重的海马ＣＡ１ 区Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达为强。另外，放线菌酮可抑制脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，并对ＤＮＤ具有一定的保护作用。结论 全脑缺血再灌流损伤后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，放线菌酮可抑制其表达，并对ＤＮＤ起保护作用，提示Ｐ５３、Ｐ２１蛋白参与了全脑缺血后ＤＮＤ的凋亡机制。

康尔爱片诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡及对P^(53)基因表达影响的研究

目的 :观察康尔爱片诱导人胃腺癌SGC - 90 1细胞凋亡及对P5 3基因表达的影响。方法 :应用流式细胞仪检测康尔爱片体外给药后人胃腺癌SGC - 790 1细胞DNA含量变化和P5 3基因表达情况。结果 :康尔爱片中、大剂量组细胞凋亡百分率分别为 9.0 6 %、96 .32 % ,与对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) ;小、中、大 3个剂量组P5 3基因表达率分别为 95 .0 9%、89.47%、5 2 .0 4% ,与对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1)。结论 :康尔爱片中、大剂量组可以明显诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡 ,且小、中、大 3个剂量组均可降低突变型P5 3基因表达率。

PCNA与P^(53)蛋白在先天性胆管扩张症患者胆管中的表达及意义

目的 增殖细胞核抗原 (PCNA)与抑癌蛋白 (P53蛋白 )在先天性胆管扩张症 (CBD)胆管粘膜上皮细胞中的表达 ,了解上皮细胞的增殖分化情况 ,探讨可能的胆管癌变机制。方法 应用免疫组化方法检测胆管上皮中 PCNA与 P53蛋白表达 ,以胆管癌和正常胆总管组织作为对照 ,进行相关关系分析。结果 CBD的 PCNA与P53蛋白表达阳性率为 (4 3.5± 2 5 .5 ) %和 (2 8.5± 2 0 .0 ) % ,正常胆管表达阳性率为 (7.4± 5 .0 ) %和 (1.0± 2 .5 ) % ,胆管癌为 (74 .9± 18.9) %和 (6 4 .5± 16 .8) %。三者之间差别有极显著差异。 PCNA在化生部位表达率增高。结论 CBD胆管上皮细胞的增殖分化处于高增殖状态 。

尼膜同对戊四氮致痫大鼠海马神经细胞凋亡和p^(53)蛋白表达的影响

目的 :探讨尼膜同对癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡与 p53蛋白表达的影响。方法 :采用戊四氮致痫大鼠模型 ,以原位末端标记 ( TUNEL)法检测凋亡细胞 ;免疫组化法检测 p53蛋白。观察大鼠癫痫发作后 48h其海马 CA1区神经细胞凋亡和 p53蛋白表达变化及尼膜同对它们的影响。结果 :戊四氮致痫后 ,大鼠海马 CA1区凋亡细胞和 p53蛋白表达均明显增加 ,p53蛋白表达与细胞凋亡呈正相关 ( r=0 .846,P<0 .0 0 1 ) ;尼膜同干预后 ,凋亡细胞数及 p53蛋白表达均显著性降低 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :尼膜同对癫痫所致神经细胞凋亡有抑制作用 ,其抑制凋亡的分子机制可能是通过抑制

SRRS方剂抑制消化道恶性肿瘤P^(53)基因突变的实验研究

目的：从分子水平探讨ＳＲＲＳ方剂治疗消化道癌的可能机制。方法：选用Ｌｏｖｏ结肠腺癌细胞裸小鼠移植瘤模型，观察中药ＳＲＲＳ方剂抑制移植瘤生长的作用，并用ＰＣＲＳＳＣＰ银染色法研究ＳＲＲＳ方剂对Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因突变的影响情况。结果：对照组有５０％（５／１０）发生Ｐ５３基因第七外显子突变，ＳＲＲＳ方剂治疗组无（０／１０）此现象（Ｐ＜００５）。结论：提示ＳＲＲＳ方剂能抑制Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因的突变。

P^(53)蛋白、增殖细胞核抗原及胎盘型谷胱甘肽S—转移酶在胃癌中的表达及其意义

目的：研究胃癌中Ｐ５３、ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达及意及。方法：应用免疫组织化学ＳＰ方法检测５例正常胃组织和５４例胃癌组织中Ｐ５３蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴπ）的表达水平。结果：５例正常组织中未见Ｐ５３ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达。５４例胃癌组织中Ｐ５３，ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ阳性检出率分别为６１１１％，７０３７％和６８５２％。表达阳性Ｐ５３和ＰＣＮＡ均定位于肿瘤细胞核内，ＧＳＴπ定位于胞浆。Ｐ５３、ＰＣＮＡ和ＧＳＴπ表达率与胃癌组织类型和淋巴转移关系密切。结论：检测Ｐ５３。

唾液腺腺样囊性癌P^(53)基因蛋白表达与临床病理特征的关系

目的 探讨唾液腺腺样囊性癌(ACC) P53基因蛋白表达与临床病理特征的关系。方法 选择38例唾液腺ACC病理标本,采用免疫组织化学法进行P53基因蛋白检测。分析P53基因蛋白表达与ACC病理类型、局部复发、远处转移及临床分期的关系。结果 P53基因蛋白检出率为6 0 .5 % ,其过度表达与唾液腺ACC的复发、远处转移及术后生存有关(P均<0 .0 5 ) ,与肿瘤病理类型、临床分期无关(P均>0 .0 5 )。结论 P53基因蛋白过度表达在唾液腺ACC中有较高的检出率。

胃粘膜异型增生的PCNA、P^(53)和C-erbB-2表达及其诊断价值

应用免疫组化SP方法，对65例异型增生胃粘膜PCNA（PC10）、CerbB－2（PAb1）和P53蛋白进行了测定。胃粘膜异型增生Ⅰ级PCNA平均指数22．34％，Ⅱ级32．58％，Ⅲ级46．08％，各组间比较差异有显著性（P＜0．01），PCNA平均指数与异型增生病理分级间有很好地相关性（r＝0．966，P＜0．0005）；Ⅰ、Ⅱ级异型增生无P(53)和C－erbB－2蛋白表达，Ⅲ级中P(53)蛋白阳性8例（32％），C－erbB－2蛋白阳性7例（28％）。本文还就PCNA指数和P(53)、C－erbB－2蛋白表达的意义进行了讨论。

20例原发性输卵管癌组织中ER、PR与p^(53)蛋白的表达

目的：分析原发性输卵管腺癌的ＥＲ、ＰＲ及ｐ５３蛋白的表达，研究其与该肿瘤的临床分期、病理分级及患者预后的关系。方法：材料选自２０份原发性输卵管腺癌及１０份正常输卵管组织的存档石蜡包埋标本，采用免疫组化法检测。结果：在２０份原发性输卵管癌标本中，ＥＲ、ＰＲ的阳性表达率分别为２５％和１５％，稍高于正常输卵管组的１０％，但差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；ｐ５３蛋白在癌症组的阳性表达率为４０％，对照组则无１例阳性表达，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；ｐ５３蛋白在晚期、分化差及预后不良的输卵管癌病例中的表达呈上升趋势，但未达到统计学意义（Ｐ＞０．０５）；对侧输卵管炎症的存在与ｐ５３蛋白的阳性表达呈负相关（Ｐ＜０．０５）。结论：在原发性输卵管癌中，ＥＲ、ＰＲ有一定程度的表达，但均较低；ｐ５３基因的突变可能参与了该肿瘤的发生，并可作为综合判断其恶性程度及患者预后的指标之一。

PCNA、P^(53)的过度表达与喉鳞癌预后的关系

探讨PCNA、P^(53)的过度表达与喉癌预后的关系。方法：应用免疫组化ABC法对56例喉鳞癌和7例喉正常组织检测。结果：56例喉癌中，PCNA、P^(53)阳性率分别为71．4％和51．8％。正常组织染色阴性。喉癌的临床分期、有无淋巴结转移和患者术后3年生存率与PCNA、P^(53)阳性表达率关系密切。结论：PCNA、P^(53)的过度表达与喉癌的不良预后有关。