转化生长因子胞内信号蛋白Smad2/3在糖尿病大鼠肾脏表达的动态观察及意义研究

目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1及其下游信号分子Sm ad2/3在肾脏的表达及定位变化,探讨TGF-β1-Sm ad2/3信号通路在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发病机制中的作用。方法:链脲菌素诱导大鼠糖尿病肾病,以免疫组化、W estern b lotting及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察糖尿病肾病发生发展过程中大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2/3蛋白及mRNA表达,并以RT-PCR方法观察结缔组织生长因子(CTGF)、胶原-3(COL-Ⅲ)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)mRNA表达。结果:TGF-β1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管表达明显多于正常组(P<0.05);Sm ad2/3蛋白主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;Sm ad2/3蛋白及mRNA从2周起表达明显多于正常对照组(P<0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。16周DN组大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2、CTGF、COL-Ⅲ、PAI mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:TGF-β1-Sm ad2/3信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化形成的信号转导过程,伴随着Sm ad2/3信号蛋白表达的增多及入核增加,CTGF、COL-Ⅲ、PAI-1等基因转录增加,导致肾脏细胞外基质的大量沉积,这是细胞因子TGF-β1导致糖尿病肾病肾纤维化进展可能的信号转导途径之一。

上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的:探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Sm ad7对TGF-β1作用下大鼠腹膜间皮细胞Sm ad2表达的影响。方法:通过脂质体介导的方法,将表达Sm ad7的重组质粒(PCDNA3-Sm ad7)转染培养的大鼠腹膜间皮细胞,分别培养于不同浓度TGF-β1培养液(0、1.25、2.5和10μg/L),用RT-PCR及W estern b lotting的方法检测不同时间(0、5、15、30、60和120 m in)Sm ad2、Sm ad7表达的水平。结果:正常间皮细胞Sm ad2 mRNA和蛋白在TGF-β1刺激后5 m in开始表达,呈时间依赖性,在30 m in达到高峰,而后逐渐减弱;Sm ad7 mRNA和蛋白也在TGF-β1刺激后5 m in可见表达,但此后逐渐减弱,30 m in达到最低,60 m in又开始逐渐增强。Sm ad2和Sm ad7mRNA和蛋白,随TGF-β1浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Sm ad7 mRNA和蛋白表达显著上调,并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β1刺激下,Sm ad2 mRNA及蛋白的表达均低下,刺激0、5、15、30、60和120 m in后Sm ad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%(P<0.05)。Sm ad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%(P<0.05)。结论:上调表达抑制性信号蛋白Sm ad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Sm ad2的表达和活性,提示Sm ad7可能对TGF-β1起反向调控作用。

肝细胞癌组织中高尔基体蛋白73和转化生长因子β_1及Smad2的表达水平及其意义

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)及转化生长因子β(TGF-β)/Smads信号通路与肝细胞癌(肝癌)的关系。方法选取2010年1月—2014年12月新疆医科大学第一附属医院病理科收集的80例肝癌患者的肝癌组织及癌旁组织蜡块标本,并从本院病案室调阅患者的临床病历资料,包括性别、年龄、乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、血清甲胎蛋白(AFP)水平、有无肝硬化、有无门静脉癌栓、分化程度、TNM分期、有无血管侵犯。采用免疫组织化学En Vision二步法检测肝癌组织和癌旁组织GP73、TGF-β1和Smad2的阳性表达情况和积分光密度(IOD)。结果GP73定位于胞质,呈棕黄色颗粒。肝癌组织GP73阳性表达率为73.8%(59/80),高于癌旁组织的5.0%(4/80)(χ2=76.50,P<0.05)。TGF-β1和Smad2主要表达于胞质,偶见于胞核,为棕黄色深染颗粒。肝癌组织TGF-β1阳性表达率为81.2%(65/80),高于癌旁组织的6.2%(5/80)(χ2=65.67,P<0.05);肝癌组织Smad2阳性表达率为66.2%(53/80),高于癌旁组织的10.0%(8/80)(χ2=47.62,P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,GP73与TGF-β1、Smad2呈正相关(rs=0.841、0.405,P<0.05)。不同性别患者肝癌组织GP73、Smad2表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),TGF-β1表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、HBs Ag、AFP、有无肝硬化及门静脉癌栓患者肝癌组织GP73、TGF-β1和Smad2表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、TNM分期、有无血管侵犯患者肝癌组织GP73、TGF-β1和Smad2表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GP73在肝癌组织中多呈阳性表达,其可能通过调控TGF-β/Smads信号通路参与肝癌的发生与发展。

胃癌组织中TGF-β1、Smad2与CyclinD1的表达及其相关性的研究

目的探讨胃癌组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2与细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达及三者之间的相关性。方法选择2007年1月至2012年1月腔镜活检正常胃黏膜20份(正常胃组织)作为对照组,手术切除胃癌标本60份(高-中分化、低分化)作为胃癌组,用免疫组化法检测TGF-β1、Smad2、CyclinD1正常胃组织及胃癌组织中的表达。结果 TGF-β1及CyclinD1在胃癌组织中的表达高于对照组,Smad2在胃癌组中的表达低于对照组;TGF-β1及CyclinD1在低分化胃癌组中的表达高于高-中分化胃癌组;TGF-β1及CyclinD1在无淋巴结转移的胃癌组中的表达低于有淋巴结转移的胃癌组;TGF-β1、CyclinD1在胃癌组中的表达随着TNM分期的提高而升高,高-中分化胃癌组Smad2较低分化胃癌组表达升高,Smad2的表达在无淋巴结转移的胃癌组中的表达高于有淋巴结转移的胃癌组;Smad2在胃癌中的表达随TNM分期的提高而降低,TGF-β1、Smad2及CyclinD1的表达与患病年龄、性别无关;TGF-β1与Smad2呈负相关,TGF-β1与CyclinD1呈正相关,CyclinD1与Smad2呈负相关。结论 TGF-β1、Smad2与CyclinD1的表达与胃癌的发病有关。

不同剂量右美托咪定对脑外科手术全身麻醉患者术后认知功能及TGF-β/Smad通路的影响

目的探讨不同剂量右美托咪定对脑外科手术全身麻醉患者术后认知功能及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法选取2020年1月—2023年1月宁夏医科大学总医院收治的114例行血肿清除术患者为研究对象,分为A、B、C组,每组38例,分别以0.2、0.4、0.8μg/(kg·h)泵注右美托咪定。比较3组患者围手术期指标,血流动力学,镇痛、镇静及认知功能评分,TGF-β1和Smad2水平,以及不良反应发生情况。结果C组丙泊酚用量低于A、B组,B组丙泊酚用量低于A组(P<0.05)。给药后10 min(T1),C组血氧饱和度(SpO2)低于A、B组,B、C组收缩压(SBP)低于A组(P<0.05);拔管时(T2),B、C组心率(HR)、SBP低于A组,C组SpO2低于A、B组(P<0.05)。拔管后15 min(T3),B、C组视觉模拟评分(VAS)低于A组,Ramsay评分高于A组(P<0.05);拔管后30 min(T4),C组VAS评分低于A组,Ramsay评分高于A组(P<0.05);术后1 d和术后3 d,B、C组蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分均高于A组(P<0.05)。术后7 d,B、C组TGF-β1、Smad2水平低于A组,C组TGF-β1、Smad2水平低于B组(P<0.05)。C组恶心呕吐发生率低于A组(P<0.05)。结论脑外科术中以0.8μg/(kg·h)速率静脉泵注右美托咪定可明显减少术中丙泊酚用量及不良反应,维持血流动力学稳定,具有较好的镇痛、镇静作用,且能够改善患者术后认知功能,可能与抑制TGF-β/Smad通路表达有关。

Smad7,Smad3和Smad2在DEHP诱导的尿道下裂大鼠阴茎中的表达

目的研究Smads(7,3和2)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,(DEHP)]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制。方法将SD孕鼠随机分为2组:实验组(将DEHP溶于1.5 mL大豆油中灌胃大鼠)和对照组(以1.5 mL大豆油灌胃大鼠),每组20只,自孕12 d(gestation day,GD12)至19 d(GD19)连续每天定时给药1次。至GD20行剖宫产取出雄性胎鼠,切取阴茎组织,采用实时定量PCR和免疫组化法分别检测胎鼠阴茎中Smad7,Smad3和Smad2三者mRNA和蛋白质表达水平。结果经qP CR检测分析后发现,Samd7,Smad3和Smad2三者mRNA在正常对照组相对于内参GAPDH的表达分别是1.00,0.84和1.14,在DEHP暴露组其相对表达分别是1.87,1.36和1.49,且三者在实验组的表达与正常对照组比较,均升高(P值分别为<0.001,0.041和0.021);观察实验组Smad7和p-Smad2/3蛋白表达水平亦有增加趋势。结论DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中Smads(7,3和2)的过度表达有关。

异佛莱心苷抑制四氯化碳致小鼠肝纤维化的初步研究

目的探讨异佛莱心苷对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl 4)所致小鼠肝纤维化的抑制作用。方法将24只C57BL6J小鼠随机分为空白对照组、肝纤维化模型组、异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组,每组6只。肝纤维化模型组、异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组通过腹腔注射CCl 4建立肝纤维化模型,每周3次,共12周。从第6周起,异佛莱心苷治疗组小鼠每日灌胃异佛莱心苷(10 mmol/L),水飞蓟素治疗组小鼠每日灌胃水飞蓟素100 mg/kg,连续给药6周。采集各组小鼠静脉血,血清检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);肝组织做HE染色、Masson染色和天狼星红染色;组织免疫荧光检测TGF-β1的表达;ELISA法检测各组血清中TGF-β1、IL-1β、IL-6和TNF-α含量;Western印迹法检测肝脏AKT/Smad2通路变化。结果肝纤维化模型组血清ALT和AST较空白对照组显著升高(P<0.05),异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组小鼠血清ALT和AST均较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05),小鼠肝重和肝重/体重也较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05)。两组小鼠肝组织病理学形态较肝纤维化模型组有一定程度的改善。组织免疫荧光显示肝纤维化模型组TGF-β1表达较空白对照组升高;异佛莱心苷和水飞蓟素治疗后肝脏TGF-β1表达降低。异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组炎症指标(TGF-β1、IL-1β、IL-6和TNF-α)较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05)。Western印迹法结果显示肝纤维化后p-Smad2、Smad2和p-AKT蛋白表达显著升高(P<0.05),但异佛莱心苷治疗后肝脏组织中AKT/Smad2表达下降(P<0.05),提示该通路异常激活被抑制。结论异佛莱心苷对小鼠肝纤维化有抑制作用,其作用机制可能与抑制炎症反应和AKT/Smad2通路有关。

磷酸化ERK、TGF-β受体Ⅱ和磷酸化Smad2蛋白在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化ERK(P-ERK)、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)和磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白在食管癌发生、发展中的作用。方法采用Western blot技术检测38份手术切除的食管癌标本和12份癌旁组织标本中P-ERK、TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达。结果食管癌组织中TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达明显低于癌旁组织,P-ERK蛋白表达明显高于癌旁组织,P均<0.05;P-ERK、TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达与食管癌患者年龄、性别及肿瘤组织分化程度、淋巴结转移均无明显相关性;P-ERK、TβRⅡ与P-Smad2蛋白表达亦无明显相关性。结论食管癌组织中存在P-ERK、TβRⅡ和Smad2蛋白表达异常;此可能与食管癌的发病有关。

银屑病患者皮损中转化生长因子-β_1、-β_1受体及其信号转导蛋白Smad2、3的表达

目的:观察银屑病患者皮损与正常人皮肤中T细胞转化生长因子(TGF)-β_1、TGF-β_1受体(TGF-β_1R I、TGF—β_1RⅡ)及其信号转导蛋白Smad2、3的表达,分析TGF—β_1信号转导通路在银屑病发病机制中的作用。方法:采用Real-time PCR(RTPCR)法检测20例银屑病患者皮损及10例正常人皮肤中TGF—β_1、TGF—β_1受体(I、Ⅱ)、Smad(2、3)mRNA的表达,用western blot杂交法检测TGF—β_1、Smad2、3的表达。结果:银屑病患者皮损中TGF—β_1、TGF—β_1R I、TGF—β_1RⅡ及其信号转导蛋白smad2、3的mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.01),TGF—β_1和Smad2、3的蛋白表达明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:T细胞TGF-β1信号转导通路的低表达可能有助于银屑病患者表皮过度增殖状态的发生和发展。

雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾组织Smad2/3蛋白与Ⅳ型胶原的影响

目的:探讨雷公藤多苷(TWP)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中Smad2/3蛋白及Ⅳ型胶原蛋白的影响。方法:将30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组、雷公藤多苷治疗组。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型。建模后,给予治疗组雷公藤多苷药物灌胃治疗;第4、8、12、16周末记录大鼠体重,检测24 h尿蛋白(24 h Pro)定量;第16周末处死大鼠,检测血糖(GLU)和血肌酐(Scr);取大鼠肾组织行HE、Masson染色,进行病理组织学观察;用免疫组化法检测肾组织中Smad2/3蛋白与Ⅳ型胶原的表达;采用实时荧光定量PCR技术检测肾组织中Smad2/3蛋白与Ⅳ型胶原mRNA的表达。结果:雷公藤多苷能够减少实验大鼠24 h尿蛋白,增加体重,降低血Scr水平,改善肾脏病理,降低实验大鼠肾小管上皮细胞Smad2/3及Ⅳ型胶原的表达,雷公藤多苷治疗组与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雷公藤多苷可能通过减轻DN大鼠肾组织Smad2/3及Ⅳ型胶原的表达,从而减轻肾脏纤维化,保护肾脏功能。

PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究

目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞浆表达弱或不表达,病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主,正常、慢性肝炎和肝硬化组织中,PPM1A表达以核为主,胞浆无表达,差别有统计学意义(P<0.05)。②P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显,胞浆表达主要聚集在核周,病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中,P-Smad2表达则以核为主,差别有显著性(P<0.05)。③PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性(r=-0.345,P=0.001)。结论PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系,二者可能通过其相互作用,共同参与肝癌的发生发展机制。

SnoN和Smad2/3信号蛋白与糖尿病大鼠肾小管-间质纤维化的关系

目的观察核转录共抑制因子SnoN和Smad2/3信号蛋白在糖尿病(DM)大鼠肾组织中的动态表达,并初步探讨它们与糖尿病肾病(DN)肾小管-间质纤维化的关系。方法尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,随机分为DM2、4、8、12、16和24周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6)。免疫组化及Western blot法检测肾组织SnoN、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2/3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)的蛋白表达;RT-PCR检测SnoN的mRNA;生化方法测血糖、血肌酐及24 h尿蛋白量。结果DM4周起,肾组织中SnoN蛋白表达明显减少(P<0.01),DM各组SnoN的mRNA表达无变化;TGF-β1、Smad2/3及FN的蛋白表达随DM病程进展逐渐增多;DM12周始,肾小管上皮细胞可见α-SMA阳性表达。结论SnoN蛋白表达减少与TGF-β1/Smad信号通路共同参与了DN的发生发展过程。

Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

目的 :观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达 ,以及Smad2蛋白在转化生长因子 - β1(transforminggrowthfactor- β1,TGF - β1)信号转导中的作用。 方法 :原代培养人牙乳头细胞 ,用TGF -β1和骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein ,BMP2 )刺激培养的细胞 ,免疫组化观察。结果 :TGF - β1和BMP2刺激组均可见Smad2蛋白表达 ,但与对照组相比无明显差异。TGF - β1组可见Smad2从胞浆转位至核内聚集 ,BMP2组未见此作用。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad2蛋白的表达 ,Smad2能特异地转导TGF - β1信号至核内发挥作用 ,提示TGF - β1调控成牙本质细胞分化的作用可能是通过Smad2信号途径实现的。

转化生长因子β及其信号蛋白Smad2/3在牵张成骨早期表达的动态观察

目的通过对牵张成骨新骨生成早期转化生长因子β及Smad2/3的表达情况的观察,分析转化生长因子β和Smad2/3在牵张成骨中的意义,初步探讨牵张成骨的机制。方法20只成年大耳白兔随机分为5组,每组4只。非手术组作为空白对照,其余用自制的垂直型牵张器按1mm/天,每天4次的速率牵张牙槽骨,分别于牵张后4、7、10、14天处死动物取材。标本进行X线、组织学观察和免疫组织化学的检测。结果两周内牵张区有新生骨小梁生成,沿牵张方向排列,免疫组化结果可见在新生骨的区域有Smad2/3的表达,其中第4天起表达水平升高,至第10天仍维持高水平,在14天开始有下降趋势,主要在间充质细胞、成纤维细胞、成骨细胞及增厚的骨膜细胞中表达。结论Smad2/3和转化生长因子β参与兔下颌骨牵张成骨新骨的生成,在牵张成骨早期发挥重要作用。

葱白提取物对心肌梗死模型大鼠心肌纤维化及TGF-β1与Smad2蛋白表达的影响

目的:观察葱白提取物对心肌梗死模型大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1蛋白(TGF-β1)、Smad2蛋白表达的影响,探讨其对心肌纤维化的抑制作用及可能机制。方法:结扎大鼠冠脉左前降支,建立急性心肌梗死(AMI)大鼠模型,造模成功后将其随机分为模型对照组,葱白提取物小、中、大剂量组(简称葱白小、中、大剂量组)及培哚普利组,另设假手术组,只穿线不结扎,每组9只大鼠。造模1周后,以0.9%氯化钠溶液给假手术组及模型对照组灌胃,其余4组以不同剂量相应药物灌胃;连续灌胃12周后,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测6组大鼠血清脑钠素(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量,取左心室心肌做苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色,并采用Western blotting和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分别检测心肌组织TGF-β1、Smad2蛋白和mRNA表达。结果:HE染色显示模型对照组大鼠心肌细胞水肿、坏死明显,结构破坏,排列凌乱;各治疗组大鼠心肌细胞水肿、坏死数量均减少,局部可见完整心肌细胞,炎症细胞浸润面积缩小。Masson染色显示模型对照组大鼠心肌组织破坏严重,心肌细胞残存较少,胶原纤维增加明显,药物治疗后,大鼠完整心肌细胞增多,胶原纤维不同程度减少,葱白大剂量组与培哚普利组抑制心肌纤维化的作用优于葱白小剂量和中剂量组。Image J图像分析Masson切片显示葱白大剂量组与培哚普利组心肌组织原容积分数(CVF)值下降明显。ELISA检测显示模型对照组BNP、TNF-α、IL-6含量较假手术组升高(P<0.01);与模型对照组相比,各治疗组BNP、TNF-α、IL-6含量均有所下降(P<0.01)。Western blotting和PCR检测结果显示,模型对照组较假手术组TGF-β1、Smad2蛋白表达升高明显(P<0.01);与模型对照组相比,葱白大剂量组、葱白中剂量组和培哚普利组TGF-β1、Smad2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:葱白提取物可抑制心肌梗死后心力衰竭大鼠的心肌纤维化,其作用机制可能与减轻炎症反应、抑制TGF-β1/Smads信号传导通路有关。

复方牛胎肝提取物抑制小鼠转化生长因子β1/Smad2信号通路发挥抗纤维化的作用机制

目的研究复方牛胎肝提取物通过抑制肝纤维化小鼠肝脏组织转化生长因子β1/Smad 2通路发挥抗纤维化作用的机制。方法健康雄性ICR小鼠90只,随机分为正常对照组(10只),模型组(20只),治疗组(60只)。治疗组按不同剂量分为大剂量治疗组(20只),中剂量治疗组(20只),小剂量治疗组(20只)。模型组及治疗组皮下注射30%四氯化碳溶液制备肝纤维化小鼠模型。治疗组造模8周后用复方牛胎肝提取物以大、中、小剂量灌胃治疗,1次/d,持续4周;正常组及模型组同期予等量生理盐水灌胃。肝脏组织经HE染色后光学显微镜观察病理变化;采用Real-Time PCR、免疫组织化学及Western蛋白印迹法分别检测正常组、模型组及治疗组TGFβ1、蠕虫果蝇母抗同源蛋白(Smad)2的mRNA及蛋白表达水平。各组间均数比较采用单因素方差分析。方差齐性采用Levene法检验,样本均数比较采用单因素方差分析;方差不齐时采用秩和检验。相关性检验采用Pearson直线相关分析。结果正常对照组TGFβ1、Smad 2 mRNA及蛋白表达量很低,模型组较高,治疗组较模型组表达下降,大剂量治疗组下降最为显著,其他2组随治疗剂量的减少表达逐渐增加;各组TGFβ1、Smad 2 mRNA表达水平差异具有统计学意义(χ2=27.877、26.688,P<0.05)。直线相关性分析显示:各治疗组TGFβ1、Smad 2的mRNA表达水平与治疗剂量均呈负相关(r=-0.967、-0.956,P<0.05)。结论复方牛胎肝提取物能改善小鼠肝脏纤维化程度,并呈剂量依赖性抑制TGFβ1、Smad 2蛋白在肝纤维化组织中的表达,这可能与其抗肝纤维化机制相关。

胃癌组织中p300/CBP、Smad2蛋白表达及其临床意义

目的检测胃癌组织中p300/CBP、Smad2蛋白的表达,探讨p300/CBP在胃癌的发生与发展中的作用。方法采用免疫组化S-P法,检测51例胃癌和51例正常胃黏膜组织中p300/CBP、Smad2蛋白的表达;结果p300/CBP、Smad2在胃癌组织中的免疫组化染色强度分别为(5.2635±1.0047),(5.7027±0.6330),均明显低于相应正常胃黏膜组织分别为(12.9769±0.9274),(15.2297±0.8871),P<0.01。进展期胃癌组织中p300/CBP、Smad2的染色强度分别为(4.4274±1.3970),(4.6574±1.1281),均显著低于早期胃癌组织分别为(6.6684±1.0341),(7.4632±1.2856),P<0.05;伴淋巴结转移组p300/CBP、Smad2的染色强度分别为(4.4092±0.8203),(4.4115±0.7737)显著低于无淋巴结转移组分别为(6.8263±2.0127),(8.0699±0.7854),P<0.05;p300/CBP、Smad2染色强度与胃癌分化程度、患者年龄及性别无显著相关性。胃癌组织中p300/CBP的低表达与Smad2的低表达呈正相关。结论p300/CBP、Smad2在胃癌中的表达水平明显降低,并与胃癌的分期以及淋巴结的转移有关,提示p300/CBP、Smad2低表达使TGF-β信号传导通路受阻,可能参与胃癌的发生发展过程。

鬼箭羽醇提取物通过阻止氧化应激和抑制TNF-α-NF-κB及TβR1-Smad2/3通路减轻兔肾缺血再灌注损伤

目的:探讨鬼箭羽乙醇提取物(EEEA)对家兔肾缺血再灌注损伤(RIRI)的作用及其机制。方法:将30只家兔随机分成正常组、模型组、低剂量EEEA(EEEA-L)组、高剂量EEEA(EEEA-H)组、地塞米松(Dex)组和联合治疗(Dex+EEEA-H)组,每组5只。各组动物分别灌胃药物24 h后,RIRI造模,再继续用相应药物灌胃13 d。其中,正常和模型组家兔灌胃等体积纯水,EEEA-L和EEEA-H组家兔分别灌胃0.156和0.623 g/kg EEEA,Dex组灌胃0.2 mg/kg Dex,Dex+EEEA-H组灌胃0.2 mg/kg Dex+0.623 g/kg EEEA,每天1次。分别于第0、7和14天耳缘静脉采血2 mL用于检测电解质、肾功能[血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)]、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素2/6(IL-2/6)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等。第14天采血后,以3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)耳缘静脉麻醉,取出肾脏,病理学观察及肾组织Paller评分,RT-qPCR和Western blot检测转化生长因子β受体1(TβR1)、Smad2/3和核因子κB(NF-κB)P65的mRNA和蛋白表达。结果:EEEA各组血清K+、Cl−、BUN、SCr、IL-2/6、TGF-β_(1)、TNF-α和MDA水平及肾组织Paller评分均显著低于模型组,而SOD活性高于模型组(P<0.05),且这种作用高剂量显著强于低剂量(P<0.05);病理学也证实EEEA各组较模型组明显好转,较Dex+EEEA-H组肾小管扩张明显;EEEA各组的SOD和MDA水平与Dex+EEEA-H无显著差异(P>0.05);EEEA各组和Dex+EEEA-H组TβR1和NF-κB P65的mRNA和蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),EEEA-H组与Dex+EEEA-H组无显著差异(P>0.05)。结论:EEEA对RIRI家兔的肾功能有保护作用,其机制可能与其多成分多靶位互补作用,阻止了氧化应激反应并抑制了TNF-α-NF-κB和TβR1-Smad2/3信号通路有关。

SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

目的:动态观察核转录共抑制因子SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化,探讨其在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用。方法:SD大鼠随机分为3组,分别为糖尿病2周(DM2)、4周(DM4)和8周(DM8)组,每组均设相应的正常对照,链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学法检测肾组织中SnoN、TGF-β1、Smad2/3、APC的表达;Western印迹法检测肾皮质SnoN蛋白的水平;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量;光镜检查肾组织的形态改变。结果:Western印迹和免疫组化检测发现DM2大鼠肾组织中SnoN的表达与正常组相比差异无显著,DM4组明显减少(P<0.01),至8周时减少为正常对照组的42%。DM2组,大鼠肾小管上皮细胞中TGF-β1、Smad2/3、APC较正常组显著增多,并随病程进展而增加(P<0.01);DM4和DM8组,SnoN蛋白表达的减少与TGF-β1、Smad2/3、APC表达增多呈显著负相关(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠肾脏TGF-β1表达增多,可能通过APC依赖的泛素化作用使SnoN蛋白降解,从而在DN的发病机制中起重要作用。

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的:研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾纤维化大鼠TGF-β1-Smad通路的影响,借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法:雄性SD大鼠18只随机分为3组,假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量;HE染色和电镜观察肾组织病变;采用RT-PCR检测肾组织TGF-β1 mRNA水平;蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体(TβRI)、转化生长因子II型受体(TβRII)、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多;病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多;肾组织TGF-β1mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较,中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少;肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻;肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论:抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路,抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化,减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。